Por favor, dígame los pasos específicos (no la receta) para hacer el medio de cultivo MHA, ¡muchas gracias!

1. Pesaje

Pese con precisión el extracto de carne, la peptona y el NaCl en un vaso de precipitados de acuerdo con la proporción de la fórmula del medio de cultivo. La pasta de carne generalmente se recoge con una varilla de vidrio, se pesa en un vaso pequeño o de reloj, se disuelve en agua caliente y se vierte en el vaso. También puedes ponerlo en el papel de pesar y ponerlo directamente en el agua después de pesarlo. Si lo calientas un poco, la pasta de carne se separará del papel de pesar y luego se quitará el papel de pesar. La peptona absorbe la humedad muy fácilmente y debe pesarse rápidamente. Además, al pesar medicamentos, evite mezclar medicamentos. Use una cuchara de esquina para pesar un tipo de medicamento, lávelo y séquelo y luego pese otro medicamento. La tapa del frasco no se puede confundir.

2. Disolución

En el vaso de precipitados anterior se puede primero añadir menos cantidad de agua de la especificada, remover con una varilla de vidrio y luego colocarlo sobre una malla de amianto y calentar. para disolverse. Después de que el medicamento se haya disuelto por completo, agregue agua hasta el volumen total requerido. Si está preparando un medio de cultivo sólido, coloque el agar pesado en el medicamento disuelto y luego caliéntelo y disuélvalo. Durante el proceso de disolución del agar, debe revolver continuamente para evitar que se rompa el fondo del vaso de pasta de agar. Finalmente reponer el agua perdida.

3. Ajuste el valor de pH

Antes de ajustar el valor de pH, utilice un papel de prueba de pH preciso para medir el valor de pH original del medio de cultivo si el valor de pH es demasiado ácido. , use un gotero para inyectar el medio de cultivo en el medio de cultivo. Agregue 1 mol/L de NaOH gota a gota en la base, revuelva mientras agrega y mida el valor de pH con papel de prueba de pH en cualquier momento hasta que el valor de pH alcance 7,6. En su lugar, utilice 1 mol/L de HCl para realizar el ajuste. Tenga cuidado de no ajustar el valor del pH demasiado alto para evitar el ajuste, de lo contrario afectará la concentración de cada ion en el medio de cultivo.

4. Filtración

Filtrar con papel de filtro o gasa multicapa en caliente para facilitar la observación de los resultados. Generalmente, no existen requisitos especiales y este paso se puede omitir (no se requiere filtración para este experimento).

5. Dispensación

Según los requisitos experimentales, el medio de cultivo preparado se puede distribuir en tubos de ensayo o matraces Erlenmeyer. El dispositivo dispensador se muestra en la Figura 5-1.

Durante el proceso de dosificación, tenga cuidado de no dejar que el medio de cultivo entre en contacto con la boca del tubo de ensayo o del frasco para evitar contaminar el tapón de algodón y provocar contaminación.

(1) Al dispensar líquido, la altura de dispensación debe ser aproximadamente 1/4 de la altura del tubo de ensayo.

(2) Al dispensar sólidos en tubos de ensayo, el volumen de llenado no debe exceder 1/5 de la altura del tubo de ensayo y debe formar una pendiente después de la esterilización. Al llenar el matraz Erlenmeyer, es conveniente que el volumen no supere la mitad del volumen del matraz Erlenmeyer.

(3) El tubo de ensayo alícuota semisólido tiene generalmente 1/3 de la altura del tubo de ensayo y se condensa verticalmente después de la esterilización.

6. Taponado

Después de empacar el medio de cultivo, tapar la boca del tubo de ensayo o matraz Erlenmeyer con un tapón de algodón para evitar que microorganismos externos entren al medio de cultivo y causen contaminación. y para garantizar un buen rendimiento de ventilación.

7. Vendaje

Después de tapar el tampón, ate todos los tubos de ensayo con una cuerda de cáñamo y luego envuelva una capa de papel kraft sobre el tampón para evitar que se condense durante la esterilización. Mójalo con agua y luego ata un trozo de cuerda de cáñamo alrededor del exterior del tampón. Utilice un marcador para marcar el nombre del medio de cultivo, el grupo y la fecha. El matraz Erlenmeyer con tapón está envuelto en papel kraft por fuera y atado en forma de nudo corredizo con cuerda de cáñamo. Es fácil de desatar cuando se usa. También use un marcador para marcar el nombre, el grupo y la fecha del medio de cultivo.

8. Esterilización

El medio anterior debe esterilizarse en autoclave a 1,05 kg/cm2 (15 libras/pulgada cuadrada) y 121,3 ℃ durante 20 minutos. Si la esterilización no se puede realizar a tiempo en circunstancias especiales, se debe conservar en el frigorífico.

9. Coloque la superficie inclinada.

Enfríe el medio de cultivo del tubo de ensayo esterilizado a aproximadamente 50 ℃, coloque un extremo del tapón de algodón del tubo de ensayo en la varilla de vidrio y la longitud de La superficie inclinada no debe exceder la mitad de la longitud total del tubo de ensayo.

10. Inspección de esterilidad

Colocar el medio de cultivo esterilizado en un invernadero a 37°C durante 24-48 horas para comprobar si la esterilización está completa.

Breves pasos

Añade 100 ml de agua al vaso, añade extracto de carne, peptona y cloruro de sodio, marca la pared exterior del vaso con un crayón y luego caliéntalo. el fuego. Una vez disuelto el contenido del vaso añadir el agar sin dejar de remover para evitar que se pegue al fondo. Después de que el agar esté completamente disuelto, recupere el agua perdida, ajuste el pH a 7,2 ~ 7,6 con ácido clorhídrico al 10% o hidróxido de sodio al 10%, distribúyalo en cada tubo de ensayo, agregue tapones de algodón y esterilice con un autoclave: 1,05 kg por centímetro cuadrado, mantener a 121 grados Celsius durante 15 ~ 30 minutos.

Por favor, esté satisfecho^_^^_^^_^^