Informe experimental del servicio de desarrollo de tiras reactivas de oro coloidal - Zhongding Biotech

Informe experimental

Resumen

Etiquete el anticuerpo primario (anticuerpo monocatenario) contra el oro coloidal, fije el antígeno a la tira reactiva y determine mediante método de competición Detecta el antígeno en la muestra a analizar. Requisitos: La sensibilidad de detección alcanza los 5 μg/ml.

1 Reactivos y consumibles

Nombre Nombre de la empresa Nombre de la empresa Empresa

Una inyección de α2b 20μg/mL, anticuerpo marcado con oro: anticuerpo monocatenario, control de calidad línea Proteína recubierta: anticuerpo marcador, proteína de línea de detección: antígeno el cliente proporciona papel absorbente, placa inferior, fibra de vidrio (almohadilla de liberación de etiqueta dorada), fibra de vidrio (almohadilla de cromatografía de muestra), membrana de nitrocelulosa Solución de oro coloidal Millipore, solución de bloqueo, solución de reconstitución de oro Nanjing Zhongding Biotech

2 Principales materiales de instrumentos experimentales

Nombre del instrumento empresa Nombre del instrumento empresa

Centrífuga: tipo Mini-14k Hangzhou Aosheng Instrument Co., Ltd. sistema de punto de pulverización de la empresa (trazador de película): HM3030, máquina de corte: ZQ2002 Shanghai Gold Label

3 pasos experimentales

3.1 Marcado

Tome 1 lavado de 1,5 ml centrífuga el tubo dos veces con agua ultrapura, agregue 1 ml de oro coloidal al tubo, agregue 14 µl de carbonato de potasio 0,2 M al tubo, agite el tubo para mezclar uniformemente, agregue 8 µg de anticuerpo monocatenario, mezcle y reaccione durante 20 minutos. Añadir 200 l de BSA al 10% para bloquear la reacción durante 20 min. Centrifugar a 11000r/min durante 20min. Deseche el sobrenadante, vuelva a disolver el precipitado con 2 ml de solución de redisolución de oro y extiéndalo sobre una almohadilla de oro de 6 mm × 300 mm para que se seque.

3.2 Película puntual

Diluir el antígeno proporcionado por el cliente a 2 mg/mL, rociarlo sobre la membrana NC con un aplicador de película como línea de detección y diluir el anticuerpo marcado proporcionado. por el cliente a 0,6 mg/ml, rocíe puntos sobre la membrana NC como línea de control de calidad y seque en una estufa de secado a 55°C durante 2 horas.

3.3 Montaje y detección

Pegue el papel absorbente, la película NC, la almohadilla dorada (dos capas) y la almohadilla de cromatografía de muestras en la placa inferior de arriba a abajo y córtelas con una máquina cortadora La tira reactiva de 4 mm de ancho se carga en el estuche de la tarjeta para realizar la prueba.

3.4 Prueba de verificación y sensibilidad de anticuerpos marcados con oro

El método de detección consiste en utilizar diluyente de muestra para diluir una inyección de α2b en una proporción de 1:1 y luego tomar 60 μL. de la muestra diluida Déjela caer en el orificio de muestra de la tira reactiva y lea el resultado después de 10 minutos.

Figura 1 Diferentes concentraciones de A α 2b y resultados del control negativo

1: Solución de dilución de muestra

2: 0,5 μg/mL de A α2b

3: 2,5 μg/mL A α2b

En la Figura 1, las líneas CT de la tira reactiva de la izquierda son relativamente obvias, la posición de la línea T del No. 2 no está completamente inhibida y la posición de la línea T del No. 3 está básicamente inhibida por completo. La tira reactiva detecta la recombinación. La sensibilidad del interferón alfa 2b humano es de alrededor de 5 μg/ml.

3.5 Prueba de estabilidad acelerada

Las tiras reactivas fabricadas con el método anterior se colocaron en un ambiente a 37 °C durante 3 días y 7 días, y luego se sacaron para analizar los resultados. se muestran en la Figura 2 y la Figura 3.

Figura 2 Resultados de la prueba con tira reactiva a 37 °C durante 3 días

1: 2,5 μg/mL A α 2b

2: 0,5 μg/mL A α 2b

3: Diluyente de muestra

Figura 3 Resultados de la prueba con tira reactiva a 37°C durante 7 días

1: Diluyente de muestra

2 : 0,5 μg/mL A α 2b

3: 2,5 μg/mL A α 2b

Como se puede observar en las Figuras 2 y 3, el efecto de las tiras reactivas almacenadas a 37°C durante 7 días no hay mucho impacto en el rendimiento de la detección.

4 Discusión y análisis de resultados

Después de los experimentos anteriores, la sensibilidad de la tira reactiva para detectar la inyección de interferón α 2b humano recombinante es de aproximadamente 5 μg/ml. La tira reactiva está sellada. a 4°C se puede almacenar de forma estable durante unos 6 meses.

Sitio web oficial de Nanjing Zhongding Biotechnology