Reactivos bioquímicos para inhibidores de proteasa

Las proteasas se liberan cuando las células se rompen para extraer proteínas, y es necesario inhibirlas rápidamente para evitar la degradación de las proteínas. Durante la extracción de proteínas, se requieren inhibidores de proteasa para prevenir la hidrólisis de proteínas. A continuación se enumeran cinco inhibidores de proteasa comúnmente utilizados y sus respectivas características de acción. Dado que cada proteasa tiene diferentes sensibilidades a diferentes proteínas, es necesario ajustar la concentración de cada proteasa. Dado que la solubilidad de los inhibidores de proteasa en líquidos es extremadamente baja, se debe prestar especial atención a mezclar bien el tampón al agregar inhibidores de proteasa para minimizar la precipitación de los inhibidores de proteasa.

PMSF

1) Inhibe serina proteasas (como quimotripsina, tripsina, trombina) y tiol proteasas (como papaína

2) 10 mg/ ml disuelto en alcohol isopropílico;

3) Puede almacenarse a temperatura ambiente durante un año

4) Concentración de trabajo: 17~174ug/ml (0,1~1,0 mmol/L) ;

5) Es inestable en solución acuosa y se debe agregar PMSF fresco durante cada separación y purificación. Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)

1) Inhibe la metaloproteinasa;

2) Solución acuosa de 0,5 mol/L, pH 8~9;

3) La solución es estable durante más de 6 meses a 4°C;

4) Concentración de trabajo: 0,5~1,5 mmol/L. (0,2 ~ 0,5 mg/ml);

5) Agregue NaOH para ajustar el valor del pH de la solución; de lo contrario, el EDTA no se disolverá.

Pepstantin (pepstantin)

l) inhibe las proteasas ácidas como la pepsina, la angiotensinogenasa, la histona D y el agrecano

2) 1 mg/ml soluble en metanol;

3}La solución de almacenamiento es estable durante una semana a 4°C y 6 meses a -20°C

4) 1 Concentración del agente: 0,7ug/ml (1umol/; L)

5) Insoluble en agua.

Leupeptina

1) Inhibe las serina y tiol proteasas, como la papaína, la plasmina y la histona B.

2) Soluble en agua La concentración es de 10 mg/ml; ;

3) Puede ser estable durante una semana en la solución de almacenamiento a 4°C y puede ser estable durante 6 meses en la solución de almacenamiento a -20°C;

>4) 1 La concentración de trabajo es 0,5 ug;

Inhibidor de tripsina (aprotinina)

1) Inhibe las serina proteasas, como la proteasa plasmática, la vasopresina, la tripsina y la tripsina;

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2) 10 mg/ml soluble en agua, pH 7~8

3} Estable durante una semana en solución de almacenamiento a 4°C, estable durante 6 meses a -20°C Mes;

4) Concentración de acción: 0,06~2,0ug/ml (0,01~0,3umol/L);

5) Evite la congelación y descongelación repetidas:

6 ) Inactivado a pHgt: 12,8.

Cóctel inhibidor de proteasa

35ug/ml PMSF ............................. Inhibidores de serina proteasa

0,3 mg/ml EDTA....................Inhibidores de metaloproteasa

0.7ug/ml Inhibidor de pepsina (Pepstatin) .........Inhibidor de proteasa ácida

0.5ug/ml Leupeptin (Leupeptin) ......... .. ..Inhibidor de proteasas de amplio espectro