¿Cuál es el principio experimental del método de teñido con tinta roja?

Experimento 7 Determinación rápida de la viabilidad de las semillas La viabilidad de las semillas (viabilidad de las semillas) se refiere a la capacidad potencial de las semillas para germinar o la vitalidad de los embriones de las semillas. Los experimentos de germinación se utilizan a menudo para medir la viabilidad de las semillas, es decir, en condiciones adecuadas, se permite que las semillas absorban agua para germinar y se cuenta el porcentaje de semillas germinadas dentro de un tiempo específico. Sin embargo, se necesita mucho tiempo para medir la viabilidad de las semillas mediante experimentos de germinación. A veces, en la producción o en el proceso de comercio de semillas, es necesario conocer la viabilidad de las semillas rápidamente, y los experimentos de germinación no pueden cumplir con estos requisitos. Además, aunque las semillas en estado latente no pueden germinar, todavía tienen vitalidad. Obviamente, la vitalidad de las semillas latentes no se puede medir mediante experimentos de germinación. La viabilidad de las semillas se puede determinar rápidamente utilizando los siguientes métodos químicos. 1. Principio experimental del método TTC El método TTC inventado por G. Lakon de Alemania es simple y práctico. Su principio es: las semillas viables pueden sufrir un metabolismo respiratorio y el hidrógeno catalizado por la deshidrogenasa en la vía del metabolismo respiratorio puede ser incoloro 2. El cloruro de 3, 5-trifeniltetrazolio (TTC para abreviar) se reduce a formazán rojo e insoluble, y cuanto más fuerte es la vitalidad de la semilla, mayor es su actividad metabólica. Cuanto más vigorosa es, más oscura se tiñe de rojo. Las semillas muertas no devuelven el color rojo al TTC ya que no tienen respiración. Si la viabilidad del embrión de la semilla disminuye o se pierde parcialmente, la tinción será más clara o parcialmente teñida. Por lo tanto, la viabilidad de las semillas se puede determinar en función de la ubicación del embrión teñido y la profundidad de la tinción. Materiales experimentales: frijol mungo, arroz, trigo, maíz, colza u otras semillas de plantas. Instrumentos y equipo: Termostato, cuenco pequeño de porcelana blanca, pinzas, cuchilla, vaso pequeño. Reactivos y fármacos: Solución de TTC al 0,5%: Pesar 0,5 g de TTC en un vaso pequeño, agregar un poco de etanol para disolverlo y luego diluirlo con agua destilada para ajustar el volumen a 100 ml. Es mejor preparar la solución TTC tan pronto como se use y no se debe almacenar por mucho tiempo. La solución debe almacenarse protegida de la luz. Si se pone rojo, ya no se puede utilizar. Pasos experimentales?6?1 Remojo de semillas: Remoje las semillas que se van a probar en agua tibia (30 ℃ ~35 ℃) durante 2 a 6 horas para que se hinchen por completo. ?6?1 Desarrollo del color: seleccione al azar 100 semillas embebidas, retire con cuidado la cubierta o cáscara de la semilla, asegúrese de no dañar el embrión de la semilla. Luego coloque las semillas tratadas en un recipiente pequeño de porcelana blanca, agregue una solución de TTC al 0,5% y mantenga las semillas en una caja de temperatura constante (30 ℃ ~ 35 ℃) durante 0,5 ~ 1 h hasta que las semillas estén sumergidas. Tome otras 100 semillas hinchadas, hiérvalas en agua hirviendo durante 5 minutos y luego agregue una solución de TTC al 0,5% para teñir. ?6?1 Estadísticas: Debe identificarse inmediatamente después del teñido, ya que se desvanecerá si se deja por mucho tiempo. Vierta la solución TT C, enjuague las semillas 1 o 2 veces con agua limpia y observe la tinción de los embriones. Si todos o la mayoría de los embriones están teñidos de rojo, son semillas viables; si los embriones no están teñidos, son semillas muertas. Si se tiñen partes no críticas del embrión de la semilla (como parte del cotiledón), pero no se tiñe la radícula o la punta del embrión, las semillas no pueden germinar normalmente. La viabilidad de las semillas hervidas y crudas se determinó según los criterios anteriores. 