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Verrugas genitales, Condiloma acuminata, verruga acuminata), también conocidas como verrugas genitales, verrugas genitales (verrugas pudendos) y verrugas de transmisión sexual. En los últimos años, debido a la continua expansión del alcance de las enfermedades de transmisión sexual, esta enfermedad ha sido reconocida como una enfermedad de transmisión sexual y también es una de las enfermedades de transmisión sexual más comunes en la sociedad moderna.

El condiloma acuminata es una de las enfermedades de transmisión sexual más comunes en los países europeos y americanos, y su tasa de incidencia aumenta año tras año. Según estadísticas incompletas, la incidencia de las verrugas genitales en los Estados Unidos ha aumentado. cinco veces en los últimos 15 años. Las verrugas genitales son también una de las enfermedades de transmisión sexual más importantes en mi país. En algunas zonas, el número de casos representa del 20 al 31% de todas las enfermedades de transmisión sexual, ocupando el segundo o tercer lugar. Es más común en el sur de mi país que en el norte, y la edad más común es entre los 16 y 35 años. Las verrugas genitales son muy contagiosas y tienen una alta tasa de incidencia, ocupando el tercer lugar en países extranjeros después de la uretritis no gonocócica y la gonorrea. Debido a que no existen condiciones efectivas para detectar la uretritis no gonocócica en China, ocupa el segundo lugar después de la gonorrea. Su tasa de crecimiento anual supera el 100, ocupando el primer lugar entre todos los tipos de enfermedades de transmisión sexual. Por lo tanto, no es sorprendente que algunas unidades encuentren que mujeres de 20 a 30 años tienen verrugas genitales durante el examen físico. Esta enfermedad puede desaparecer de forma natural en unos pocos meses, pero también hay algunos pacientes cuyas lesiones persisten durante muchos años y no se pueden curar. Por ello, es necesario detectarlo a tiempo y tratarlo de forma rápida y exhaustiva.

El condiloma acuminado es una de las enfermedades de transmisión sexual, pero se diferencia de la gonorrea y la sífilis en la forma de infección. Además del contacto sexual, existen entre 30 y 40 tipos de contaminantes.

Patología

[Patógeno]

El patógeno de esta enfermedad es el virus del papiloma humano (VPH). Un virus de ADN. El único huésped del VPH en el epitelio escamoso estratificado de la piel y las membranas mucosas humanas aún no se ha cultivado con éxito in vitro. El diámetro de las partículas de virus es de 50 a 55 nm. Es muy pequeño y no se puede ver con un microscopio óptico general. Sólo se puede ver con un microscopio electrónico. Existen muchos tipos de virus del papiloma humano En los últimos años, la investigación en tecnología de biología molecular se ha desarrollado rápidamente y se ha confirmado que el virus del papiloma humano tiene más de 60 prototipos de antígenos, es decir, existen más de 60 virus (subtipos) similares pero diferentes. en esta familia, entre los cuales al menos 10 tipos están relacionados con las verrugas genitales (como los tipos 6, 11, 16, 18 y 33, los tipos 6 y 11 más comunes), y actualmente se estudian los tipos 11, 16 y 18. En el extranjero para el cáncer de cuello uterino, vulva El agente viral más popular es el cáncer e incluso el cáncer de pene, y su infección a largo plazo está relacionada con la aparición de cáncer de cuello uterino en las mujeres. Las verrugas genitales, las verrugas comunes, las verrugas planas, las verrugas filiformes, las verrugas palmoplantares, etc. son causadas por una infección por el virus del papiloma humano (VPH). Pero diferentes tipos de VPH pueden causar diferentes verrugas. Por ejemplo, el tipo I causa principalmente verrugas palmoplantares, el tipo II causa principalmente verrugas comunes, el tipo III causa principalmente verrugas planas y las verrugas genitales son causadas principalmente por infecciones virales de tipo VI y tipo XI. El VPH es particularmente fácil de sobrevivir y multiplicarse en ambientes cálidos y húmedos, por lo que los genitales externos tanto de hombres como de mujeres son el sitio más susceptible a la infección. El virus puede inocularse a sí mismo, por lo que los daños que se producen en zonas como el ano suelen aparecer en las superficies de contacto de ambos lados.

El VPH es un miembro del género A de la familia Papovaviridae. La partícula del virus tiene un diámetro de 50-55 nm y está compuesta por un icosaedro regular sin membrana. Está compuesto por un ADN bicatenario circular. de 7900 pares de bases. Microscopía electrónica. El tamaño y la forma de las partículas del virus son muy similares a los del poliomavirus oral. El virus del papiloma (PV) es específico de cada especie y el VPH no se ha propagado en cultivos de tejidos ni en modelos animales experimentales.

La composición proteica estructural del virus: partículas PV del 85%, electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) puede determinar que el virus tiene una proteína de la cápside principal con un peso molecular de 56.000; La proteína de la cápside menor tiene un cambio de peso molecular de 76.000. Se encontró que cuatro histonas celulares están relacionadas con el ADN viral.

La estructura genómica de todos los virus del VPH es similar. Los tipos y subtipos del virus se pueden determinar según el procedimiento de hibridación del ADN en condiciones estrictas. Sólo el 50% del ADN de los diferentes tipos de VPH se hibrida de forma cruzada. con el ADN de otros tipos de virus Hasta ahora se han descubierto más de 60 tipos de VPH y, a medida que la investigación se profundice, se identificarán más tipos nuevos de VPH.

