La diferencia entre inmunohistoquímica e hibridación in situ
La inmunohistoquímica se refiere a la aplicación del principio básico de la inmunología: la reacción antígeno-anticuerpo, es decir, el principio de unión específica del antígeno y el anticuerpo, de modo que el reactivo cromogénico (fluoresceína, fluoresceína , Enzimas, iones metálicos, isótopos) desarrollan colores a través de reacciones químicas para identificar antígenos (polipéptidos, proteínas) en tejidos y células, y realizar investigaciones de localización, cualitativas y cuantitativas relativas sobre ellos, lo que se denomina tecnología de inmunohistoquímica o tecnología de inmunocitoquímica.
La hibridación in situ se refiere al proceso de utilizar ácidos nucleicos en células o secciones de tejido como sondas e hibridar con ácidos nucleicos con secuencias marcadoras específicas conocidas para localizar de forma precisa y cuantitativa secuencias de ácidos nucleicos específicas. La hibridación in situ se puede realizar en muestras de células o muestras de tejido.
2. Diferentes funciones
Inmunohistoquímica: Las principales muestras utilizadas en el experimento son muestras de tejido y muestras de células. Las primeras incluyen secciones de parafina (secciones patológicas y chips de tejido) y secciones congeladas, y las segundas incluyen impresiones de tejidos, portaobjetos y frotis de células.
Los anticuerpos, anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales se utilizan habitualmente en experimentos de inmunohistoquímica. Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos secretados por clones de linfocitos B y se preparan inmunizando animales mediante tecnología de hibridoma de fusión celular. Los anticuerpos policlonales son sueros inmunes obtenidos de sangre animal después de inmunizar directamente a los animales con antígenos purificados. Son una mezcla de anticuerpos producidos por múltiples clones de linfocitos B.
Según los diferentes marcadores, los métodos de tinción comúnmente utilizados se pueden dividir en inmunofluorescencia, marcaje inmunoenzimático e histoquímica de afinidad. Este último es un método de detección basado en la alta afinidad de una sustancia por un determinado componente del tejido. Este método es relativamente sensible y permite localizar trazas de antígenos (anticuerpos) a nivel celular o subcelular. La tinción con biotina-avidina es el método más utilizado.
Hibridación in situ: la localización de transcripciones de ARNm específicas de células se puede utilizar para estudiar el mapeo genético, la expresión génica y la evolución del genoma.
Detección y localización de ADN/ARN viral en infectados; tejidos, como la detección de ARNm del virus de Epstein-Barr, ADN del virus del papiloma humano y citomegalovirus;
Detección de la expresión y cambios de oncogenes, genes supresores de tumores y diversos genes funcionales a nivel de transcripción;
La ubicación de genes en los cromosomas;
Detección de cambios cromosómicos, como número anormal de cromosomas y translocaciones cromosómicas;
Estudio de la citogenética en interfase, como el diagnóstico prenatal de enfermedades genéticas. Enfermedades Diagnóstico, identificación de genes portadores de determinadas enfermedades genéticas, diagnóstico de determinados tumores y determinación de dosis biológicas, etc.
3. Diferentes significados
Inmunohistoquímica: En los últimos años, con el desarrollo de la tecnología de inmunohistoquímica y la aparición de diversos anticuerpos específicos, se han diagnosticado claramente muchos tumores difíciles. En el diagnóstico patológico de rutina de los tumores, solo entre el 5% y el 10% de los casos es difícil realizar un diagnóstico morfológico claro mediante la tinción H.E.
En particular, el valor práctico de la inmunohistoquímica en el diagnóstico de tumores y el diagnóstico diferencial ha sido generalmente reconocido, y su precisión en el diagnóstico diferencial de tumores pobremente diferenciados o indiferenciados puede alcanzar el 50%-75%.
Hibridación in situ: Hibridación in situ: tecnología desarrollada a partir del estudio de los principios de replicación molecular del ADN. El principio básico es que dos fragmentos monocatenarios de nucleótidos pueden combinarse mediante enlaces de hidrógeno en condiciones adecuadas para formar moléculas de doble enlace ADN-ADN, ADN-ARN o ARN-ARN.
Utilizar fragmentos de ADN o ARN marcados (isótopos radiactivos, como 3H, 35S, 32P, fluoresceína, biotina, digoxina y otras sustancias no radiactivas) como sondas de ácido nucleico para detectar en las células Las secciones de tejido o Los fragmentos de ácido nucleico (ARN o ADN) se hibridan y luego se muestran mediante autorradiografía, y la presencia y ubicación del ARNm o ADN objetivo se observan bajo un microscopio óptico o un microscopio electrónico;
La hibridación in situ puede ser Se utiliza para estudiar la expresión génica de polipéptidos sintetizados in situ por células o proteínas. Este método tiene alta sensibilidad y especificidad y puede explorar más a fondo la expresión funcional y los mecanismos reguladores de las células a nivel molecular. Se ha convertido en un medio importante para la investigación en biología celular y biología molecular.
Materiales de referencia:
Enciclopedia Baidu-Hibridación in situ
Materiales de referencia:
Enciclopedia Baidu-Inmunohistoquímica