Al extraer tejido de riñón de ratón para hacer secciones de parafina, ¿se puede reparar primero y luego extraer? ¿Qué precauciones se deben tomar al tomar materiales? Quiero hacer una fijación inmunohistoquímica.
Las siguientes son medidas preventivas:
1. Tiempo fijo: el tiempo fijo es generalmente de 1 a 2 horas y no debe ser demasiado largo. Una fijación demasiado prolongada provocará que el tejido se endurezca, afectando los procesos de producción posteriores.
2. Concentración del fijador y valor de pH: Se debe seleccionar la concentración y el valor de pH adecuados según el tipo de tejido y el tipo de fijador. En términos generales, la concentración de formaldehído está entre 1 y 4 y el valor de pH está entre 7,2 y 7,4.
3. Materiales: El tejido fijado debe retirarse inmediatamente. Al tomar el material, coloque la toalla de papel sobre el papel de filtro y corte la toalla de papel en trozos pequeños de aproximadamente 1-2 mm3 con una cuchilla. Al mismo tiempo, se debe tener cuidado para evitar daños mecánicos al tejido y el impacto de factores externos en el tejido.
4. Deshidratación y transparencia: Antes de realizar cortes en parafina, es necesario que el tejido esté deshidratado y transparente. Los agentes deshidratantes comúnmente utilizados incluyen etanol, acetona, etc. Los agentes transparentes de uso común incluyen xileno, etc. Este proceso debe llevarse a cabo en una incubadora, y la concentración de agente deshidratante y agente aclarador debe aumentarse gradualmente para evitar daño tisular debido a una deshidratación o aclaramiento excesivo.
5. Seccionamiento incrustado: incruste el tejido deshidratado y transparente en parafina. Después de que la parafina se solidifique, use un microtomo para cortarlo en el espesor requerido (generalmente 3-5 μm).
6. Tinción inmunohistoquímica: Las secciones requieren tinción inmunohistoquímica para mostrar los antígenos o anticuerpos requeridos. Se deben seleccionar los anticuerpos apropiados y los anticuerpos secundarios de acuerdo con el propósito del experimento y se deben seguir las instrucciones del kit.
Por último, cabe destacar que los cortes en parafina requieren desparafinado, hidratación, recuperación de antígenos y otros pasos. Consulte la literatura relevante o las instrucciones del kit para conocer los métodos de operación específicos.