Técnicas de operación y puntos claves de la cromatografía en capa fina
1. Elija una placa delgada
Una placa de capa delgada se refiere a un soporte que recubre la fase estacionaria sobre una placa de vidrio, placa de plástico o papel de aluminio. Las fases estacionarias comúnmente utilizadas incluyen gel de sílice, alúmina, celulosa microcristalina, etc. Elija una fase estacionaria adecuada según la naturaleza de la muestra y el propósito de la separación. El espesor del tablero de capa fina debe ser uniforme, la superficie debe ser lisa y no debe haber defectos como moteados o marcas de agua.
2. Muestra
El manchado se refiere al proceso de manchar la solución de muestra que se va a analizar en una placa de capa delgada utilizando herramientas como tubos microcapilares o microjeringas. Se debe prestar atención al tomar muestras: primero, la posición de muestreo debe estar a 1 ~ 2,5 cm del fondo de la placa de capa delgada y al menos a 1 cm del borde para evitar efectos de borde. En segundo lugar, el diámetro de la muestra debe ser inferior a 5 mm, generalmente de 2 a 4 mm, para evitar que las manchas se extiendan o se superpongan.
Además, el espacio entre los puntos debe ser de 1 ~ 1,5 cm para evitar que los puntos interfieran entre sí. Finalmente, la cantidad de muestreo debe ser adecuada. Demasiada hará que las manchas se extiendan o se superpongan, y muy poca dificultará la detección. Después del muestreo, el disolvente debe evaporarse y secarse antes del desarrollo.
Paso 3: Expansión
La expansión significa colocar la placa de capa delgada inyectada en una cámara de desarrollo que contiene la fase móvil, lo que hace que la fase móvil se eleve a lo largo de la fase estacionaria, impulsando la muestra hacia el El proceso de movimiento y separación de componentes. Preste atención al desarrollar: primero, sature previamente la cámara de desarrollo, es decir, coloque el revelador en la cámara de desarrollo antes del desarrollo y coloque papel de filtro en la pared de la cámara para saturarlo y garantizar la estabilidad y reproducibilidad del revelador.
En segundo lugar, el agente revelador debe seleccionar un solvente o una mezcla de solventes apropiados según la naturaleza de la muestra y el propósito de la separación, y mezclarlo nuevamente cuando se use para evitar el deterioro o la contaminación. Además, la distancia de pavimentación debe ser adecuada, generalmente de 8 a 15 cm, ni demasiado larga ni demasiado corta. Finalmente, después de desplegarla, se debe retirar la placa de TLC a tiempo y se debe marcar la línea frontal del solvente en una posición adecuada. Después de que el solvente se haya evaporado y secado, se puede realizar la inspección o el desarrollo del color.
4. Revelado de película de color
El desarrollo de color se refiere a irradiar la placa de capa delgada desplegada con luz ultravioleta o rociar un revelador para hacer visibles los componentes de la muestra en la placa de capa delgada. Proceso de localización. Preste atención al desarrollo del color: en primer lugar, los componentes coloreados se pueden inspeccionar directamente bajo luz visible. En segundo lugar, para componentes incoloros, se puede utilizar luz ultravioleta para examinar las características de absorción o fluorescencia de cada componente.
Además, para componentes incoloros y no fluorescentes, podemos rociarlos con un agente cromogénico y utilizar la reacción química o adsorción física de cada componente con el agente cromogénico para producir manchas de diferentes colores para su inspección. Finalmente, el agente revelador debe seleccionarse de acuerdo con la naturaleza de la muestra y el propósito de la prueba, y la pulverización debe ser uniforme y adecuada para evitar efectos excesivos o desiguales en el efecto de la prueba.
5. Visualización y registro
El registro de inspección se refiere al proceso de observar, medir, comparar y registrar después de que la placa de capa delgada desarrolla color. Al verificar los registros, tenga en cuenta: En primer lugar, en el caso de manchas coloreadas o fluorescentes, su color, forma, tamaño y otras características se pueden observar directamente bajo luz visible o luz ultravioleta. En segundo lugar, en el caso de manchas incoloras y no fluorescentes, se puede utilizar luz visible para observar su color, forma, tamaño y otras características después del desarrollo del color.
Además, para cada punto, se debe medir un valor de compensación específico (valor Rf), es decir, la relación entre la distancia desde el centro del punto hasta el origen y la distancia desde el frente del disolvente. al origen. El valor Rf es un índice que refleja la movilidad relativa de cada componente en la muestra entre la fase estacionaria y la fase móvil. Es un valor constante para cada compuesto bajo ciertas condiciones.