[Patogenia]

La infección por VPH de las verrugas genitales se transmite a través del contacto sexual. Pequeñas heridas en el lugar de contacto pueden promover la infección por tres tipos de epitelio escamoso (piel, mucosas, metaplásico). ) son susceptibles a la infección por VPH. Cada tipo de VPH se asocia con un daño clínico específico y tiene sus propios sitios de predilección en la piel o el epitelio escamoso de la mucosa. La infección puede ocurrir cuando células superficiales exfoliadas o fragmentos de queratina que contienen una cantidad relativamente grande de partículas virales ingresan en las grietas del epitelio susceptible. Puede ser causada por contacto directo o, rara vez, por inoculación automática o ropa interior, bañeras, toallas de baño y orinales contaminados.

Después de que el virus infecta el cuerpo humano, puede esconderse entre los queratinocitos basales y replicarse en la capa de células epidérmicas. El VPH invade el núcleo y provoca una rápida división celular. y diseminación de partículas virales, formando papilomas característicos. Expresión genética tardía de polipéptidos estructurales, es decir, aparición de partículas de ensamblaje de proteínas estructurales, el virus se concentra principalmente en el núcleo en la capa granular y también aparece un aumento de células huecas en la capa granular de la epidermis. Tener VPH y ADN residual después del tratamiento a menudo puede provocar una recurrencia de la enfermedad.

El VPH causa verrugas en la piel y lesiones proliferativas en la faringe, mucosa perianal y genital. Su tipo de virus es un virus de ADN pequeño. La mayoría de las lesiones causadas por la infección por VPH son benignas y pueden resolverse por sí solas, pero también hay casos que empeoran. Por ejemplo, hay informes de formación de carcinoma de células escamosas en la mucosa perianal y genital. También existen enfermedades cutáneas hereditarias raras, cáncer de piel secundario a epidermodisplasia verruciforme (EV), etc. Se ha detectado VPH en células cancerosas.

Epidemiología

[Prevalencia]

Los condilomas acuminados son causados ​​por el virus del papiloma humano. Actualmente se coincide en que esta enfermedad está aumentando y se ha convertido en la enfermedad más común entre las ETS, con una prevalencia de 0,5-1 en adultos jóvenes. La incidencia de verrugas genitales en el Reino Unido aumentó de 30/100.000 en 1970 a 260/100.000 en 1988, un aumento de casi 8 veces. La incidencia de verrugas genitales en los Estados Unidos aumentó 6 veces entre 1966 y 1984. Al igual que el SIDA, las verrugas genitales sintomáticas sólo representan la cima del "iceberg" de personas infectadas, por lo que si se tienen en cuenta las infecciones subclínicas, la infección por el virus del papiloma humano puede ser la ETS más común en términos de incidencia. El modo de transmisión de esta infección incluye transmisión directa e indirecta, pero el contacto sexual es el más común, y cuanto más reciente es el daño, más contagioso es. Se estima que existe un 50% de posibilidades de infectarse a través de una sola vía. contacto temporal, seguido del contacto directo no sexual, como la autoinfección y los recién nacidos se infectan a través del canal de parto y, en segundo lugar, el contacto indirecto, la infección por contaminación, se especula que es posible, pero el virus no se puede cultivar y no se puede confirmar.

2. Factores de riesgo de las verrugas genitales

(1) Comportamiento sexual: El número de parejas sexuales y las relaciones sexuales prematuras son factores que causan la infección por VPH.

(2) Inmunosupresión: la infección por VPH y los cánceres relacionados con el VPH parecen ser complicaciones tardías de la supresión inmune crónica. El riesgo de AC aumenta en los receptores de aloinjertos renales.

(3) Infección por VIH: las personas VIH positivas tienen una mayor probabilidad de desarrollar infección por VPH y tumores relacionados con el VPH.

(4) Edad, embarazo: La prevalencia máxima del VPH detectado en frotis ginecológicos es entre los 20 y los 40 años, a medida que aumenta la edad, la prevalencia disminuye de manera constante, la tasa de detección del VPH durante el embarazo es alta. la tasa de detección del VPH disminuye después del parto.

[Vía de transmisión]

Es altamente contagiosa por contacto. El período de incubación de las verrugas genitales varía, generalmente oscila entre 3 semanas y 8 meses, con un promedio de 3 meses. Algunos pacientes que tuvieron relaciones sexuales impuras hace medio año están muy confundidos después de desarrollar verrugas genitales. Cuando los médicos les preguntan sobre su historial médico, a menudo niegan que el virus pueda permanecer latente localmente durante hasta 8 meses sin desarrollar síntomas. La resistencia del cuerpo cuando disminuye, el virus se multiplica en grandes cantidades y causa enfermedades. Aunque estos pacientes no están enfermos, el virus está latente en el cuerpo humano, además es contagioso y también es un foco de infección.

(1) Infección por contacto sexual directo Es la principal vía de transmisión. Según investigaciones, 2/3 de las personas que tienen contacto sexual con pacientes con verrugas genitales pueden desarrollar esta enfermedad. La enfermedad es más contagiosa durante un promedio de tres meses y medio, por lo que las personas con trastornos sexuales son las más susceptibles a la enfermedad. La infección se produce a través de piel y membranas mucosas dañadas, generalmente a través de relaciones sexuales sucias.

Los datos de la encuesta muestran que las verrugas genitales ocurren principalmente en jóvenes de entre 20 y 30 años, y la mayoría de estos pacientes tienen antecedentes de promiscuidad sexual fuera del matrimonio.

