Red de conocimientos sobre prescripción popular - Masaje de pies y cuidados de la salud - ¿Cuáles son las etapas generales del cultivo de tejidos vegetales?

¿Cuáles son las etapas generales del cultivo de tejidos vegetales?

¿Por qué etapas suele pasar el cultivo de tejidos vegetales?

Un proceso completo de cultivo de tejidos vegetales generalmente incluye los siguientes pasos:

(1) Etapa de preparación

Consulte la literatura relevante y formule un plan de cultivo práctico basado en los datos de plantas similares que se hayan cultivado con éxito y combinado con la situación real. Luego, prepare los desinfectantes químicos y los medios de cultivo adecuados necesarios para las diferentes etapas de cultivo de acuerdo con el plan experimental y utilícelos después de la esterilización en autoclave o con filtro.

(2) Selección y desinfección de explante

Seleccione el sitio apropiado como explante, realice un tratamiento previo adecuado después de la cosecha y luego desinféctelo. Cortar los explantes esterilizados en trozos pequeños de cierto tamaño en condiciones estériles, o pelar las puntas del tallo, quitar las anteras e inocularlas en el medio de cultivo primario.

(3) Cultivo primario

Los materiales inoculados se cultivan en una sala de cultivo o incubadora luminosa para promover la desdiferenciación de las células diferenciadas en los explantes para formar callos o yemas terminales y axilares. Los cogollos germinan directamente para formar cogollos. Luego, el callo se transfiere a un medio de diferenciación para diferenciarse en diferentes primordios de órganos o formar cuerpos embrioides y, finalmente, convertirse en plantas regeneradas.

(4) Subcultivo

El número de yemas y protocormos diferenciados es limitado, y se utiliza un medio de subcultivo adecuado para múltiples esquejes y transferencias. Cuando las plántulas se hayan multiplicado hasta un número determinado, una parte de ellas se utilizará para fortalecer las plántulas y echar raíces, y la otra parte se almacenará o se seguirá propagando. La detección del virus debe realizarse con antelación cuando se cultivan vacunas libres de virus.

(5) Cultivo de enraizamiento

Los brotes recién formados suelen ser débiles y la mayoría no tiene raíces. En este momento, la concentración de citoquinina se puede reducir o no agregar para aumentar la concentración. de auxinas y favorecer que las plántulas echen raíces y mejoren su salud.

(6) Endurecimiento y trasplante de plántulas

Seleccione plántulas con raíces de crecimiento fuerte para el endurecimiento al aire libre. Después de que las plántulas se adapten al ambiente externo, trasplántelas a un sustrato suelto y transpirable. atención a Aislar, hidratar y dar sombra para prevenir plagas y enfermedades. Cuando las plántulas del cultivo de tejidos están completamente vivas y han crecido hasta cierto tamaño, se pueden trasladar al campo para su producción.

Por ejemplo: punta del tallo → desinfección de superficies → inoculación con medio de inducción → crecimiento de la punta del tallo → detección e identificación de virus → cultivo de plantas pequeñas sin raíces → cultivo de raíces → plantas pequeñas completas → endurecimiento de plántulas durante 20-25 días → los trasplantes sobreviven.

El proceso será ligeramente diferente para las diferentes variedades. Para las plántulas de árboles frutales, se requieren injertos y otras operaciones. Sin embargo, para las plántulas de fábrica de cultivo de tejidos, generalmente cada proceso se puede organizar de acuerdo con el diagrama de flujo anterior. Sólo cuando estas operaciones estén bien conectadas y coordinadas entre sí se podrá mejorar la eficiencia de la producción. Durante el proceso de cultivo de tejidos vegetales, ¿cuáles son las dos etapas importantes por las que pasan las células vegetales?

Basado en el principio: totipotencia celular.

