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Debido a que los ratones desnudos carecen de células T, son susceptibles a infecciones bacterianas, virales y fúngicas. Si se crían con métodos animales convencionales, sólo unos pocos ratones desnudos pueden sobrevivir más de un mes, y no más de cuatro meses como máximo, mientras que los criados en aislamientos pueden sobrevivir más de un año. Por tanto, la vida útil de los ratones desnudos está estrechamente relacionada con las condiciones higiénicas del pienso. Por lo general, se propaga primero en zonas aisladas. Luego, el alimento se coloca en un ambiente sin barreras patógenas específicas.
Se debe instalar una barrera entre el animal y el mundo exterior para alimentarse en condiciones libres de patógenos. Cuanto más estrecha sea la barrera, más sanos estarán los ratones desnudos. Sin embargo, si el tipo de barrera se elige incorrectamente, no se puede garantizar su eficacia, por lo que se debe comprobar constantemente su cumplimiento de las condiciones.
1. Equipo para criar ratones desnudos en condiciones libres de enfermedades
(1) Jaula de plástico con dispositivo de filtro de aire sellado. Cada jaula es una unidad en sí misma. Consiste en una jaula de plástico transparente estándar con una tapa cubierta con material filtrante de aire. Cerca de la jaula, ésta se sella con cinta adhesiva durante varias semanas. Luego, la jaula se puede colocar en un soporte para jaulas de laboratorio estándar. El material filtrante tiene forma de lámina y está hecho de fibra de poliéster suelta (pero no tejida). Debe evitar que los microorganismos entren en la jaula desde el exterior.
Todas las jaulas están esterilizadas con vapor a alta presión. El uso y manejo de la alimentación (como adición de agua de bebida y alimento, limpieza de jaulas, destete, etc.) deben realizarse dentro de una cubierta protectora. La campana contiene aire filtrado a presión positiva. También puede ser laminar (sin turbulencias) y unidireccional.
El modo de operación anterior es el método más simple para criar animales no patógenos.
(2)Aislador de animales. Los dispositivos más comunes están hechos de una lámina flexible de plástico transparente a base de polietileno, pero también pueden estar hechos de plexiglás, acero inoxidable, revestimiento de aluminio y nailon. Los productos terminados en el mercado tienen ciertas especificaciones y los tamaños también se pueden diseñar especialmente según las necesidades. Esta es una sala de estar estéril que excluye cualquier microorganismo. El aire interior se filtra dentro y fuera de la unidad. ¿Todos los alimentos y temporadas de uso? ¿Por qué? ¿Por qué? ¿Por qué? ¿Yan Xinyi? ¿Qué pasa con la tumba ∈ Yi Leg Iliao de Xin? ¿Comer parece cobarde? ¿Lao Wei(5)? 铩w铩acilo? ¿No? ¿Por qué? ¿Explosión de Liangtou? ¿Quieres aburrirte? ¿Por qué? ¿Por qué?
En un ambiente estéril, la esperanza de vida de ratones desnudos con el mismo trasfondo genético es similar a la de los ratones heterocigotos normales. Sin embargo, Poiley et al. (1974) descubrieron que la tasa de supervivencia de los ratones recién nacidos en este entorno era menor que en entornos normales. Para acercar su función gastrointestinal a la normalidad, algunas personas sugieren que los ratones desnudos en un ambiente estéril deben ser inoculados una vez con bacterias no patógenas (Poliey et al., 1974; Eaton et al., 1975). De esta manera, a menudo mejora el rendimiento reproductivo y facilita la transferencia de ratones libres de gérmenes desde los aisladores a instalaciones de almacenamiento menos acondicionadas.
Para controlar el entorno de la forma más eficaz e intentar conservar ratones desnudos estériles (o con cierta flora bacteriana), el aislador es un dispositivo de almacenamiento ideal. Pero también tiene desventajas: requiere mucha mano de obra y el número de animales que se pueden criar en un espacio determinado es limitado.
