Reactivos bioquímicos para inhibidores de proteasa
Las proteasas se liberan cuando las células se rompen para extraer proteínas, y es necesario inhibirlas rápidamente para evitar la degradación de las proteínas. Durante la extracción de proteínas, se requieren inhibidores de proteasa para prevenir la hidrólisis de proteínas. A continuación se enumeran cinco inhibidores de proteasa comúnmente utilizados y sus respectivas características de acción. Dado que cada proteasa tiene diferentes sensibilidades a diferentes proteínas, es necesario ajustar la concentración de cada proteasa. Dado que la solubilidad de los inhibidores de proteasa en líquidos es extremadamente baja, se debe prestar especial atención a mezclar bien el tampón al agregar inhibidores de proteasa para minimizar la precipitación de los inhibidores de proteasa.
PMSF
1) Inhibe serina proteasas (como quimotripsina, tripsina, trombina) y tiol proteasas (como papaína
2) 10 mg/ ml disuelto en alcohol isopropílico;
3) Puede almacenarse a temperatura ambiente durante un año
4) Concentración de trabajo: 17~174ug/ml (0,1~1,0 mmol/L) ;
5) Es inestable en solución acuosa y se debe agregar PMSF fresco durante cada separación y purificación. Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)
1) Inhibe la metaloproteinasa;
2) Solución acuosa de 0,5 mol/L, pH 8~9;
3) La solución es estable durante más de 6 meses a 4°C;
4) Concentración de trabajo: 0,5~1,5 mmol/L. (0,2 ~ 0,5 mg/ml);
5) Agregue NaOH para ajustar el valor del pH de la solución; de lo contrario, el EDTA no se disolverá.
Pepstantin (pepstantin)
l) inhibe las proteasas ácidas como la pepsina, la angiotensinogenasa, la histona D y el agrecano
2) 1 mg/ml soluble en metanol;
3}La solución de almacenamiento es estable durante una semana a 4°C y 6 meses a -20°C
4) 1 Concentración del agente: 0,7ug/ml (1umol/; L)
5) Insoluble en agua.
Leupeptina
1) Inhibe las serina y tiol proteasas, como la papaína, la plasmina y la histona B.
2) Soluble en agua La concentración es de 10 mg/ml; ;
3) Puede ser estable durante una semana en la solución de almacenamiento a 4°C y puede ser estable durante 6 meses en la solución de almacenamiento a -20°C;
>4) 1 La concentración de trabajo es 0,5 ug;
Inhibidor de tripsina (aprotinina)
1) Inhibe las serina proteasas, como la proteasa plasmática, la vasopresina, la tripsina y la tripsina;
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2) 10 mg/ml soluble en agua, pH 7~8
3} Estable durante una semana en solución de almacenamiento a 4°C, estable durante 6 meses a -20°C Mes;
4) Concentración de acción: 0,06~2,0ug/ml (0,01~0,3umol/L);
5) Evite la congelación y descongelación repetidas:
6 ) Inactivado a pHgt: 12,8.
Cóctel inhibidor de proteasa
35ug/ml PMSF ............................. Inhibidores de serina proteasa
0,3 mg/ml EDTA....................Inhibidores de metaloproteasa
0.7ug/ml Inhibidor de pepsina (Pepstatin) .........Inhibidor de proteasa ácida
0.5ug/ml Leupeptin (Leupeptin) ......... .. ..Inhibidor de proteasas de amplio espectro