Los órganos, tejidos o células vegetales aislados, tras ser cultivados durante un periodo de tiempo, formarán callos mediante división celular. El proceso de producción de callos a partir de órganos, tejidos o células vegetales altamente diferenciados se denomina desdiferenciación de células vegetales o desdiferenciación. El callo producido por la desdiferenciación puede continuar cultivándose y rediferenciarse en órganos como raíces o brotes. Este proceso se llama rediferenciación. Las plántulas de tubo de ensayo formadas después de la rediferenciación se pueden trasplantar al suelo y desarrollarse hasta convertirse en plantas completas. Proceso general del cultivo de tejidos vegetales

Pasos básicos de los experimentos de cultivo de tejidos vegetales

1. Preparación del licor madre

1. Preparación del licor madre de macroelementos MS

Generalmente, se prepara una gran cantidad de elementos en una solución madre 10 veces mayor y luego se diluye 10 veces cuando se usa. Pese las cantidades de NH4NO3, KNO3, KH2PO4, MgSO4.7H2O y CaCl2.2H2O en orden de acuerdo con las cantidades en la tabla de fórmulas 10 veces. Después de pesar todos los medicamentos, disuélvalos uno por uno con agua destilada. todo disuelto, finalmente ajuste el volumen a 1000ml, transfiéralo a una botella de reactivo de boca estrecha de 1000ml, etiquételo, indique el nombre de la solución madre, aumento, fecha de preparación y nombre del preparador y guárdelo en refrigerador a 4°C. para uso posterior.

2. Preparación de la solución madre de oligoelementos MS

Generalmente, los oligoelementos se preparan en una solución madre 100 veces mayor y luego se diluyen 100 veces cuando se usan. Pesar MnSO4?4H2O, ZnSO4?7H2O, H2BO3, NaMoO4?2H2O, CuSO4?5H2O, CoCl2?6H2O en orden según las cantidades en la tabla de fórmulas. Ampliar la cantidad 100 veces. Disuélvelos uno por uno con agua destilada. se disuelven, use un matraz volumétrico. Ajuste el volumen a 1000 ml, transfiéralo a una botella de reactivo de boca estrecha de 1000 ml, pegue una etiqueta con el nombre de la solución madre, aumento, fecha de preparación y nombre del preparador, y guárdela en. un refrigerador a 4°C para su uso posterior.

3. Preparación del licor madre de sal de hierro MS

Generalmente, la sal de hierro se prepara en un licor madre 100 veces mayor y luego se diluye 100 veces antes de su uso. Pesar las cantidades de FeSO4?7H2O y Na2?EDTA?2H2O que se expanden 100 veces según las cantidades en la tabla de fórmulas. Colocar FeSO4?7H2O y Na2?EDTA?2H2O en 200ml de agua destilada respectivamente, calentar y agitar continuamente para disolver. (Agitador magnético, revuelva mientras calienta). Continúe calentando, vierta lentamente la solución de FeSO4 en la solución de Na2? EDTA y revuelva continuamente cuando esté cerca de hervir. Después de que la solución se enfríe, agregue agua destilada hasta el volumen final de 1000 ml. frasco y agite vigorosamente durante 1 a 2 minutos. Adjunte una etiqueta para indicar el nombre de la solución madre, aumento, fecha de preparación y nombre de la persona que la preparó. Guárdelo a temperatura ambiente en la oscuridad durante un período de tiempo para permitir una reacción completa, luego guárdelo en un refrigerador a 4°C para su uso posterior.

4. Preparación de la solución madre de compuesto orgánico MS

Generalmente, el compuesto orgánico se prepara en una solución madre 100 veces mayor y luego se diluye 100 veces cuando se usa. Pesar las cantidades de mioinositol, vitamina B1, niacina, glicina y vitamina B6 que se expanden 100 veces según las cantidades en la tabla de fórmulas, disolverlas en orden con agua destilada y diluir a 500 ml. Transferir a un vaso estrecho de 500 ml. Boca el frasco de reactivo y pégalo. Etiquétalo con el nombre de la solución madre, la fecha de preparación y el nombre de la persona que la preparó, y guárdalo en un refrigerador a 4°C para su uso posterior.

2. Configuración de las hormonas vegetales

Hormonas comunes: ácido diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido naftalenoacético (NAA), ácido indolacético (IAA), indolindol- Ácido 3-butírico (IBA), cinetina (6-furfurilaminopurina, KT), 6-bencilaminopurina (6-BA), giberelina (GA3),

1. Factores de crecimiento:

(1) La función principal de las auxinas en el cultivo de tejidos es inducir la división celular y la diferenciación de raíces, e inducir callos

(2), hormonas de crecimiento comunes: ácido diclorofenoxiacético (2,4-D), naftaleno acético ácido (NAA), ácido indol acético (IAA), ácido indol-3-butírico (IBA). NAA, IAA e IBA se utilizan ampliamente para el enraizamiento y el 2,4-D es beneficioso para la inducción y el crecimiento de callos. El IAA se fotoliza fácilmente, así que tenga cuidado de guardarlo en una botella de reactivo marrón y no lo guarde por mucho tiempo.