(3)Dispositivo de flujo de aire laminar. Consta de una batería estándar, una tapa y una rejilla. Cada conjunto de electrodomésticos forma un ambiente independiente y no tiene nada que ver con el sistema de ventilación interior. Introduce aire filtrado por sí solo, inyecta completamente aire ultralimpio en la jaula de ardilla y lo descarga en fila. Debido a que cada juego de utensilios es independiente y está protegido por aire a presión positiva, se puede colocar en condiciones normales. Son portátiles y fáciles de mantener, lo que maximiza la utilización del sitio y del equipo.
El éxito de este enfoque depende de la calidad de la gestión. El atrio está estrechamente monitoreado para detectar contaminación y tráfico peatonal, y solo se permite el ingreso al personal dedicado. La jaula para ratones debe mantenerse bajo presión positiva y condiciones de flujo de aire unidireccional, y todos los elementos (alimentos, etc.) que entren en contacto con las ratas deben desinfectarse. El agua potable debe ser tratada para eliminar las bacterias. Los trabajadores de tiempo completo deben usar mascarillas, gorros, guantes y batas quirúrgicas esterilizadas. Al manipular animales, se deben utilizar pinzas con puntas de goma en las puntas y se deben remojar en etanol desnaturalizado (reservar).
(4) Cámara de flujo de aire laminar. A diferencia de los pequeños dispositivos de flujo de aire laminar mencionados anteriormente colocados en la habitación, todo el entorno de la habitación está envuelto en aire filtrado a presión positiva. Al diseñar, es necesario instalar un interruptor de entrada de aire y una luz indicadora en la entrada de aire. La vestimenta del personal interior es la anterior. La desinfección del pienso, lecho y jaulas utilizadas en el interior debe realizarse con un esterilizador de vapor de alta presión con interruptores en ambos extremos.
El método de introducción puede maximizar el uso de las casas para criar animales. Aunque es costoso instalar una sala de este tipo, la cámara de flujo laminar y las restricciones estrictas en el acceso del personal pueden garantizar la producción sin problemas de ratones desnudos durante el período de crecimiento y es la mejor manera de criar ratones desnudos en grandes cantidades. Por ejemplo, debido a su adopción, el Centro de Investigación del Cáncer de Frederick produjo más de 20.000 ratones desnudos anualmente en los últimos cinco años (1973 ~ 1977).
2. Control ambiental
(1) Temperatura. La temperatura ambiente adecuada para ratones desnudos es de 26 ~ 28°C (78 ~ 820°F). Las ratas desnudas no tienen pelo y pierden temperatura corporal más rápido que las ratas peludas. En un flujo de aire laminar continuo, disipan el calor más rápido y requieren una temperatura ambiente de alrededor de 28°C (800F) para compensar. Generalmente, la temperatura interior del alimento se puede controlar a 25 ℃ ± 65438 ± 0 ℃. Si se mantienen en la misma jaula ratones desnudos y ratones heterocigotos peludos, la temperatura ambiente puede ser ligeramente más baja. Los ratones desnudos alimentados en una cámara de flujo de aire laminar continuo necesitan aumentar la temperatura ambiente a 28°C.
(2) Humedad. La temperatura relativa debe mantenerse entre 40 y 60%, momento en el cual la pérdida de humedad de la piel de ratones adultos desnudos es mínima. La baja humedad no favorece la supervivencia de los ratones desnudos recién nacidos y es especialmente importante en un ambiente de aire laminar.
(3) Ventilación. En general, se cree que se requiere ventilación entre 65.438+00 y 65.438+05 veces por hora, y el uso de filtros de alta eficiencia (99,9%) puede garantizar una buena filtración del aire y eliminar partículas de más de 0,3μm en el aire. La salida de aire también tiene un dispositivo de filtrado (que también se puede utilizar con baja eficiencia) para evitar la contaminación del aire cuando el aire se devuelve. Primero se debe diseñar cómo mantener estos filtros desde el exterior.
En una cámara de flujo laminar, la presión positiva del aire es de al menos 0,65cmH2O. La dirección del flujo y la velocidad del aire deben controlarse de manera uniforme y libre. El aire filtrado fluye continuamente a través de la jaula y alrededor del entorno del animal, actuando en teoría como una barrera contra la contaminación externa.
(4)Luz. Se deben mantener cada día 10 horas de luz y un ciclo de luz-oscuridad de 14 horas. Evite las ventanas y utilice iluminación artificial para que la luz sea constante durante todo el año, pero evite demasiada iluminación fluorescente.
