Cómo cultivar cepas del hongo Tremella
La especie madre y la especie original se cultivan en tubos de ensayo respectivamente para separar y purificar el micelio de Tremella y el micelio de árbol de alcanfor. Al producir semillas madre, primero retire el micelio de Tremella y amplíelo hasta la cantidad requerida de tubos. Luego cultívelo a 25°C hasta que el diámetro de las colonias de Tremella sea de aproximadamente 1 cm. En este momento, se inocula una cantidad muy pequeña de micelio de Tremella en cada tubo de ensayo que contiene micelio de Tremella. Cuando crecen juntos, se pueden vender o utilizar para la producción de semillas originales.
Si se injerta primero el micelio del árbol de alcanfor, debido a que el micelio del árbol de alcanfor crece rápidamente, cubrirá rápidamente la pendiente y consumirá nutrientes, y luego el micelio de Tremella no crecerá fácilmente.
Si se inoculan en un tubo de ensayo micelio de ceniza de incienso y micelio de Tremella al mismo tiempo, también habrá menos micelio de Tremella y más micelio de ceniza de incienso.
Por lo tanto, a la hora de producir especies madre de Tremella (especies de probeta), debemos prestar atención al orden de inoculación y controlar la proporción de ambas.
El hongo Tremella y sus "bacterias asociadas" pueden cultivarse artificialmente con fines alimentarios y medicinales. Actualmente, sólo Tremella fuciformis y Tremella fuciformis pertenecen a esta categoría de bacterias. Durante la formación del cuerpo frutal de Tremella fuciformis, además del micelio puro del hongo Tremella, también debe contar con la ayuda de "bacterias acompañantes", es decir, el hongo negro Tremella no solo debe tener micelio puro del hongo negro, sino también Rhizoctonia spp. ayuda, ambos son indispensables. En circunstancias normales, el micelio puro de Tremella y Black Fungus crece muy lentamente y tiene una capacidad débil para descomponer la lignina y la celulosa. Dependen respectivamente de la matriz de descomposición del micelio Xianghui y del micelio de pelo grueso para proporcionar nutrientes para su crecimiento y desarrollo; de lo contrario, es imposible formar cuerpos fructíferos. Por lo tanto, al reproducir la especie madre Tremella y la especie madre Tremella, los dos micelios correspondientes deben trasplantarse al mismo medio de cultivo para un cultivo mixto. Tomando a Tremella fuciformis como ejemplo, se introducen dos tecnologías de producción de semillas mixtas de hifas:
1. Método de injerto mixto de semillas madre inclinadas (Figura 33-1) Tome la semilla madre micelial pura aislada del hongo Tremella y realice una nueva. cría.
Coloque 1 tubo de ensayo inclinado PDA junto con el inoculador en la sala de inoculación (caja) y transfiéralo según una operación aséptica, es decir, seleccione un trozo de bacteria del tamaño de arroz y medio de cultivo y transfiéralo a la inclinación del tubo de ensayo en blanco. Sobre el medio de cultivo, añadir tapones de algodón e incubar a una temperatura constante de 22-24°C durante 6-8 días. Cuando el micelio de Tremella crece hasta alcanzar la forma de una hortensia, como el tamaño de una soja, se traslada a la sala de inoculación (caja) junto con la semilla madre de fresno, y se inocula un pequeño trozo de la semilla madre de fresno aproximadamente 2 cm de distancia de la masa micelial pura de Tremella fuciformis según operación aséptica. Después de 2 días de cultivo, se pueden ver hifas blancas en el bloque de inoculación y se puede formar una bola de pelo blanco para cubrir las hifas puras del hongo blanco en aproximadamente 7 días. , y la bola de pelo blanco estará cubierta en 12-15 días.
Cabe señalar que cuando se utilizan las especies madre mixtas de Tremella y Cinnamomum camphora para la propagación de semillas originales, se deben cortar los extremos delantero y trasero del bisel, y solo la Tremella blanca con forma de hortensia. Se transfiere micelio y micelio de alcanfor gris profundo cercano. Por lo tanto, 1 semilla madre biselada solo puede recibir 1 botella de semilla original.
Figura 33-1 Método de mezcla de semillas madre inclinadas
Método de inoculación mixta de semillas originales de aserrín embotellado (Figura 33-2) Si no hay micelio puro de Tremella, las esporas de Tremella se cultivarán en esporas La especie madre se inocula luego en la especie madre Tremella elaborada a partir de medio de cultivo de aserrín embotellado para cultivo mixto.
