Cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina consiste en extender uniformemente una capa de adsorbente o agente de soporte sobre una placa de vidrio limpia (aproximadamente 10 × 3 cm). Después del secado, la solución de muestra activada se deja caer usando un tubo capilar plano de aproximadamente 1 cm. desde el extremo de la línea de inicio de la placa de capa fina. Después de secar o secar con secador, coloque el agente revelador en la placa de capa fina en el tanque de revelado. La profundidad de inmersión es de 0,5 cm cuando el borde frontal del agente revelador esté a aproximadamente 1 cm. la parte superior de la placa, colóquela, sáquela, séquela y luego rocíela con colorante o revele bajo una lámpara UV. Cuando el borde frontal del agente revelador esté aproximadamente a 1 cm de la parte superior, retire la placa cromatográfica, rocíela con colorante después del secado o revele bajo una lámpara UV. Introducción básica Nombre chino: Cromatografía en capa fina Nombre extranjero: (Cromatografía en capa fina) Alias: Cromatografía en capa fina Atributos de clasificación: Principios de técnicas experimentales para la separación rápida de pequeñas cantidades de sustancias, procedimientos experimentales, precauciones, tendencias de desarrollo, láminas de caucho, principios y Principios básicos de la cromatografía El principio básico del método es utilizar el efecto de adsorción de sustancias en cada componente de la mezcla. El principio básico de la cromatografía es hacer uso de las diferentes propiedades de adsorción o solubilidad de cada componente de una mezcla en una determinada sustancia, o la diferencia en las propiedades de afinidad con otras sustancias, de modo que la solución de la mezcla fluya a través de la sustancia durante repetidos adsorción o distribución, etc., para separar los componentes. La cromatografía en capa fina es un método de cromatografía de microvolúmenes, rápido y sencillo. Dado que la polaridad de varios compuestos es diferente, la capacidad de adsorción también es diferente y la resolución del agente en movimiento es diferente según la distancia desde el origen al centro del punto principal y el borde del agente revelador, el específico. Se calcula el valor de cambio (Rf): la capacidad de adsorción del compuesto es directamente proporcional a su polaridad. Cuanto más polar es el compuesto, más fuerte es la fuerza de adsorción, por lo que menor es el valor de Rf. En condiciones dadas (adsorbente, agente revelador, espesor de la placa, etc.), la relación entre la distancia recorrida por el compuesto y la distancia recorrida por el agente revelador es constante, es decir, el valor Rf es una constante física del compuesto. y su tamaño sólo está relacionado con la estructura del compuesto en sí, por lo que los compuestos pueden identificarse en función de sus valores de Rf. La cromatografía en capa fina se puede utilizar para separar pequeñas cantidades de muestras (desde unos pocos microgramos hasta decenas de microgramos, o incluso 0,01 microgramos): también se puede utilizar para separar muestras de hasta 500 mg y es un medio importante de caracterización y cuantificación en química orgánica moderna. Es especialmente adecuado para aquellos compuestos que son menos volátiles y sustancias propensas a cambios químicos a altas temperaturas y no pueden analizarse mediante cromatografía de gases. Pasos experimentales: Ampliar la placa. Amplificación dirigida. Desarrollo de color. Calcular el valor de Rf. Ampliar la placa de aproximadamente 7,5x2,5 cm, lavarlas y secarlas. En un vaso de precipitados de 50 ml, coloque 3 g de gel de sílice G, agregue gradualmente 8 ml de solución acuosa de carboximetilcelulosa (CMC) de sodio al 0,5 %, mezcle hasta obtener una pasta uniforme, aplíquela en el portaobjetos de vidrio limpio anterior y use las manos para esparcir la pasta. Gire ligeramente el portaobjetos del objeto sobre una mesa horizontal para hacer una placa de capa delgada, gruesa, uniforme y de superficie lisa. Coloque la placa de capa delgada recubierta con gel de sílice G sobre una placa de vidrio horizontal y colóquela en la habitación. temperatura para 0. Colóquelo en una placa de vidrio horizontal a temperatura ambiente durante 0,5 h, luego póngalo en un horno, aumente lentamente la temperatura a 110 ° C, manténgalo a temperatura constante durante 0,5 h, sáquelo, enfríelo un poco. y colocarlo en un desecador para su uso posterior. El capilar de detección utiliza un capilar de boca plana con un diámetro interior de <1 mm. Disuelva la muestra en un disolvente con un punto de ebullición más bajo (éter dietílico, acetona, etanol, tetrahidrofurano, etc.) para formar una solución. Antes de detectar, primero puede usar un lápiz para dibujar ligeramente una línea horizontal de 5 mm desde un extremo de la pequeña tabla de madera como línea de inicio, y luego usar un capilar para absorber la muestra y colocar cuidadosamente la muestra en la línea de inicio. Si es necesario repetir el manchado, se debe esperar hasta la vez anterior. Una vez evaporado el disolvente para el manchado, se vuelve a concentrar. Si hay varias muestras en la misma placa, la distancia entre los puntos de muestra debe ser superior a 5 mm. La elección del agente desplegador se basa principalmente en factores como la polaridad de la muestra, la solubilidad y la actividad adsorbente. El desarrollo de la capa fina se realiza en un recipiente cerrado. Primero seleccione un agente revelador y colóquelo en un frasco. Deje que el aire del frasco se sature durante 5 a 10 minutos. Luego coloque las rodajas de muestra en el frasco y expanda. La posición de la muestra debe estar por encima del nivel del líquido. el agente revelador cuando el agente revelador suba hasta el borde de la capa delgada (5 ~ 10 mm desde el extremo frontal) o cuando los múltiples componentes estén obviamente separados, saque la capa delgada, séquela y raspe con un lápiz. ! Una vez alcanzada la posición frontal del disolvente, se puede desarrollar el color. Si el compuesto en sí está coloreado, sus manchas se pueden observar directamente.

