¿Cuál es la diferencia entre los métodos de prueba de endotoxinas bacterianas de la farmacopea china y la farmacopea estadounidense?

CP: Definir el propósito y la potencia de la CSE. "El título de endotoxina bacteriana por 1 ng en el estándar de trabajo para endotoxinas bacterianas no debe ser inferior a 2 UE ni superior a 50 UE".

USP: No se menciona CSE.

2. Agua para examen de endotoxinas bacterianas

CP: Agua estéril para inyección, que no es compatible con cangrejos herradura con una sensibilidad de 0,03 EU/ml o superior a 37±65438±. 0 ℃ durante 24 horas. El reactivo sufre una reacción de aglutinación;

USP: agua estéril para inyección u otra agua que no reaccione con sensibilidad limitada con el reactivo de Limulus.

3. Preparación del equipo experimental

CP: Es necesario procesar el equipo experimental para eliminar posibles endotoxinas exógenas. El método habitual es secar a 250°C durante al menos 65.438 ± 0 horas, o utilizar otros métodos apropiados para confirmar que no interfiere con las pruebas de endotoxinas bacterianas.

USP: Todos los materiales y cristalería termoestables se despirogenan en un horno de aire caliente mediante un procedimiento validado de eliminación de pirógenos. La temperatura mínima y el tiempo mínimo comúnmente utilizados son 250 ℃ durante 30 minutos.

4. Preparación de solución madre estándar de endotoxina y solución estándar

CP: No mencionado.

USP: La potencia del RSE se fija en 65.438+00.000 US peu/pieza. Disuelva todo el contenido de 65,438+0 piezas de RSE en 5 ml de agua de prueba del reactivo Limulus, mezcle intermitentemente con un mezclador vórtex durante 30 minutos y diluya en serie con esta solución madre. La solución madre debe almacenarse en el congelador durante no más de 65,438+04 días para prepararla para una futura dilución. Agite vigorosamente con un mezclador vórtex antes de usar.

5. Preparación de las soluciones de prueba

CP: |Algunas muestras necesitan redisolverse, diluirse o extraerse en solución acuosa. Utilice LRW para disolver o diluir medicamentos o extraer dispositivos médicos. Algunas sustancias pueden ser más adecuadas para disolver, diluir o extraer con otras soluciones acuosas.

Para muestras que son demasiado ácidas, demasiado alcalinas o que tienen capacidad tampón, es necesario ajustar el valor de pH de la solución a analizar (o su diluyente). se requiere que esté en el rango de 6.0-8.0.

USP: Utilice LRW para disolver o diluir medicamentos o extraer dispositivos médicos. Algunas sustancias pueden ser más adecuadas para la solubilización, dilución o extracción con otras soluciones acuosas.

6. Establecimiento de límites de endotoxinas

CP: El límite de endotoxinas bacterianas (L) de medicamentos y productos biológicos se determina generalmente según la siguiente fórmula: L = K/M.

l es el límite de endotoxinas bacterianas del producto de prueba, generalmente expresado en EU/ml, EU/mg o EU/U (unidad de actividad K es el máximo aceptable por kilogramo de peso corporal humano por hora); ¿Dosis de endotoxina, unidad es UE/(kg·h), solución inyectable K=5EU/(kg·h)?

K = 2,5 UE/(kg·h) para inyección de radiofármaco, k = 0,2 UE/(kg·h) para inyección intratecal; m es la muestra de prueba máxima por kilogramo de peso corporal humano por hora Dosis; , expresado en ml/(kg·h), mg/(kg·h) o u/(kg·h). El peso medio per cápita se calcula en 60 kg y la superficie del cuerpo humano se calcula en 1,62 m2.

Si el tiempo de inyección es inferior a 1 hora, se computará como 1 hora. La dosis por metro cuadrado de superficie corporal de la muestra de prueba multiplicada por 0,027 se puede convertir en dosis por kilogramo de peso corporal (m).

USP: Límite de endotoxinas para medicamentos inyectables, definido por dosis, igual a k/m.

Para cualquier vía de administración, excepto la administración intratecal, la K es de 5 USP-EU/kg, y para la administración intratecal, la K es de 0,2 USP-EU/kg. Para la administración no intratecal de radiofármacos, el límite de endotoxinas es 175/V, siendo V la dosis máxima recomendada (mL).

Para los radiofármacos intratecales, el límite de endotoxinas es 14/V, y para la dosis por superficie corporal cuadrada (normalmente fármacos antineoplásicos), la fórmula es K/M, donde K=5EU/kg, M es ( dosis máxima/m2/hora × 1,80m2)/70kg.

7. Experimento de verificación de sensibilidad

CP: Cuando el tubo con la concentración máxima de 2.0λ es positivo, el tubo con la concentración mínima de 0.25λ es negativo y el control negativo. El tubo es negativo, el experimento es efectivo.

Calcule la media geométrica de la concentración del punto final de la reacción de acuerdo con la siguiente fórmula, que es el valor medido de la sensibilidad del reactivo de Limulus (λ c): λ c = LG-1 (σ x/4).

USP: |Todos los tubos de ensayo duplicados de la solución estándar de menor concentración son negativos y el experimento es válido.

Utilice la siguiente fórmula para calcular el promedio de los valores logarítmicos de la concentración final, y luego calcule el recíproco del promedio: media geométrica de la concentración final = antilog (σ e/f).

σ e es la suma de valores logarítmicos de la concentración final de la serie de dilución, f es el número de tubos repetidos y la media geométrica de la concentración final de la reacción es el valor medido de la sensibilidad del reactivo de Limulus.

8. Experimento limitado por método de gel:

CP: Preparación de la solución: La solución con endotoxina añadida es la "solución de prueba". - USP: "Solución de prueba diluida".

CP: Preparar las soluciones A y B con una solución problema cuyo factor de dilución sea MVD y cuyas interferencias hayan sido eliminadas. -USP; Prepare las soluciones A y B utilizando un diluyente que no exceda el MVD.

CP: Durante la nueva prueba, la solución a requiere 4 tubos paralelos. Cuando todos los tubos paralelos son negativos, la solución de prueba cumple con los requisitos.

- USP: En el retest, si ambos tubos paralelos de solución A son negativos, la solución de prueba cumple con los requisitos.

USP: si la solución de prueba se diluye en una determinada proporción de dilución que no excede el MVD y el resultado de la prueba es positivo, la solución de prueba se puede diluir aún más, pero no excede el MVD, y luego la prueba se vuelve a realizar. -CP; sin reglas.