3. Jaula y acolchado
La jaula para criar ratones desnudos debe tener una superficie de suelo de 97 centímetros cuadrados (15 pulgadas cuadradas) y una altura de 12,7 centímetros (5 pulgadas). ). Fabricado en plástico o acero inoxidable que pueda soportar vapor a alta presión. Su forma debe ser fácil de superponer para su esterilización y almacenamiento. Las jaulas de plástico transparente son mejores porque puedes observar a los animales sin abrir la tapa de la jaula. El fondo de la jaula debe estar acolchado con algo y no se debe colocar ninguna red.
La jaula debe limpiarse o tratarse según sea necesario una vez por semana para garantizar un ambiente limpio y seco. Las jaulas u otros artículos lavados con detergente u otros limpiadores deben limpiarse a fondo. De lo contrario, irritará la piel de los ratones desnudos.
La arena debe estar en contacto directo con la piel de los ratones desnudos y no debe resultar irritante. Puede elegir astillas de madera dura que estén libres de polvo y astillas afiladas, rastrojos de maíz molidos o virutas de pino. Debe desinfectarse antes de su uso y solo puede usarse si no se forman grumos después de la desinfección.
Puedes utilizar algodón o papel de seda para construir un nido para ratones desnudos. Sin embargo, si la ropa de cama tiene una pulgada de espesor y la temperatura ambiente se controla adecuadamente, los ratones desnudos infectados pueden sentirse cómodos y, por lo general, no se necesita algodón o papel de seda.
4. Suministro de alimentos y agua
(1) Alimentación. Los requerimientos nutricionales de los ratones desnudos son similares a los de otras cepas de ratones. Por lo tanto, se puede utilizar cualquier alimento disponible comercialmente. Los alimentos deben estar esterilizados. Los alimentos se pueden esparcir en una sola capa y colocar en un plato pequeño o en una bolsa perforada para esterilizarlos con vapor a alta presión (45 minutos, 120°C). Antes de la esterilización, se debe aumentar la cantidad de nutrientes termolábiles (Williams et al., 1968). Además, se pueden complementar el pan integral y la leche clonada para mejorar la fertilidad y prevenir el canibalismo (Poiley et al., 1974).
(2)Bebe agua. A veces, el agua del grifo contiene pequeñas cantidades de diversas bacterias no patógenas (incluida la roya Pseudomonas). Para evitar contaminar la población de ratones desnudos a través de fuentes de agua, se recomienda superclorar el agua potable a 12 ~ 15 ppm o acidificar el agua potable con ácido clorhídrico para llevar el valor del pH a 2,5 ~ 2,8, lo que puede controlar eficazmente su Tasa de contaminación, especialmente Pseudomonas de contaminación. Si se pierden demasiadas vitaminas debido a la esterilización a alta presión, se pueden agregar múltiples vitaminas al agua potable (por ejemplo, 1 ml de varias vitaminas por 1000 ml) y la mezcla se filtra y esteriliza a través de una membrana filtrante microporosa con un diámetro de 0,2 μm La presión en pulgadas no debe exceder las 10 lbs. Las mezclas de vitaminas y el agua deben controlarse adecuadamente para detectar ciertos cultivos bacterianos y las botellas de agua deben cambiarse cada dos días. Las botellas de agua y las pipas para beber deben limpiarse y desinfectarse entre usos.
Las bacterias del tracto gastrointestinal se pueden eliminar añadiendo antibióticos al agua potable (van der Waalji, 1966). También es una medida adicional para prevenir una posible contaminación externa de ratones desnudos bajo un estricto control ambiental. Las cuatro fórmulas que utilizamos se muestran en la Tabla 4-4. Los siguientes antibióticos rara vez se absorben en el tracto digestivo y cada fórmula debe cambiarse semanalmente y rotarse cada cuatro semanas para reducir la aparición de cepas resistentes.
Si se crían ratones desnudos libres de gérmenes desde el principio en un ambiente estrictamente controlado, no se necesitan antibióticos porque la adición de antibióticos aumenta la probabilidad de errores en la técnica de reproducción.