(2) La transmisión de madre a hijo de verrugas genitales o papilomatosis laríngea en bebés y niños y de verrugas genitales en niños puede ser causada por el paso del feto a través del canal de parto infectado por el VPH durante el parto o por contacto cercano. contacto con la madre después del nacimiento.

(3) La infección por objetos indirectos se puede transmitir a través de artículos de primera necesidad como ropa interior, bañeras y toallas de baño. Si las mujeres usan ropa interior de nailon y no prestan atención a la limpieza de la vulva, es fácil que se produzca vaginitis por hongos o vaginitis por tricomonas, o cuando hay un aumento de la leucorrea causada por otras infecciones, la inmersión local y la humedad serán la causa del virus del papiloma. condiciones favorables para la cría y reproducción. Rascarse los genitales con las manos contaminadas o usar toallas contaminadas también puede provocar la transmisión de verrugas genitales. Las infecciones también pueden deberse a no prestar atención a la higiene vaginal o no lavarse las manos antes de ir al baño. Todo el mundo sabe que deben lavarse las manos antes de comer y después de ir al baño, pero no saben que deben lavarse las manos antes de ir al baño o antes de tocar la vulva (como cambiar el tapón menstrual o las toallas sanitarias). La gente sólo tiene miedo de que tocar la vulva con las manos las contamine, pero no saben que sus manos también pueden contaminar la vulva.

Inmunología

La respuesta inmune del huésped a la infección por VPH incluye tanto inmunidad celular como inmunidad humoral.

1. Inmunidad celular

El estado inmunológico celular del cuerpo humano es una de las bases importantes que afecta la aparición y el resultado de la CA. La inmunidad celular es más importante que la inmunidad humoral. Clínicamente, los pacientes con condiloma acuminado con inmunodeficiencia celular a menudo presentan erupciones cutáneas persistentes, un aumento en el número de células T inhibidoras en la sangre periférica, una función baja de las células NK y una disminución en la producción de interferón r e interleucina 2. mientras que las lesiones cutáneas de las verrugas a menudo desaparecen. Se produjo una infiltración de células T activadas y células NK, y algunas células de queratina fueron positivas para HLA-DR.

La incidencia de infección genital por VPH y enfermedades relacionadas con el VPH aumenta cuando el paciente está inmunodeprimido o inmunodeficiente. Las células T colaboradoras se agotan en las verrugas genitales y la proporción CD4/CD8 está invertida, con un valor <1. En la sangre periférica de pacientes con CA, se encontró que el porcentaje de células T supresoras/citotóxicas aumentó significativamente, y la proporción de células T auxiliares/inductoras y la proporción de células T auxiliares/supresoras disminuyeron. Las células de Langerhans se redujeron significativamente en las lesiones de CA cervical y neoplasia intraepitelial cervical (NIC). Se reduce la producción de interferón r e interleucina-2 por las células NK en CA. La actividad lítica de las células NK contra los queratinocitos que contienen VPH-16 se reduce en pacientes con papulosis bowenoide y cáncer anogenital, lo que puede deberse a un defecto en el reconocimiento de las células diana específicas de la enfermedad. Los queratinocitos de CA cervical no expresan el antígeno tipo MHCⅡ. (HLA-DR), la ausencia de esta función de presentación de antígenos puede destruir la función de vigilancia inmune.

2. Inmunidad humoral

Los resultados de las pruebas serológicas actuales muestran: ①La tasa de producción de anticuerpos anti-proteína tardía es de 25-65, que es mayor que la tasa de producción de anticuerpos anti-proteína temprana. anticuerpos proteicos; ② Los anticuerpos contra el VPH detectados parecen ser de tipo específico y no tienen reactividad cruzada. ③ Los anticuerpos anti-VPH-16E7 están estrechamente relacionados con la presencia de cáncer de cuello uterino. ④ Los anticuerpos anti-VPH-16E4 también son un signo de cáncer de cuello uterino; cáncer, recurrencia o infección reciente por VPH ⑤ Se estima que los adultos y la tasa positiva de anticuerpos IgG producidos por los niños son los mismos, y la tasa positiva de diferentes tipos está entre 10 y 75 ⑥ Se ha demostrado que solo 50-; El 70% de los pacientes que dan positivo en anticuerpos contra el VPH-16 o contra el tumor tipo 18 pueden detectar este anticuerpo.

3. Regresión natural de las verrugas genitales

No existe una evaluación sistemática de la regresión natural de la CA. Sin embargo, estudios controlados con placebo han encontrado que la tasa de regresión natural está entre 0, 17, 18 and 69 , después de que la AC se resolvió o se curó, 45 pacientes todavía tenían infección latente y 67 de ellos recayeron.

Manifestaciones clínicas

El período de incubación es de 3 semanas a 8 meses, con un promedio de 3 meses. Es más común en hombres y mujeres jóvenes y de mediana edad sexualmente activos. La edad máxima de aparición es entre los 20 y los 25 años y el curso de la enfermedad es promedio. Los pacientes masculinos y femeninos de entre 3 y 5 meses desarrollarán la enfermedad poco después del contacto sexual, mientras que los pacientes masculinos con un curso promedio de la enfermedad de 12 meses. Es posible que no desarrolle la enfermedad después del contacto sexual. La mayoría de los pacientes son generalmente asintomáticos. El daño varía en tamaño y forma.