De acuerdo con los requisitos de inoculación, de acuerdo con la proporción de 1 especie madre oblicua de Xianghui por 12-15 botellas de medio de cultivo de aserrín, combine los tubos de ensayo de la especie madre de hongo Xianghui, el medio de cultivo de aserrín embotellado esterilizado. y el medio de inoculación Coloque el equipo en la caja de inoculación, siga la operación aséptica, use una pala de inoculación para seleccionar un trozo de semilla madre del hongo Xianghui y colóquelo en la botella de medio de cultivo de aserrín. Después de la inoculación, pase a 24-26°C para el cultivo. Se pueden ver hifas blancas brotando en el bloque inoculado en aproximadamente 2 días. Después de eso, es necesario realizar controles cada dos días, y cualquier bacteria extraña encontrada será detectada y eliminada a tiempo. Cuando se cultiva durante aproximadamente 11 días, el micelio del árbol de alcanfor puede extenderse dentro del medio de cultivo unos 3 cm. En este momento, se pueden observar secreciones de color marrón grisáceo o marrón oscuro en la superficie del medio, lo que indica que el micelio de Antrodia camphorata está creciendo vigorosamente y que la especie madre Tremella debe inocularse a tiempo.
Según la proporción de 1: 12-15, tome el tubo de ensayo madre de esporas de Tremella y la semilla madre de cultivo de Lentinus edodes en el medio de cultivo de aserrín, colóquelos en la sala de inoculación (caja) y córtelos. Lentinus edodes con un cuchillo de inoculación estéril En la superficie del micelio, use una pala de inoculación estéril para seleccionar una pequeña cantidad de esporas de Tremella e inocularlas en el micelio de Lentinus edodes (Figura 33-2). Después de mezclar, mueva la botella a 23-25 °C para el cultivo. Después de aproximadamente 10 días, se pueden ver hifas blancas espesas creciendo en el lugar donde se inoculó Tremella. Después de un mayor cultivo durante 18 días, aparecieron gotas de agua rojas y amarillas, y después de 25 días, se pudieron observar primordios de cuerpos fructíferos retorcidos, lo que indica que el cultivo fue exitoso. 1 botella de aserrín mixto se puede ampliar a 30-40 botellas de semillas originales (semillas secundarias).
Figura 33-2 Método de mezcla de la semilla original de aserrín embotellado
1. Esporas de Tremella 2. Vainilla 3. Cortar la capa superficial de alcanfor;
4. Recoja las esporas de Tremella; 5. Inocúlelas en la botella de cepa de ceniza de incienso.
La producción de las tres especies originales depende del crecimiento de la especie original, del tamaño de la base de la oreja y de la profundidad de "alimentación" del micelio de Tremella, que determina el número de botellas de la original. especies que conviene ampliar en cada botella. Para garantizar la calidad, intente mantenerla entre 40 y 60 botellas. Si la semilla original se puede revolver uniformemente para que el micelio del hongo blanco y el micelio de ceniza de incienso se mezclen uniformemente, cada botella de semilla original también puede recibir entre 100 y 200 botellas de semillas para plantar.
Notas Para producir excelentes cepas de Tremella fuciformis, además de los requisitos anteriores, como el funcionamiento aséptico, también se debe prestar atención a los siguientes aspectos:
1. micelio de hongo y La combinación de micelio de alcanfor también es específica. Por lo tanto, para producir cepas de Tremella eficaces, se deben obtener cultivos puros (incluidos los conidios de levadura o el micelio de Tremella) y el micelio de agaricus puro del mismo hongo. El micelio de Tremella y el micelio de árbol de alcanfor obtenidos de diferentes hongos (especies de árboles) en diferentes áreas o en la misma área no se pueden intercambiar ni combinar a voluntad. De lo contrario existe la posibilidad de declive. El efecto de la unión de intercambio debe juzgarse en función de la colonización del micelio de Tremella en un medio de aserrín, el tamaño de la base de la oreja formada y el grado de apertura de la membrana. Cualquier micelio de Tremella que pueda seguir creciendo, formar una base de mazorca y abrirse suavemente puede seguir expandiéndose y usarse para la producción; de lo contrario, no se puede usar.
Proporción de inoculación: Según el lento crecimiento del micelio de Tremella, el crecimiento del micelio del árbol de alcanfor es rápido.
Para esta característica, en cultivo mixto puro, debemos prestar atención a la proporción de inoculación de micelio de Tremella y micelio de Grifola frondosa. Para controlar la proporción de inoculación, lo ideal es cultivar primero el micelio de Tremella y luego mezclarlo con el micelio de Grifola Grifola. No es exagerado decir que la proporción de inoculación del micelio de Tremella debe alcanzar 1000:1 (el micelio de Tremella se desarrolla hasta aproximadamente 1 cm de diámetro, con miles de micelio en su interior, y sólo se necesitan unos pocos micelios de ceniza de incienso). De lo contrario, habrá menos hifas del hongo Tremella y las hifas del hongo fragante serán absolutamente dominantes. En el futuro, no habrá aparición de mazorcas o la tasa de aparición de mazorcas será baja. Si se agrega una cepa productora de conidios similares a levaduras al micelio del árbol de alcanfor, el número de conidios similares a levaduras de Tremella fuciformis será muy grande. El número de conidios similares a levaduras de Tremella fuciformis por mililitro de medio de cultivo puede alcanzar 65,438. +0 mil millones-654,38+00 mil millones. Dado que los conidios de levadura están dispersos en partículas de aserrín, no todos los conidios de levadura pueden germinar en hifas, por lo que se agrega una solución de conidios de levadura al medio de cultivo de aserrín para el crecimiento del micelio del árbol de alcanfor. Por lo tanto, el efecto de producir Tremella fuciformis utilizando este método no es ideal. Si no se puede obtener micelio del hongo Tremella, se pueden aplicar conidios de levadura Tremella a la superficie del medio de cultivo de aserrín con micelio gris para que los conidios de levadura Tremella germinen fácilmente.