Si es incoloro, primero puede observar si hay manchas fluorescentes (hay sustancias de anillo de benceno) bajo luz ultravioleta y usar un lápiz para marcar la ubicación de las manchas en la placa de capa delgada para aquellas que no muestran color debajo; luz ultravioleta, puedes guardarlos. Desarrolla el color en un recipiente que contenga una pequeña cantidad de vapor de yodo para comprobar si hay manchas (debido a que muchos compuestos pueden reaccionar con el yodo y convertirse en manchas de color amarillo-marrón, marca inmediatamente el color). Ubicación de la mancha con un lápiz. Calcule el valor de Rf Encuentre con precisión el origen, el frente del solvente y el centro del punto después de expandir la muestra, mida la distancia que se mueven el frente del solvente y el punto en la placa de capa delgada respectivamente y calcule su valor de Rf. Notas: 1. Debido a que es una tabla seca, sus manos deben estar suaves al colocar la tabla, de lo contrario se volverá desigual fácilmente. 2. Al detectar, varios puntos deben estar en línea recta, el tamaño debe ser apropiado (el diámetro de la punta generalmente no excede los 2 mm) y el espacio debe ser de 5 a 6 mm. 3. Los capilares no se pueden utilizar en forma transversal al detectar. 4. Debido a que la solución es demasiado líquida, si un punto de inyección no es suficiente para repetir el punto de inyección, debe esperar a que se evapore el disolvente en el punto de inyección anterior antes de enfocar para evitar que el punto de inyección sea demasiado grande, lo que provocará colas. Difusión y otros fenómenos que afectarán el efecto de separación. 5. Las puntas de muestra sólo se pueden desplegar después de que estén secas. Ponga puntos en el patrón ligeramente y no perfore la capa delgada. 6. Tus manos deben estar firmes al colocar el tablero, de lo contrario habrá líneas diagonales. Instrumentos y reactivos necesarios para preparar placas de capa fina Vaso de precipitados (50 ml), portaobjetos de vidrio, varilla de vidrio, solución acuosa de carboximetilcelulosa (CMC) de sodio al 1%, gel de sílice G, agua desionizada Notas: 1) La temperatura ambiente no debe ser demasiado alta, especialmente Humedad 2) La proporción de gel de sílice y agua debe ser adecuada: 2,5-4,5 es la mejor. Puede ajustarlo según la viscosidad de su propia muestra. 3) Al moler, sea uniforme y paciente, y no tenga miedo de tomar tiempo. 4) Al activar, tenga cuidado de no ser molestado durante el proceso de activación. ) Triturar con cuidado, mezclar uniformemente y evitar pavimentar. Las burbujas deben tener un espesor uniforme. Tendencia de desarrollo La cromatografía de capa fina moderna ha sido reemplazada básicamente por varios instrumentos, eliminando muchos factores que influyen en el proceso experimental. Esta es también una tendencia importante en el desarrollo de la ciencia y la tecnología nacionales, que reemplaza gradualmente la influencia de los factores humanos en el proceso experimental, logrando así resultados reproducibles. También existen varios entornos en términos de entornos, incluida una amplia gama de entornos en productos farmacéuticos, alimentos, productos sanitarios, cosméticos, medicina forense, piensos, industria, etc. Placas encoladas La colocación manual de las placas de cromatografía lleva mucho tiempo, por lo que, para mayor comodidad, las placas de cromatografía estándar se pueden comprar directamente en el mercado. Las placas de cromatografía comerciales generalmente están marcadas con G, H, GF y HF; G representa coagulante, H no contiene coagulante y el precio de G es generalmente más bajo que H representa fluorescencia. muy por detrás de los países extranjeros. Si la brecha es grande, no se recomienda utilizar placas de cromatografía comerciales nacionales (el tamaño de las partículas del gel de sílice es grande y la uniformidad no es lo suficientemente alta). Gel de sílice G: contiene entre un 13 % y un 15 % de yeso calcinado. Gel de sílice H: gel de sílice puro. Gel de sílice GF: agente fluorescente 254 y aglutinante. Aglutinante CMC: carboximetilcelulosa sódica