Pueden ser sólo unas pocas, o pueden ser una gran cantidad de lesiones en forma de agujas: puede crecer hasta convertirse en un gran objeto parecido a un tumor en la vulva y el ano, con una sensación de presión y un olor fétido, a veces pequeñas verrugas genitales; puede causar dolor, picazón y malestar en la vulva, y la paciente puede experimentar hematuria y dificultad para orinar, el condiloma en el recto puede causar dolor y heces con sangre, mientras que un condiloma grande en el recto puede causar tenesmo.

Los pacientes masculinos tienden a presentarse en el frenillo, surco coronal, prepucio, uretra, pene, alrededor del ano y escroto. La enfermedad aparece inicialmente como excrecencias en forma de mijo de color rojo claro o rojo sucio, que son de naturaleza blanda y ligeramente puntiagudas en la parte superior, y que gradualmente crecen o aumentan en número. Puede desarrollar una forma papilar o quística, con una base ligeramente más ancha o bandas y partículas en la superficie. El ano a menudo se agranda y parece una coliflor. La superficie está húmeda o sangra. A menudo se acumula pus entre las partículas y emite un olor desagradable después de rascarse. Las verrugas genitales ubicadas en áreas secas con poca humedad suelen tener lesiones pequeñas y planas parecidas a verrugas. Las verrugas ubicadas en áreas cálidas y húmedas a menudo parecen filamentosas o parecidas a papilomas y tienden a fusionarse en grandes masas. Las verrugas genitales pueden aumentar de tamaño en pacientes con enfermedad hepática grave. El embarazo puede hacer que las verrugas genitales reaparezcan o crezcan más rápido.

La infección subclínica se refiere a lesiones que no pueden reconocerse clínicamente a simple vista. Sin embargo, la aplicación local de 3-5 solución de ácido acético o una compresa húmeda durante 5-10 minutos puede hacer que el área infectada por el VPH se vuelva blanca. que es el llamado fenómeno del "blanqueamiento con ácido acético".

Infección por VPH y aparición de tumores:

(1) El VPH está relacionado con la aparición de tumores de piel.

Parece desempeñar un papel en el cáncer de piel y los tumores. en otras partes anatómicas un papel decisivo. Se pueden encontrar crecimientos benignos y lesiones precancerosas en la cavidad bucal, el ADN del VPH-11, 16 y 18 en el tejido del carcinoma de células escamosas de la piel. Se ha informado que el papiloma laríngeo del VPH-6 se convierte de manera maligna en cáncer de laringe y displasia epidérmica verrugosa de la piel. (EV) es evidencia del posible efecto cancerígeno del VPH. Se encontraron múltiples tipos de ADN del VPH en lesiones cutáneas del VPH, y se detectaron VPH-5, 8, 14, 17 y 20 en pacientes con carcinoma cutáneo de células escamosas. ser una transformación maligna de un daño viral preexistente.

(2) Verrugas genitales y cáncer anogenital

Existe una cierta relación entre el cáncer genital y los tipos de VPH. Se utilizó tecnología de hibridación de ADN para descubrir la presencia de VPH-6, 11, 16, 18, etc. en tejidos de cáncer genital.

1． Cáncer de cuello uterino: según la relación entre el VPH y el cáncer de cuello uterino, se puede dividir en dos tipos: el tipo de bajo riesgo se refiere principalmente a los tipos de VPH-6 y 11, y el tipo de alto riesgo se refiere a los tipos de VPH-16 y 18. et al. observaron que en el cáncer de cuello uterino invasivo, el 57,4% de las pacientes tienen los tipos VPH-16 y 18, y otros estudiosos también han encontrado lo mismo. También se han aislado los tipos VPH-33 y 35 del cáncer de cuello uterino invasivo.

2. Carcinoma cutáneo de células escamosas (CCE): la CA que se produce debido a una infección por VPH también puede ser una lesión precancerosa y puede convertirse en CCE anogenital, lo que indica que el VPH es un factor importante en el CCE de la vulva, el pene y el CCE anogenital. La CA, la CA gigante y el CCE verrugoso constituyen un espectro de lesiones precancerosas genitales y cáncer. En algunos casos de cáncer genital, la CA está presente en la piel circundante. A veces se observa como una CA típica a simple vista, pero el CCE se encuentra en el estudio histológico. examen. Lesiones aisladas.

3. Papulosis bowenoide: se encuentra comúnmente alrededor del pene, la vulva o el ano, y se ha encontrado ADN del VPH-16 en las lesiones.

Examen de laboratorio

1. Prueba de blanqueamiento con ácido acético

Aplique 3-5 ácido acético a la verruga durante 2-5 minutos. La lesión se volverá blanca y. Las lesiones anales pueden abultarse ligeramente y tardar hasta 15 minutos. El principio de esta prueba es que la proteína y el ácido se coagulan y se vuelven blancos. La queratina producida por las células infectadas por el VPH es diferente de la producida por las células epiteliales normales no infectadas. Sólo las primeras pueden decolorarse con ácido acético. La prueba del blanco de ácido acético tiene una alta sensibilidad para detectar el VPH y es mejor que las pruebas convencionales para observar cambios histológicos. Sin embargo, ocasionalmente aparecen falsos positivos en casos de engrosamiento epitelial o abrasión traumática, y los signos de blanqueamiento falsos positivos aparecen poco claros e irregulares. Los CDC de EE.UU. recuerdan que la prueba del blanco de ácido acético no es una prueba específica y los falsos positivos son habituales.