Tabla 4-4 Tipos y dosis de antibióticos utilizados en el agua de bebida de ratones desnudos
Tiempo (semanas)
Elementos antibacterianos
Consumo
1
Bacitracina 4g/L
Neomicina 4g/L
2
Antiveneno 250 mg /L
Oxitetraciclina 500 mg/L
Tres
Bacitracina 1 g/L
Estreptomicina 1 g/L
IV
Antiveneno 250 mg/L
Ocitotraciclina 500 mg/L
Ampicilina 500 mg/L
5. de cámara de flujo laminar de aire
La cámara de flujo laminar y el equipo deben mantenerse limpios y separados desde el suelo hasta el techo. Las pruebas de esterilidad interior deben realizarse mensualmente, colocando una placa por metro cuadrado para comprobar el número de bacterias en el aire interior. Las inspecciones de colonización bacteriana varían de un país a otro, como se muestra en la siguiente tabla.
Tabla 4-5 Regulaciones sobre límites de colonias bacterianas en cámaras de flujo laminar en varios países
Unidades reguladas
Medio de cultivo de uñas plano
Tiempo de exposición (minutos)
Tiempo y temperatura de incubación
Reduce límite bacteriano
Ribon
Agar simple
5′
37℃48 horas
& lt五
Estados Unidos
Agar sangre
10′
p>〃
& lt三
Instituto de Verificación de Beijing
Agar sangre
30′
〃
& lt10
Excepto que el número de colonias no puede exceder el estándar y no debe haber bacterias patógenas, de lo contrario es necesario desinfectarlo nuevamente.
Todos los equipos móviles deben esterilizarse en autoclave y los equipos no móviles (como paredes, pisos, techos, etc.) deben limpiarse a fondo con desinfectante líquido de fenol y la desinfección debe repetirse tres veces. Después de la desinfección, se debe sellar la habitación. Después de 48 horas, se debe realizar una prueba para detectar contaminación microbiana. Se permite el uso si el resultado de la prueba es negativo. El personal debe usar batas quirúrgicas completamente esterilizadas y botas esterilizadas al ingresar.
Tabla 4-4 Tipos y dosis de antibióticos utilizados en el agua de bebida de ratones desnudos
Tiempo (semanas)
Elementos antibacterianos
Consumo
1
Bacitracina 4g/L
Neomicina 4g/L
2
Antiveneno 250 mg /L
Oxitetraciclina 500 mg/L
Tres
Bacitracina 1 g/L
Estreptomicina 1 g/L
IV
Antiveneno 250 mg/L
Ocitotraciclina 500 mg/L
Ampicilina 500 mg/L
5. de cámara de flujo laminar de aire
La cámara de flujo laminar y el equipo deben mantenerse limpios y separados desde el suelo hasta el techo. Las pruebas de esterilidad interior deben realizarse mensualmente, colocando una placa por metro cuadrado para comprobar el número de bacterias en el aire interior. Las inspecciones de colonización bacteriana varían de un país a otro, como se muestra en la siguiente tabla.
Tabla 4-5 Regulaciones sobre límites de colonias bacterianas en cámaras de flujo laminar en varios países
Unidades reguladas
Medio de cultivo de uñas plano
Tiempo de exposición (minutos)
Tiempo y temperatura de incubación
Reduce límite bacteriano
Ribon
Agar simple
5′
37℃48 horas
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Estados Unidos
Agar sangre
10′
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Instituto de Verificación de Beijing
Agar sangre
30′
〃
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Excepto que el número de colonias no puede exceder el estándar y no debe haber bacterias patógenas, de lo contrario es necesario desinfectarlo nuevamente.
Todos los equipos móviles deben esterilizarse en autoclave y los equipos inmóviles (como paredes, pisos, techos, etc.) deben limpiarse a fondo con desinfectante líquido de fenol y la desinfección debe repetirse tres veces. Después de la desinfección, se debe sellar la habitación. Después de 48 horas, se debe realizar una prueba para detectar contaminación microbiana. Se permite el uso si el resultado de la prueba es negativo. El personal debe usar batas quirúrgicas completamente esterilizadas y botas esterilizadas al ingresar.
/pic/30/11/28/079 .htm Puedes consultar este sitio web.