Solicitud urgente: pasos específicos para realizar experimentos de cultivo de células de ratón
Mira esto:
1. Recorte y lavado de tejidos: Recorte para eliminar los vasos sanguíneos y otros tejidos diversos y enjuague varias veces con la solución D-Hanks para eliminar los coágulos de sangre.
2. Corte: utilice tijeras oculares afiladas para cortar repetidamente el músculo ventricular en trozos pequeños de 1 ~ 2 mm. Durante el proceso de corte, se pueden agregar de 1 a 2 gotas de líquido de cultivo de manera adecuada para mantener el tejido húmedo.
3. Digestión: Mueva el bloque de tejido a una botella de vidrio de 100 ml, agregue de 30 a 50 veces la cantidad de tejido con solución de digestión de tripsina al 0,08% precalentada a 37°C y digiera en una coctelera a 37°C. C durante unos 6 minutos.
4. Separación celular: Después de la digestión, utilizar una pipeta para aspirar suavemente y soplar varias veces para esparcir los bloques de tejido. Después de dejar reposar durante 2 minutos, absorber la suspensión anterior (desechar la primera suspensión). Filtrar a través de una malla de nailon de malla 140 en un tubo de ensayo que contiene la solución de parada, centrifugar a 1000 rpm durante 10 minutos y desechar. Agregue de 30 a 50 veces el volumen de tejido de la solución de digestión con tripsina al 0,08% precalentada a 37 °C en la botella de vidrio que contiene los bloques de tejido y repita los pasos 4 y 5 hasta que desaparezcan la mayoría de los bloques de tejido.
5. Recuento de células: Tomar un poco de la suspensión celular obtenida anteriormente, diluirla adecuadamente, añadir solución de azul tripano para la tinción, utilizar una tabla de recuento de glóbulos rojos para contar las células vivas y las muertas, y calcular. densidad celular y tasa de supervivencia.
6. Inoculación de células: Inocular células en frascos de cultivo de 30 ml, 6×105 por frasco, y cultivarlas en medio DMEM que contenga 15% de suero de ternera.
7. Cultivo: Cultivar en incubadora a 37°C y 5% CO2 durante 65.438±02 horas. Bajo el microscopio, las células crecen de forma adherente y adquieren una forma poligonal. Después de 24 horas de cultivo, las células se unieron y algunas empezaron a latir.
8. Cambiar el medio: Después de cultivar durante 3 a 5 días, reponer el líquido celular.