2. Principio experimental del método de tinción con tinte La membrana protoplásmica de las células vivas es semipermeable (selectivamente permeable) y puede absorber selectivamente sustancias externas (útiles), mientras que las células muertas han perdido esta capacidad. Generalmente, los colorantes no son sustancias necesarias para la vida celular y, por lo tanto, no pueden ingresar a las células vivas. Según este principio, las personas pueden utilizar la tinción con tinte para identificar la vitalidad de las semillas: en las semillas viables, las células embrionarias no dejan entrar el tinte, por lo que no se tiñen, mientras que en las semillas que han perdido su vitalidad, la membrana plasmática; de las células embrionarias Con la pérdida de permeabilidad selectiva, el tinte puede entrar libremente en las células, tiñendo así el embrión. Por lo tanto, la viabilidad de las semillas se puede juzgar en función de si el embrión está teñido. Materiales experimentales: arroz, maíz, soja, algodón, trigo o algunas semillas de árboles. Instrumentos y equipo: vaso pequeño, hoja de afeitar, pinzas. Reactivos: 0,02% ~ 0,2% de solución de isatina o 5% de tinta roja (rojo ácido G). Los pasos experimentales son los mismos que los del método TTC.

Notas ?6?1 La concentración del tinte debe ser adecuada y el tiempo de teñido no debe ser demasiado largo (si se tiñe con tinta roja, solo de 5 a 10 minutos es suficiente), de lo contrario será difícil distinguir si está teñido. O no. ?6?1 El método de teñido con tinte se utiliza para determinar la viabilidad de las semillas. El método de teñido con índigo se utiliza ampliamente para determinar la viabilidad de las semillas de cereales, frijoles, cáñamo, melones, crucíferas, algodón, árboles frutales y árboles. Arbustos Determinación. 3. Principio experimental del método de reacción del yoduro de potasio Durante el proceso de germinación de ciertas semillas (Pinus, abeto y alerce), se formará almidón que se acumulará en el embrión. El almidón produce una reacción azul bajo la acción del reactivo de yodo, por lo que la viabilidad de la semilla se puede juzgar en función del grado de reacción azul en el embrión. Materiales experimentales Semillas de abeto, pino y alerce. Los instrumentos y equipos: placas de vidrio, placas de Petri, papel de filtro y otros suministros son los mismos que los del método TTC. Reactivos y fármacos: Solución de yodo y yoduro de potasio: disuelva 1,3 g de yoduro de potasio en agua, luego agregue 0,3 g de yodo cristalizado y luego ajuste el volumen a 100 ml. Pasos experimentales?6?1 Remojar las semillas en agua durante 18 horas. ?6?1 Sáquelo y colóquelo en una placa de Petri forrada con papel de filtro húmedo y coloque la placa de Petri en una incubadora a 30 °C. Las semillas de pino y abeto se dejan durante 48 horas y las de alerce, 72 horas. ?6?1 Corte el embrión con una hoja de afeitar, luego sumérjalo en una solución de yodo y yoduro de potasio durante 20 a 30 minutos. Saque el embrión, enjuáguelo con agua durante 12 minutos y luego obsérvelo en una placa de vidrio revestida. con papel blanco. ?6?1 El estándar para identificar la viabilidad de las semillas es: todos los embriones de semillas viables se tiñen de negro a gris en diversos grados, o la radícula es marrón y los cotiledones son amarillos. Todo el embrión de las semillas no viables se tiñe de amarillo, o los cotiledones son grises o negros, la radícula es amarilla o el extremo de la radícula es negro o gris, mientras que otras partes son amarillas. ?6?1 Este método es adecuado para la determinación de la viabilidad de semillas de Pinus, Picea y Larix. 