(3) Método de disolución: Disuelva previamente con una pequeña cantidad de 1 mol/L de NaOH o alcohol al 95 %, luego agregue agua destilada para ajustar al volumen, lo primero es mejor.

(4) Almacenamiento: Después de formular hasta una determinada concentración, guárdelo en el refrigerador

2. Citoquininas

En el cultivo de tejidos, las citoquininas promueven principalmente la división celular y diferenciarse en yemas adventicias sobre callos u órganos. Las citoquininas a menudo cooperan con las auxinas para regular la división celular, el alargamiento celular, la diferenciación celular y la formación de órganos.

(1) Las citoquininas de uso común incluyen: 6-bencilaminopurina (6-BA), cinetina (6-furfurilaminopurina, KT), zeatina (ZT), tiadiazol fenilurea (tidiazurón, TDZ)

(2) Método de disolución: Disuélvalo previamente con una pequeña cantidad (1 ml) de 1 mol/L de HCL, luego agregue agua destilada para ajustar al volumen.

(3) Almacenamiento: Después de formular hasta una determinada concentración, conservar en el frigorífico.

3. Giberelina (GA3)

(1) Método de disolución: Pre- disolver con una pequeña cantidad de alcohol al 95%, luego agregar agua destilada para ajustar al volumen.

(2) Almacenamiento: Después de formular hasta una cierta concentración, conservar en el refrigerador.

(3) Las giberelinas son fácilmente solubles en agua, pero son inestables y fáciles de disolver cuando se disuelven en Descomposición

(4) Esterilización: Es fácil de descomponer a altas temperaturas y necesita ser filtrado y esterilizado

4. Ácido abscísico

(1). ) Disolución: Es fácilmente soluble en solución de NaHCO3, cloroformo o acetona.

(2) Almacenamiento: Tiene estabilidad térmica, pero es propenso a la fotólisis. Después de ser formulado a una determinada concentración, conservarlo en el frigorífico

3. Preparación y esterilización del medio de cultivo

(1) Preparación del medio de cultivo

1 Coloque en orden las soluciones madre y las hormonas vegetales necesarias y coloque el material de vidrio limpio en los lugares designados.

2. Tome un vaso de precipitados y llénelo con 200 ml de agua destilada. Agregue el licor madre y las hormonas vegetales al vaso de precipitados según la cantidad requerida de la fórmula del medio de cultivo. Pese la sacarosa y el agar según corresponda. al medio de cultivo correspondiente y agregarlos al vaso de precipitado, calentar en estufa eléctrica hasta que el agar se derrita por completo, luego agregar agua destilada hasta llevarlo al volumen requerido.

3. Después de mezclar bien, use 1 mol/LNaOH y 1 mol/LHCl para ajustar el pH del medio al valor de pH requerido del medio.

4. Dispensar el medio de cultivo en botellas de boca ancha mientras esté caliente. Sellar la botella. Para ser esterilizado.

(2) Esterilización del medio de cultivo

Temperatura de esterilización y tiempo de esterilización: esterilización a 121°C (1,06kg/cm2) durante 20 minutos. (Si los materiales bacterianos utilizados en los experimentos, como agua esterilizada e instrumentos, se esterilizan a 121 °C (1,06 kg/cm2) durante 30 minutos)

1. Compruebe el nivel de agua en el recipiente exterior de En la olla de esterilización, agregue agua cuando la cantidad de agua sea demasiado baja. Coloque el medio de cultivo empaquetado en el cubo de esterilización del recipiente de esterilización.

2. Tapa la olla, sigue las instrucciones y asegúrate de que esté correctamente tapada, configura los parámetros de temperatura y tiempo, y enciende la corriente para calentar y esterilizar.

3. Una vez transcurrido el tiempo de esterilización, primero corte la energía y deje que la temperatura en la olla de esterilización baje naturalmente. Cuando el indicador del manómetro de la olla de esterilización baje a 0, abra la válvula de escape. afloje el perno y abra el recipiente de esterilización. Tape el recipiente y retire el medio de cultivo esterilizado.