2. Examen inmunohistológico

El método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP) se usa comúnmente para mostrar proteínas virales en las verrugas genitales para demostrar que hay virus en las lesiones de las verrugas. .

Cuando la proteína del VPH es positiva, puede aparecer una reacción positiva débil de color rojo claro en las células epiteliales superficiales de las verrugas genitales.

3. Examen histoquímico

Tomar una pequeña cantidad de tejido dañado para hacer un frotis y teñirlo con anticuerpos específicos contra el virus del papiloma humano. Si hay un antígeno viral en la lesión, se combinará antígeno-anticuerpo. En el método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP), los núcleos pueden teñirse de rojo. Este método es muy específico y rápido, y resulta útil para el diagnóstico.

IV.Examen patológico

Los síntomas principales son paraqueratosis, hipertrofia de la capa espinosa, hiperplasia papilomatosa, engrosamiento y alargamiento de los procesos epidérmicos, y el grado de hiperplasia puede ser similar al pseudoepitelioma. . Muestra. Las células urticantes y las células basales también tienen un número considerable de divisiones nucleares, lo que resulta bastante canceroso. Sin embargo, las células están dispuestas de forma regular y el límite entre el epitelio hiperplásico y la dermis es claro. Se caracteriza por una evidente formación de vacuolas en las células superiores de la capa granulosa y la capa espinosa. Este tipo de células vacuoladas son más grandes de lo normal, con citoplasma pálido y un núcleo grande, redondo y profundamente basófilo en el centro. Por lo general hay edema dérmico, telangiectasia y un denso infiltrado inflamatorio crónico circundante. Condiloma acuminado gigante de Bushke-loewenstein, la epidermis crece extremadamente hacia abajo, reemplazando el tejido subyacente y se mezcla fácilmente con células escamosas, por lo que se requieren múltiples biopsias. Si tiende a desarrollarse lentamente, se trata de un proceso maligno de bajo grado, que es el llamado cáncer verrugoso.

5. Diagnóstico genético

Hasta la fecha, el VPH es difícil de detectar mediante cultivo viral tradicional y técnicas serológicas. La principal técnica de diagnóstico experimental es la hibridación de ácidos nucleicos. Los métodos de PCR desarrollados en los últimos años tienen las ventajas de especificidad, sensibilidad, simplicidad y rapidez, lo que abre nuevas vías para la detección del VPH.

(1) Recolección y procesamiento de especímenes

1. Recolección y preprocesamiento de muestras: Utilice un raspador o un hisopo de algodón empapado en solución salina fisiológica para recolectar secreciones y células de la vagina y el orificio cervical externo. Mientras realiza el examen citológico, coloque la muestra en 5 ml de PBS que contenga 0,05 de timerosal, lávela dos veces con centrifugación en PBS (3000 g, 10 min), resuspenda las células sedimentadas en 1 ml de PBS y extraiga el ADN de 0,5 ml de la suspensión celular. .

2. Extracción de ácido nucleico de la muestra: agregue 10 veces el volumen de tampón de lisis celular (Tris-HCl 10 mmol/L, pH 7,4, EDTA 10 mmol/L, NaCl 150 mmol/L, SDS 0,4, proteinasa K 1,0 mg/ml) a 1 volumen de suspensión celular durante la noche a 37 °C; extraer con volúmenes iguales de fenol/cloroformo (1:1) y cloroformo/alcohol isoamílico (24:1) dos veces cada uno, agregar 1/10 de volumen de 3 mol/l de NaAc (pH); 5.2) y 2,5 veces Coloque un volumen de etanol absoluto a -20 °C durante 2 horas o durante la noche para precipitar el ADN, agregue 1 volumen de etanol y lave una vez, use 60 l de solución TE (10 mmol/L Tris-HCl, pH; 8,0, 1,0 mmol/L) que contiene RNasa (100 μg/ml (EDTA)) para disolver el ADN e incubar a 37°C durante 30 minutos.

(2) Amplificación por PCR

1. Diseño y síntesis de cebadores: el genoma del VPH se puede dividir en una región temprana (E) y una región tardía (L), cada región contiene una serie de marcos de lectura abiertos (ORF). El análisis de secuencia muestra que todos los tipos de VPH tienen secuencias conservadas en las regiones no codificantes y en las regiones E1, E6, E7 y L1. Manos et al. seleccionaron secuencias conservadas de la región HPVL1 para diseñar y sintetizar los cebadores MY11 y MY09, como se muestra en la Tabla 1. Los cebadores tienen secuencias complementarias a los tipos de HPV 6, 11, 16, 18 y 33, y también pueden amplificar otros tipos. del VPH.

Primers universales HPVL1 diseñados por Manos et al.

MY11: GCMCAGGGWCATAAYAATGG

MY09: CGTCCMARRGGAWACTGATC

Tabla 1 Los primeros de tipo HPV MY11 Longitud del producto de PCR en la primera posición base de MY09 (pb)

6 6722 7170 448

11 6707 7155 448

16 6584 7035 451

18 6558 7012 454

33 6539 6987 448

M=A C, R=A G, W=A T, Y= C T

Tabla 2 enumera las sondas de oligonucleótidos diseñadas por Manos et al. La secuencia de sonda mixta pública se selecciona de otra secuencia conservada en la región HPVL1 y puede hibridarse con una variedad de productos de amplificación por PCR de HPVL1 generados por los cebadores MY11 y MY09: las sondas específicas de tipo solo tienen secuencias complementarias con los tipos de VPH correspondientes y se usan para Detección del VPH.