4. Principio experimental del método de fluorescencia Las semillas de plantas a menudo contienen algunas sustancias que pueden producir fluorescencia bajo irradiación ultravioleta, como ciertos flavonoides, cumarinas, sustancias fenólicas, etc. Durante el proceso de envejecimiento de las semillas, la estructura y composición de estas sustancias fluorescentes a menudo cambian, por lo que el color de la fluorescencia también cambia en consecuencia en el proceso de envejecimiento y muerte de algunas semillas, aunque la estructura y composición de las sustancias fluorescentes no cambian; debido a La viabilidad disminuye y la permeabilidad protoplásmica de las células aumenta. Cuando las semillas se remojan, las sustancias fluorescentes de las células pueden filtrarse fácilmente. Por tanto, la viabilidad de la semilla puede identificarse observando directamente el color de la fluorescencia del embrión según la primera situación, o observando la cantidad de material fluorescente que se filtra según la última situación. Materiales experimentales: Semillas de plantas a probar, instrumentos y equipos: lámpara UV, papel blanco (no fluorescente), cuchilla, pinzas, placa de Petri, vaso de precipitados. Pasos experimentales ?6?1 Método de observación directa Este método es adecuado para identificar la viabilidad de semillas de cereales, coníferas y algunos árboles frutales de Rosáceas, pero las diferencias entre especies son grandes. Use una hoja de afeitar para cortar las semillas por la mitad a lo largo de la línea central de las semillas, coloque el lado cortado hacia arriba sobre papel blanco no fluorescente, colóquelo bajo una luz ultravioleta, observe y registre. Las semillas viables producirán fluorescencia azul brillante, azul violeta o azul verdoso bajo la luz ultravioleta; las semillas muertas que han perdido su vitalidad aparecerán en su mayoría amarillas, marrones o incluso opacas bajo la luz ultravioleta, con varias manchas. Seleccione al azar 20 semillas para probar, observe de acuerdo con el método anterior y registre el número de semillas viables y no viables, y luego calcule el porcentaje de semillas viables. Al mismo tiempo, también se realizó una prueba de germinación convencional paralela y se calculó la tasa de germinación como control. ?6?1 Use fluorescencia en papel para seleccionar al azar 50 semillas intactas, colóquelas en un vaso de precipitados y agregue agua destilada para remojarlas durante 10 a 15 minutos para permitir que las semillas se hinchen, luego escurra las semillas y colóquelas en papel de filtro húmedo. a una distancia de 0,5 cm (no debe haber demasiada humedad en el papel de filtro para evitar la evacuación de sustancias fluorescentes), cúbralo con una placa de Petri y déjelo reposar durante unas horas, luego seque el papel de filtro al aire ( o las semillas que se le coloquen) (o secarlo con un secador de pelo). Cuando se coloca bajo luz ultravioleta, se puede ver un círculo de fluoróforos brillantes que rodean las semillas muertas, pero no existe tal fenómeno alrededor de las semillas viables. Según la cantidad de fluoróforos que aparecen en el papel de filtro, se puede medir la cantidad de semillas que han perdido su vitalidad y calcular el porcentaje de semillas viables. Además, al mismo tiempo se puede realizar una prueba de germinación de semillas convencional paralela y se puede calcular la tasa de germinación como control.

Este método es muy eficaz para identificar la viabilidad de las semillas de repollo, rábano y otras plantas crucíferas. Sin embargo, este método no es aplicable a algunas semillas que se debilitan o pierden fluorescencia después del envejecimiento o la muerte. Por lo tanto, sólo el método de observación directa es adecuado para ellas. Pregunta: ¿Cuál es la base teórica para la determinación rápida de la viabilidad de las semillas mediante el método TTC, el método de tinción con tinte, el método de reacción de yoduro de potasio y el método de fluorescencia? ¿A qué se debe prestar atención en las operaciones experimentales de varios métodos?