4. El medio de cultivo recién esterilizado está en forma líquida. No lo agite vigorosamente al sacarlo, de lo contrario parte del medio de cultivo se adherirá a la pared del frasco. Colóquelo sobre una mesa nivelada para que se enfríe naturalmente. Déjelo a temperatura ambiente durante 1-2 días y observe si hay crecimiento microbiano para determinar si el medio de cultivo está completamente esterilizado. Sólo se puede utilizar después de comprobar que no hay crecimiento de bacterias.

IV. Técnicas de operación aséptica e inoculación

1. Antes de la inoculación, limpie la mesa de trabajo ultralimpia con 75 bolas de algodón con alcohol y coloque el medio de cultivo y los utensilios de inoculación en el ultralimpio. banco de trabajo limpio En la encimera, encienda la lámpara ultravioleta del banco de trabajo ultralimpio y la lámpara ultravioleta de la sala de inoculación, irradie durante unos 30 minutos y luego apague la lámpara ultravioleta. Encienda el ventilador de la habitación y abra ligeramente el deflector de vidrio del banco de trabajo ultralimpio. Después de 20 minutos de ventilación, podrá realizar operaciones asépticas. (Este paso es responsabilidad de una persona dedicada)

2. Durante el proceso de esterilización de la sala de inoculación, los explantes se esterilizan en superficie al mismo tiempo. Primero enjuague el material inoculado con agua corriente, absorba el agua, córtelo en trozos de aproximadamente 70 mm de largo y colóquelos en un vaso de precipitados de 500 ml. Enjuague dos veces con agua destilada. Vierta el agua destilada y vierta 0,1 de agua con cloruro de mercurio para desinfectar. Sumerja los ingredientes y déjelos en remojo durante unos 10 minutos (revuelva con unas pinzas varias veces durante este período).

3. Transfiera los materiales de inoculación en el desinfectante al banco de trabajo ultralimpio. Utilice pinzas esterilizadas para transferir el material de inoculación esterilizado a un vaso de precipitados, lávelo tres veces con agua esterilizada, no menos de 1 minuto cada vez, y agite el vaso de precipitados continuamente durante el lavado para asegurarse de que el desinfectante se elimine por completo.

Después de la última limpieza, transferir a una bandeja estéril y cortar el material inoculado en un tamaño determinado (receptáculo 0,5 cm2, sección del tallo 0,5-1 cm).

4. Quitar el tapón del frasco de cultivo y quemar la boca del frasco con fuego. Utilice unas pinzas para insertar suavemente el explante en el agar y cerrar inmediatamente la tapa.

5. Después de la operación, sumerja las pinzas y demás instrumentos en alcohol al 75%. Los instrumentos operativos deben desinfectarse antes de cada uso. El método consiste en sacar el equipo sumergido en alcohol y colocarlo sobre la llama de una lámpara de alcohol para quemarlo por completo, y luego usarlo después de enfriar.

6. Coloque el frasco de cultivo en la incubadora, cultívelo a la temperatura requerida, observe y registre. ¿El cultivo de tejidos vegetales tiene que pasar por la vía del callo?

¿El cultivo de tejidos vegetales tiene que pasar por la vía del callo? En el cultivo de tejidos vegetales, es necesario formar un callo típico a partir de un explante. iniciación, división y formación. ¿Es generalmente necesario utilizar un medio de cultivo que contenga hormonas vegetales para el cultivo de tejidos vegetales?

Si las plantas pueden proporcionar sus propias hormonas, generalmente no es necesario que las proporcionen los humanos. Sin embargo, las hormonas proporcionadas por los humanos sí pueden. ayudar al crecimiento de las plantas dentro de un cierto rango, inhibirá el crecimiento de las plantas, por lo que debe haber un rango, y algunas partes del crecimiento de las plantas están controladas por diferentes concentraciones. Cuando se usan hormonas, se debe prestar atención a la concentración técnica. p>

¿Qué tipo de medio de cultivo se utiliza generalmente para el cultivo de tejidos vegetales? Solución

En condiciones estériles, los bloques de tejido o las células obtenidas del cuerpo se cultivan fuera del cuerpo en diversas condiciones que simulan el cuerpo. Las condiciones de cultivo incluyen una solución nutritiva adecuada, O2, CO2, valor de PH y presión osmótica. y temperatura, etc., y también para prevenir la contaminación microbiana. Los cambios dinámicos como el movimiento, la proliferación, la diferenciación y la fagocitosis de las células vivas se pueden observar directamente con un microscopio de contraste de fase invertida, y el proceso de cambios continuos en las células vivas se puede registrar verdaderamente mediante microfotografía, microfotografía o grabación de microvideo.