Tabla 2 Sondas mixtas comunes para sondas de productos de PCR HPVL1 diseñadas por Manos et al.

GP1 CTGTTGTTGATACTACACGCAGTAC

GP2 CTGTGGTAGATACCACWCGCAGTAC

La primera Posición base

VPH6 6771 VPH11 6757 VPH16 6631

VPH18 6607 VPH33 6588

Sonda específica de tipo

Sonda Secuencia de tipo de VPH Ubicación del gen

my12 hpv6 catccgtaactacatcttcca 6813—6833

my13 hpv11 tctgtgtctaaaatctgctaca 6800—6820

my14 hpv16 catacacctacccacctaa 6926—6945

MY16 HPV33 CACACAAGTAACTAGCTACAG 6628—6648

H=A C T, R=A G, W=A T, Y=C T

2. Reactivos de reacción de PCR: ADN polimerasa Taq (2U/ml), solución madre de dNTP de 10 mmol/l (10 mmol/l de cada uno de dATP, dCTP, dGTP y dTTP), tampón de PCR 10 × (500 mmol/l de KCl, 40 mmol/l de MgCl2, 100 mmol/l). L Tris-HCl, pH 8,5), soluciones madre de 100 μmol/L MY11 y MY09, agua destilada preparada en un alambique de vidrio esterilizado.

3. Método y procedimiento de amplificación por PCR: Utilice 100 μl de solución de reacción de PCR y utilice un tubo de centrífuga de plástico siliconado estéril de 0,5 ml como tubo de reacción para realizar la reacción de amplificación.

(1) Prepare los reactivos de reacción premezclados antes del experimento y tome alícuotas. Los reactivos de reacción premezclados incluyen otros reactivos de reacción de PCR excepto el ADN de muestra. Los reactivos de la reacción de PCR contenidos en cada tubo de reacción se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3 Reactivos de reacción de PCR en cada tubo de reacción

Volumen de reactivo de reacción (μl) Concentración final

10×tampón de PCR 10 1×tampón de PCR Líquido

Solución madre de dNTP 2 200 μmol/L cada dNTP

Solución madre MY11 0,5 500 μmol/L

Solución madre MY09 0,5 500 μmol/L

Taq ADN polimerasa 0,5 2,5 μ

Agua destilada esterilizada 75,5

Total 90

(2) Agregue 10 μl de muestra y 90 μl de reactivos premezclados.

(3) Agregue 80-100 μl de aceite de parafina y centrifugue rápidamente en una centrífuga de escritorio durante unos segundos para recoger cada reactivo de reacción debajo de la capa de aceite. Actualmente se comercializan reactivos de PCR y el volumen de reacción es de 25 μl. Solo agregue muestra de ADN cuando lo use.

(4) Coloque el tubo de reacción en el amplificador de PCR. Los parámetros del ciclo son 95 °C durante 30 s, 55 °C durante 40 s y 72 °C durante 50 s durante 35 veces, y finalmente extiende a 72. ºC durante 5 minutos.

4. Cada prueba debe tener controles positivos y negativos. Utilice plásmido recombinante que contenga VPH (100 pg por reacción) o ADN de línea celular que contenga VPH (como Caski, HeLa) como control positivo, y utilice ADN de línea celular humana libre de VPH como control negativo.

(3) Detección y análisis de productos de amplificación

1. Electroforesis en gel: después de la reacción de amplificación, saque el tubo de reacción y enfríelo a temperatura ambiente. Tome 10 μl del producto de amplificación y páselo por gel de poliacrilamida 5-7 o electroforesis de agarosa 1,5, tiñe con bromuro de etidio y analice. Resultados bajo un analizador UV, apareció una banda de ADN obvia con un peso molecular de aproximadamente 450 pb.

2. Hibridación de ácidos nucleicos: si no hay ADN claro en la electroforesis en gel o es necesario determinar la especificidad de la banda de ADN, se pueden usar sondas mixtas públicas marcadas y/o sondas de tipo específico para la hibridación por transferencia Southern y la verificación de la hibridación puntual.

Según los métodos estándar, las sondas de oligonucleótidos marcadas con 32P ATP deben alcanzar una actividad específica de aproximadamente 107 cpm/pmol. La solución de hibridación debe contener 2×106-5×106cpm sonda/ml. Hibride a 55 °C durante 2 a 3 horas con agitación lenta, luego enjuague rápidamente la membrana de hibridación con solución de lavado (2×SSC, 0,1 SDS) a 30 a 55 °C para eliminar el exceso de sonda. Luego se lava la membrana y las condiciones varían dependiendo de la sonda utilizada: sonda mixta común, lavar la membrana a 55°C por 10 minutos, sondas MY12, MY13 y MY16, 56-57°C por 10 minutos y cambiar la membrana; líquido y lavar nuevamente; sonda MY14 y WD74, 10 minutos a 58-59°C, cambiar también el líquido y lavar nuevamente.

El método PCR es superior al método de hibridación de ácidos nucleicos para detectar el VPH. Tiene alta sensibilidad El método GP-PCR utiliza electroforesis en gel para analizar directamente los resultados y puede detectar 200 copias de ADN del VPH en la muestra. Si se utiliza la hibridación de ácidos nucleicos para detectar el producto de PCR, la sensibilidad mejora y 10 copias de. Se puede detectar el ADN del VPH.

