¿Qué son los vectores de clonación intermedios, los vectores de transformación intermedios, los vectores de transformación unidireccionales y los vectores de transformación binaria?

Agrobacterium tumefaciens es una bacteria que puede inducir tumores en plantas. Agrobacterium tumefaciens contiene un plásmido que induce tumores en plantas (plásmido inductor de tumores), denominado plásmido Ti. El plásmido Ti de Agrobacterium de tipo salvaje contiene dos regiones relacionadas con la oncogenicidad: una es la región de ADN-T (región de ADN transferida), que contiene genes oncogénicos, la otra es la región de toxicidad (región de Viulencia), que se encuentra en la T; -ADN Juega un papel en los procesos de corte, transferencia e integración. Agrobacterium puede insertar ADN-T en el genoma de la planta infectando heridas de la planta. Por tanto, Agrobacterium es un sistema de transformación genética vegetal natural. El gen diana se inserta en la región de ADN T modificada y el gen exógeno se transfiere e integra en células vegetales mediante la infección por Agrobacterium.

Agrobacterium tumefaciens LBA4404 contiene el plásmido Ti modificado pAL4404, que solo contiene las regiones vir y ori, y la región T-DNA ha sido eliminada. Cuando se utiliza LBA4404 para la transducción de genes vegetales, es necesario utilizarlo junto con un vector binario adecuado, como pRI909, que contiene una región de ADN-T. Se eliminan los genes oncogénicos en esta región y se eliminan los marcadores de selección y policlonales apropiados. sitio insertado. Durante el experimento, el gen objetivo se inserta en el vector binario y se electropora en LBA4404. El ADN recombinante puede infectar células vegetales a través de la región vir del plásmido pAL4404 e integrar el gen extraño en el ADN cromosómico de las células vegetales.