Esta tecnología es un método relativamente simple, sensible y práctico. Se han establecido una variedad de líneas celulares que se han utilizado ampliamente en la investigación experimental. Las células de cultivo de tejidos también se pueden utilizar para estudiar los efectos directos de diversos factores físicos, químicos y biológicos en las células. El cultivo de tejidos trabaja en estrecha colaboración con las técnicas mencionadas anteriormente para lograr resultados que son difíciles de lograr simplemente con experimentos in vivo. ¿Qué etapas suele atravesar un matrimonio cuando se rompe?

La ruptura de una relación matrimonial suele pasar por cuatro etapas: 1. Período de conflicto. Después de que una pareja pasa por el período del amor ardiente, entra en el período de conflicto. Si los conflictos no se resuelven a tiempo, se convertirán en disputas enredadas. En general, los conflictos y disputas entre partes de bajo nivel cultural y temperamento colérico o sanguíneo suelen manifestarse en filtraciones, como riñas, peleas, destrucción de cosas, etc. Puede resolverse mediante la mediación, pero luego se repite y la guerra civil continúa. Entre las personas de alto nivel cultural y las de temperamento flemático y melancólico, suele manifestarse como depresión interna, es decir, por fuera parecen tranquilos y pendencieros, pero por dentro son indiferentes entre sí y tienen vacíos en el corazón. , lo que dificulta que la mediación sea eficaz. 2. Período de alerta. Con la acumulación de conflictos y disputas, las parejas gradualmente se distancian y desconfían unos de otros, comúnmente conocidos como "compañeros de cama". Algunos ocultan sus propiedades, ingresos y gastos, y otros ocultan sus interacciones con el sexo opuesto. Para evitar que la otra parte capte la pista y sepa la verdad, las dos partes están en guardia entre sí en términos de relaciones económicas y sociales, e incluso las cuestiones de carrera personal, cuestiones futuras, etc., se mantienen en secreto, y Se establecen capas de defensas para protegerse unos de otros como un ladrón. 3. Período de crack. Los secretos siempre se filtran algún día. La filtración de secretos conduce a disputas más serias, lo que intensifica el distanciamiento y la vigilancia, lo que resulta en un círculo vicioso y, finalmente, aparecen divisiones emocionales. Las divisiones emocionales se manifiestan en una fuerte insatisfacción emocional y divergencias de comportamiento. En este momento, la mayoría de las personas con condiciones de vida viven separadas; las que no tienen condiciones de vida, aunque vivan juntas, lo hacen espalda con espalda. 4. Periodo de ruptura. La brecha se hizo cada vez más grande y finalmente la relación se rompió por completo. De: 99weiqing. El cultivo de tejidos vegetales se puede dividir en cinco etapas, desde la inoculación hasta las plántulas comerciales.

Un proceso completo de cultivo de tejidos vegetales generalmente incluye los siguientes pasos:

(1) Etapa de preparación

Consulte la literatura relevante y formule un plan de cultivo práctico basado en los datos de plantas similares que se hayan cultivado con éxito y combinado con la situación real.

Luego, prepare los desinfectantes químicos y los medios de cultivo adecuados necesarios para las diferentes etapas de cultivo de acuerdo con el plan experimental y utilícelos después de la esterilización en autoclave o con filtro.

(2) Selección y desinfección del explante

(3) Cultivo primario

(4) Subcultivo

El número de yemas y protocormos diferenciados es limitado, y se utiliza un medio de subcultivo adecuado para el corte múltiple y la transferencia. Cuando las plántulas se hayan multiplicado hasta un número determinado, una parte de ellas se utilizará para fortalecer las plántulas y echar raíces, y la otra parte se almacenará o se seguirá propagando. La detección del virus debe realizarse con antelación cuando se cultivan vacunas libres de virus.

(5) Cultivo de enraizamiento

(6) Endurecimiento y trasplante de plántulas

El cultivo de tejidos vegetales es una forma de estudiar plantas, por lo que las carreras relacionadas con la investigación de plantas pueden utilizarlo. La más importante es la de horticultura y la de agronomía, seguida de la de ingeniería ambiental, todas ellas de uso. cultivo de tejidos. Biología Optativa 3 ¿Es necesario esterilizar el cultivo de tejidos vegetales?

Es necesario esterilizar el medio de cultivo y desinfectar el tejido vegetal

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