En vista de la alta sensibilidad de la tecnología PCR, utilizar células exfoliadas del tracto reproductivo como material de prueba es suficiente para cumplir con los requisitos de la prueba, evitando las complicadas operaciones de biopsia y trituración de tejido. En circunstancias normales, el producto de amplificación por PCR se somete a electroforesis en gel y se puede observar el ADN resultante para realizar un diagnóstico directo. Por tanto, la tecnología PCR para detectar el VPH tiene un ciclo experimental corto, es sencilla y rápida.

Diagnóstico y diagnóstico diferencial

1.Diagnóstico

1. Historia de relaciones sexuales impuras.

2. Las lesiones cutáneas típicas incluyen pápulas, excrecencias carnosas papilares, en forma de coliflor o de peine en los genitales o en la zona perianal, con superficies rugosas y queratinizadas.

3. La prueba del blanco de ácido acético fue positiva y los cortes patológicos mostraron disqueratosis y células huecas.

4. La hibridación de ácidos nucleicos puede detectar secuencias relacionadas con el ADN del VPH y la detección por PCR puede revelar zonas específicas de amplificación del ADN del VPH.

2. Diagnóstico diferencial

1. Carcinoma genital de células escamosas; más común en ancianos o mayores de 40 años. Las lesiones cutáneas se infiltran hacia abajo, se producen úlceras y hay cambios característicos en la histopatología.

2. Condiloma plano: múltiples pápulas húmedas fusionadas en lesiones cutáneas escamosas, más comunes alrededor del ano, se pueden encontrar Treponema pallidum en las lesiones cutáneas y la prueba del suero de sífilis es positiva.

3. Papulosis perlada del pene: pápulas de color piel o rosa claro del tamaño de cabezas de alfiler y granos de mijo dispuestas a lo largo del surco coronal. La histopatología no mostró células huecas.

4. Pseudocondiloma: el daño son pápulas de color rojo claro de tamaño miliar o cambios vellosos limitados a los labios menores. La superficie de las lesiones cutáneas es lisa, la prueba del blanco de ácido acético es negativa y no hay células huecas con importancia diagnóstica en patología.

5. La papulosis bowenoide es una pequeña pápula pigmentada o de color marrón rojizo, y la histopatología muestra células escamosas atípicas e imágenes de tejido similares al carcinoma in situ.

Tratamiento

Dado que actualmente no existen fármacos antivirales específicos, el tratamiento de las verrugas genitales debe ser integral.

(1) Incentivos al tratamiento: (leucorrea excesiva, prepucio excesivo, gonorrea).

(2) Mejora la inmunidad del organismo.

(3) Aplicación de fármacos antienfermedades. Generalmente, se puede curar siempre que se siga un tratamiento integral regular.

1． Terapia quirúrgica

Los condilomas únicos y pequeños se pueden extirpar quirúrgicamente; para los condilomas acuminados grandes, se puede utilizar la cirugía de Mohs. Durante la operación, se utilizan secciones congeladas para comprobar si el daño se ha eliminado por completo.

2. Crioterapia

La crioterapia utiliza nitrógeno líquido a una temperatura baja de -196 °C para tratar el condiloma acuminado utilizando un método de congelación a presión para promover la necrosis y la eliminación del tejido de la verruga. Este método es adecuado para cantidades pequeñas y áreas pequeñas. Condiloma y se puede tratar en 1 o 2 veces, el intervalo es de una semana.

3. Tratamiento con láser

Normalmente el láser de CO2 se utiliza para tratar las verrugas genitales mediante cauterización. Esta terapia es más adecuada para las verrugas genitales en la vulva, el pene o la zona perianal. Se pueden tratar una sola o una pequeña cantidad de verrugas genitales múltiples a la vez, mientras que las verrugas genitales múltiples o de área grande se pueden tratar en 2 o 3 veces, con un intervalo de una semana.

4. Tratamiento con electrocauterio

Utilización de electroacupuntura de alta frecuencia o electrocirugía para eliminar las verrugas genitales. Método: anestesia local, seguida de electrocauterización. Esta terapia es adecuada para un número reducido y áreas pequeñas de verrugas genitales.

5. Tratamiento con microondas

Utilizando una máquina de tratamiento quirúrgico con microondas y anestesia local con lidocaína, la punta de la sonda de radiación en forma de varilla se inserta en la punta afilada directamente a la base de la verruga. Se vuelve más pequeño, el color se vuelve más oscuro y el color cambia de suave a suave. Cuando está duro, se completa la solidificación por radiación térmica y se puede sacar la sonda. Las lesiones coaguladas se pueden eliminar con fórceps. Para evitar la recurrencia, la base restante se puede coagular nuevamente.

6. Tratamiento con rayos β

Hemos logrado resultados satisfactorios aplicando rayos β para tratar las verrugas genitales. Este método es altamente efectivo, indoloro, no dañino, tiene pocos efectos secundarios y tiene una baja tasa de recurrencia. Tiene valor de promoción clínica.

