Escuela celular | ¿Cómo induce la diferenciación la THP-1 (leucemia monocítica humana)?
En este número, Punosai resume los tipos de diferenciación y operaciones experimentales específicas para cada uno.
THP-1 se diferencia en macrófagos.
Los macrófagos son importantes células efectoras inmunes y desempeñan un papel importante en la inmunidad innata y las respuestas inmunes adaptativas. También es una célula muy heterogénea que puede activarse en diferentes tipos y exhibir diferentes fenotipos y funciones bajo la influencia del microambiente local. Los macrófagos se dividen en dos categorías: macrófagos M1 y macrófagos M2 debido a su heterogeneidad en diferentes entornos tisulares y condiciones fisiológicas y patológicas.
Las células THP-1 generalmente son inducidas a diferenciarse en macrófagos mediante éster de forbol (PMA), y luego, cuando el PMA todavía está presente:
Lipopolisacárido (LPS) (100 ng/mL) y Se cultivaron IFN-γ (20 ng/ml) durante 48 horas para inducir la polarización a M1.
Se cultivaron IL-4 (20 ng/mL) e IL-13 (20 ng/mL) durante 48 horas para inducir su polarización a M2.
Finalmente, las células resuspendidas se pueden cultivar con RPMI-1640 libre de suero durante 72 horas en ausencia de estimulantes y PMA.
Figura 1. Los macrófagos se diferencian en M1 y M2.
PMA induce THP-1:
Las células THP-1 en la fase de crecimiento logarítmico se centrifugaron y cultivaron con RPMI-1640.
Agregue PMA, cuente las células bajo un microscopio y ajuste la densidad celular de THP-1 a 5×105/ml.
Haga que la concentración final de PMA sea de 100 ng/ml; e inocular las células. Añadir 2 ml de células a cada pocillo de una placa de seis pocillos; 48 horas después, se construyeron macrófagos con éxito bajo un microscopio.
Después de ser inducido por PMA, el monocito THP-1 cambió de un crecimiento suspendido a un crecimiento adherente, de forma redonda a irregular, aumentó aún más en volumen, citoplasma suelto y núcleo significativamente agrandado. orgánulos obvios y una pequeña cantidad de protuberancias alrededor de la membrana celular.
Figura 2. PMA induce la diferenciación de THP-1 en macrófagos.
THP-1 se diferencia en células espumosas.
Se puede inducir a las células THP-1 a diferenciarse en macrófagos. Los macrófagos pueden convertirse en células espumosas al ingerir grandes cantidades de lípidos, lo que también es la causa de la aterosclerosis.
Después de que PMA induce las células THP-1 a macrófagos, se prepara lipoproteína de baja densidad oxidada OX-LDL en medio de cultivo RPMI-1640. La concentración final es de 80 mg/l y se añade a un medio de cultivo de seis. Placa de pocillos Medio, el volumen de cada pocillo es de 2mL y la intervención es de 24 horas.
Procedimiento de tinción con Oil Red O:
OX-LDL indujo macrófagos derivados de monocitos durante 24 horas. La observación bajo un microscopio invertido mostró que el tamaño de los macrófagos aumentaba aún más y la membrana celular. procesos Los palpos están obviamente formados, el citoplasma está agrandado y suelto, y se puede ver una gran cantidad de orgánulos y gotitas de lípidos fagocíticos. Después de la tinción con Oil Red O, se vio una gran cantidad de material de tinción roja en el citoplasma.
Figura 3. Macrófagos inducidos por OX-LDL, rojo aceite o tinción.