¿Qué significa la secuenciación cuantitativa de genes de Qualcomm?

El alto rendimiento es relativo a la secuenciación de primera generación. La secuenciación de primera generación solo puede medir un fragmento de una muestra a la vez, y la cantidad de datos generados es relativamente pequeña, mientras que la cantidad de datos generados por la secuenciación de alto rendimiento es de decenas o cientos de gramos a la vez, por lo que muchas muestras se puede medir al mismo tiempo.

En 2000, la secuenciación en 3700, MegaBace y otros instrumentos también era una secuenciación de alto rendimiento, que se comparaba con la secuenciación manual o el gel continuo.

Pero después de 2005, la secuenciación de alto rendimiento cambió para referirse a la secuenciación de segunda generación, como 454, Solexa (posteriormente cambiada a Illumina) y SOLiD, que es miles de veces o incluso más que la primera. secuenciación de generación como 3730. El rendimiento es cientos de millones de veces, por lo que se denomina secuenciación de alto rendimiento.

Principios de datos ampliados:

El protocolo de secuenciación se basa en el método de secuenciación didesoxi (Sanger et al., 1977). Para realizar la secuenciación por pares de insertos de cada clon, se deben proporcionar dos placas de reacción de secuenciación circular de 384 pocillos por placa de ADN plantilla de plásmido. La reacción de secuenciación utiliza Big Dye Terminator Chemistry versión 3.1 (Applied Biosystems) y M13 estándar o cebadores directos e inversos de uso común. Las reacciones de secuenciación se configuraron utilizando una estación de trabajo de pipeteo biomefx (Beckman).

El manipulador es responsable de dividir en alícuotas la muestra plantilla y mezclarla con la solución de reacción, que contiene didesoxinucleótidos, nucleótidos marcados fluorescentemente, TaqDNA polimerasa, cebadores de secuenciación y tampones. Las plantillas y las placas de reacción tienen códigos de barras y se rastrean mediante un lector de códigos de barras en la estación de trabajo de pipeteo BiomekFX para garantizar una transferencia sin errores de plantillas y soluciones de reacción. Se ciclaron continuamente de 30 a 40 pasos de amplificación lineal en MJResearch Tetrads o en un termociclador 9700 (applied Biosystems).

Enciclopedia Baidu-Secuenciación de alto rendimiento del genoma