7. Terapia farmacológica

(1) Podoca oleifera: esta terapia es adecuada para las verrugas genitales en áreas húmedas, como las que ocurren en el glande y el perineo donde el prepucio es demasiado largo y no ha sido circuncidado. Pero el condiloma acuminado cervical no se puede tratar con resina de podocarpo. Aplique tintura de mantequilla de Podocarpus al 20% sobre las lesiones cutáneas o antes de aplicar el medicamento, primero use un ungüento antibacteriano aceitoso para proteger la piel normal o las membranas mucosas alrededor de las lesiones cutáneas, luego aplique el medicamento y 4-6 horas después de su uso, use 30% agua con ácido bórico o agua con jabón Limpie y, si es necesario, repita el medicamento después de 3 días. Este medicamento es el primer medicamento utilizado para el tratamiento de esta enfermedad en el extranjero. Generalmente, se puede curar después de un uso. Sin embargo, tiene muchas desventajas, como ser muy destructivo para los tejidos y provocar úlceras locales si se usa incorrectamente. Es altamente tóxico y se manifiesta principalmente como náuseas, obstrucción intestinal, leucopenia y trombocitopenia, taquicardia, anuria u oliguria, por lo que debe usarse con precaución si se descubren las reacciones anteriores, se debe suspender el medicamento inmediatamente.

(2) Medicamentos antivirales: se puede utilizar crema de 5 ftalamida o pomada neta de herpes 0,25, 2 veces al día, para aplicación externa. El aciclovir se toma por vía oral, 5 veces al día, 200 mg cada vez, o su pomada se usa externamente, y el interferón α se inyecta diariamente en 3 millones de unidades, cinco días a la semana. O inyectar 3 millones de unidades de interferón en la base de la verruga, dos veces por semana.

Cuando se usa continuamente durante 2 a 3 semanas, el principal efecto secundario es el síndrome similar a la influenza y los efectos secundarios de la medicación tópica son menos frecuentes y leves.

(3) Corrosivos o desinfectantes: Los comúnmente utilizados son el ácido tricloroacético 30-50 o el ácido dicloroacético saturado, o el ácido peracético 18. Utilice 100 ml de una solución mixta de ácido acético glacial de ácido salicílico al 10% o formaldehído al 40%, fenol licuado al 2% y agua destilada con etanol al 75%, y aplíquelo localmente en el glande y el condiloma perianal una vez al día o en días alternos. el efecto es muy bueno. El desinfectante se puede aplicar externamente con tintura de yodo 20, o inyectarse en la base de la verruga con tintura de yodo 2,5-5, 0,1-1,5 ml cada vez, o aplicarse externamente con yodo 0,1-0,2, y este último debe combinarse con sistémico terapia.

(4) Medicamentos contra el cáncer

① 5-Fluorouracilo (5-F u): Generalmente se usa externamente como 5 pomadas o crema, dos veces al día, una vez cada 3 semanas Tratamiento curso. Se utilizan 2,5 ~ 5 compresas húmedas de fluorouracilo para tratar las verrugas genitales alrededor del pene y el ano. Cada aplicación se aplica durante 20 minutos, una vez al día, y 6 veces es un ciclo de tratamiento. También se puede usar polietilenglicol como base, y se puede agregar polvo de 5-FU que representa el 5% de la materia seca para hacer un supositorio para tratar el condiloma en la uretra de hombres y mujeres. También se puede inyectar 5-FU en la uretra. base, y se puede inyectar más en lotes.

② Tiotepa: Se utiliza principalmente para condilomas acuminados intrauretrales que no han podido ser tratados con 5-FU. También se pueden utilizar óvulos (cada uno con 15 mg) diariamente durante 8 días. Se agregan 10 a 15 ml de agua desinfectante en la uretra cada semana y se mantienen durante media hora. Los efectos secundarios incluyen uretritis. También puede agregar 10 mg de este producto a 10 ml y remojar el área afectada 3 veces al día durante media hora cada vez para tratar el condiloma del pene y el surco coronal del glande. Se usa principalmente para quienes tienen verrugas residuales o recaídas. después del tratamiento con otros métodos. Esta solución también se puede diluir dos veces y remojar localmente para evitar que vuelva a aparecer.

③ Colchicina: se puede aplicar una solución salina normal al 2-8% de forma externa, dos veces con 72 horas de diferencia para tratar las verrugas genitales del pene. Puede producirse erosión superficial después de la aplicación.

④ Zhengguangmicina o pingyangmicina: use 0,1 de solución salina normal para inyección intradérmica y la cantidad total se limita a 1 ml (1 mg) cada vez. La mayoría de ellos se pueden curar en una sola visita. La pingyangmicina es un sustituto de la zhengguangmicina y su uso es básicamente el mismo. La pingyangmicina 10 mg también se puede disolver en 10 ml de procaína para inyección.

8. Inmunoterapia

① Método de vacuna autóloga: utilice el homogeneizado de tejido de la verruga del propio paciente (fundiéndolo y enfriándolo para inactivar el virus) y caliéntelo (56 °C durante una hora) para recoger el sobrenadante para la inyección. Ser utilizado para el condiloma sexual perianal rebelde.

② Inductor de interferón: se puede utilizar polimiosina y tirolona. Inyecte 2 ml de polisacárido todos los días durante 10 días. Después de suspender el medicamento durante 1 a 2 meses, continúe con el medicamento. La tirolona se toma 300 mg tres veces al día, con un descanso de 4 días, o 600 mg por vía oral en días alternos.

③ La aplicación combinada de interferón, interleucina Ⅱ, prodizoxina y Libato tiene un mejor efecto curativo.

Prevención

Controlar las enfermedades de transmisión sexual es la mejor forma de prevenir la AC. Se ha descubierto que los pacientes y sus parejas sexuales deben recibir tratamiento; se debe realizar educación sanitaria y controlar la conducta sexual; los condones peneanos pueden prevenir la infección por VPH y actualmente no existe una vacuna eficaz.