3. Las condiciones de cultivo de las cepas puras de Tremella (conidios de levadura o micelio de Tremella)
Las condiciones de cultivo son algo diferentes de las especies originales de Tremella y de las especies de plantación (cultivo mixto). Por lo tanto, debemos prestar atención a las condiciones del cultivo mixto para que tanto el micelio de Tremella como el micelio del árbol de alcanfor puedan adaptarse al mismo medio de cultivo y condiciones de cultivo. Por ejemplo, la temperatura debe controlarse dentro del rango de 20-28°C (preferiblemente 23-25°C). El contenido de humedad de las semillas originales se controla al 65% y el contenido de humedad de las semillas plantadas se controla entre el 65% y el 70%. Debido a que el medio de semilla original está ligeramente seco, favorece el crecimiento del micelio de Tremella y es menos probable que produzca conidios similares a las levaduras, lo que es beneficioso para la expansión de las semillas de siembra, pero si las semillas de siembra están ligeramente húmedas, es propicio; a la producción y reproducción de conidios similares a levaduras. Este líquido de esporas penetra en las capas profundas del medio de cultivo de aserrín y se mezcla uniformemente con el micelio de ceniza de incienso, lo que puede compensar el defecto del micelio del hongo Tremella "no come profundamente sino que solo crece en la superficie", lo que resulta en una mayor y tasa de aparición de orejas más estable.
También es necesario determinar si la semilla original se puede expandir para plantar semillas en función del estado de crecimiento de la base de la mazorca de cada botella, y cuántas botellas de semillas de plantación se deben expandir por botella.
Después del cultivo mixto, los conidios de levadura de Tremella fuciformis pueden germinar, el micelio de Tremella fuciformis puede continuar creciendo y el hongo puede continuar creciendo. Todas estas son cepas con valor de aplicación práctica. Después de una estricta selección de las especies originales, cada vez que la base de la oreja es más grande, el micelio de Tremella crece más (la comida es más profunda) y el micelio del árbol de alcanfor es fuerte y poderoso, por lo que el número de botellas expandidas después de agitar es mayor. Por el contrario, no debería ampliarse a los tipos de plantación. Para estar seguro, es aconsejable ampliar cada botella a 40-60 botellas. En resumen, cada botella de medio de cultivo recién inoculado debe contener micelio de hongo blanco y micelio de ceniza de incienso, o conidios similares a levaduras y micelio de ceniza de incienso. O después de agitar las semillas originales, taparlas con tapones de algodón y cultivarlas durante 3 a 5 días para que el micelio de Tremella agitado pueda regenerar un nuevo micelio para garantizar la calidad de las semillas plantadas.
4. Purifica y rejuvenece, evitando que las bacterias pierdan vitalidad debido al uso prolongado, provocando que los auriculares se vuelvan amarillos, difíciles de abrir y con poca capacidad de regeneración. Se seleccionan cepas de Tremella de diferentes edades y madurez fisiológica según el modo de producción. Por ejemplo, al plantar un trozo de madera, se debe elegir una variedad que sea joven, de baja madurez, que tenga un micelio aéreo fuerte (bolas de pelo de hongos blancos) y que no sea fácil de gelatinizar al plantar en botellas, se debe elegir una variedad; con grandes crestas, gran madurez, pequeñas bolas de pelos blancos y cepas de fácil gelatinización química y de fácil apertura. Las cepas plantadas en madera anudada deben seleccionarse para que tengan una fuerte capacidad de trepar por las paredes, largas ramas pinnadas y una fuerte capacidad de descomposición de la madera, mientras que las cepas con micelio de fresno ligeramente "debilitado" deben usarse como materiales alternativos para plantar; de lo contrario, las botellas y Los frascos estarán llenos. Es el micelio de la ceniza. Los nutrientes limitados son consumidos por el micelio de la ceniza, pero el hongo blanco no puede crecer.
Si la cepa original se almacena durante demasiado tiempo, la base de la mazorca es muy grande, el consumo de nutrientes del medio de cultivo es demasiado alto y la viabilidad de la cepa se reduce, se debe desechar. De lo contrario, el efecto no es tan bueno como plantar semillas de la edad adecuada y luego expandir las cepas cultivadas.
5. Conservación de las semillas madre Las semillas madre deben almacenarse en un refrigerador a 4-65438 ± 05 ℃. Trasplante cada 1-3 meses. Si la semilla original no se utiliza inmediatamente, se debe almacenar en un lugar seco y con baja temperatura. Siembre las semillas lo antes posible dentro de los 45 días posteriores al llenado de las botellas.