¿A qué se debe prestar atención al preparar el homogeneizado de tejido? ¡urgente!

1. Tomar al menos 2 ~ 5 mg de bloque de tejido (0,2 g ~ 1 g), enjuagar con solución salina fría, extraer la sangre, secar con papel de filtro, pesar y colocar en un vaso de precipitados pequeño de 5 o 10 ml.

2. Utilice una pipeta para medir el medio de homogeneización preenfriado (pH 7,4, 0,01 mol/L de tris-HCl, 0,0001 mol/L de TA-2na, 0,01 mol/L de solución de cloruro de sodio 0,8 de sacarosa). o utilizar solución salina fría 0,86, medio de homogeneización o solución salina. Utilice una pipeta o pipeta para tomar 2/3 del medio de cultivo homogeneizado total o solución salina fisiológica en un vaso de precipitados, y utilice unas tijeras para cortar el bloque de tejido lo más rápido posible (naturalmente, la operación debe realizarse en agua helada). baño y un pequeño vaso que contiene el tejido en agua helada).

3. Existen muchos métodos de homogeneización: homogeneización manual, homogeneización mecánica, homogeneización ultrasónica y congelación y descongelación repetidas.

Homogeneización manual: Verter el tejido cortado en un tubo de homogeneización de vidrio, luego enjuagar el 1/3 restante del medio de homogeneización o suero fisiológico en el vaso de precipitado, verterlo en el tubo de homogeneización y homogeneizar. Sostenga el tubo del homogeneizador con la mano izquierda e inserte el extremo inferior en el recipiente que contiene la mezcla de agua helada. Inserte el prensador verticalmente en la manga con la mano derecha, muélelo hacia arriba y hacia abajo docenas de veces (6-8 minutos) y muélelo bien para que el tejido quede uniforme.

Homogeneización mecánica: 10 segundos/tiempo, intervalo de 30 segundos, 3-5 veces seguidas, piel, músculo, etc. , muela hacia arriba y hacia abajo con un triturador de tejidos a 1000 r/min y se pueden preparar 10 homogeneizados de tejidos.

Pulverización ultrasónica: Utilice un pulverizador ultrasónico para pulverizar las células. Para tratamiento ultrasónico se puede utilizar el generador ultrasónico sonipp 150, con una amplitud de 14 micras, 30 segundos, o un generador ultrasónico doméstico, 40 amperios, 5 segundos/tiempo, intervalo de 10 segundos, de 3 a 5 veces.

Congelación y descongelación repetidas: las células cultivadas o aisladas se pueden homogeneizar mediante el método anterior, o congelarse y descongelarse repetidamente aproximadamente 3 veces (es decir, las células se deben congelar, disolver, volver a congelar y rehidratar con una cantidad adecuada). de solución hipotónica o agua bidestilada). Disolver y repetir aproximadamente 3 veces), pero algunas actividades enzimáticas se verán afectadas.

Tome una pequeña cantidad de homogeneizado de tejido como frotis (frotis directo o tinción) y observe si las células se desgastan bajo un microscopio. Si no están dañados se puede ampliar el tiempo de homogeneización o aumentar los tiempos de congelación y descongelación.

4. Centrifugar el homogeneizado al 10% preparado en una centrífuga ordinaria o en una centrífuga de baja temperatura y baja velocidad a aproximadamente 3000 r/min durante 10 a 15 minutos. Si se detecta ATPasa, simplemente centrifugue a 1000 rpm durante 5 minutos y deje que el sobrenadante del homogeneizado centrifugado precipite.

Según sus necesidades experimentales, tómese una cantidad adecuada de noches despejadas para realizar diversas mediciones.

De la biblioteca de Baidu