¿Se puede encontrar algo mediante el genotipado?
Las pruebas genéticas más utilizadas en la actualidad son la detección de enfermedades genéticas en recién nacidos, el diagnóstico de enfermedades genéticas y el diagnóstico auxiliar de algunas enfermedades comunes. Actualmente existen más de 1.000 enfermedades genéticas que pueden diagnosticarse mediante tecnología de pruebas genéticas.
Datos ampliados:
Métodos principales:
1. Método de sonda TaqMan
Diseño de PCR para diferentes sitios SNP en el cromosoma. Cebadores y Sondas TaqMan para amplificación por PCR de fluorescencia en tiempo real. El extremo 5' y el extremo 3' de la sonda están marcados con un fluoróforo indicador y un fluoróforo extintor respectivamente.
Cuando hay un producto de PCR en la solución, la sonda se hibrida con la plantilla para producir un sustrato adecuado para la actividad exonucleasa, escindiendo así la molécula fluorescente unida al extremo 5' de la sonda de la sonda. Abajo, destruye el PRET entre las dos moléculas fluorescentes y emite fluorescencia. Generalmente se utiliza para analizar una pequeña cantidad de sitios SNP.
2. Método Snapshot
Esta tecnología fue desarrollada por Applied Biotechnology (ABI). Es una tecnología de tipificación basada en el principio de extensión de base única marcada fluorescentemente. -secuenciación Dirigido principalmente a proyectos de tipificación de SNP de rendimiento medio. En un sistema de reacción que contiene enzima de secuenciación, cuatro ddNTP marcados con fluorescencia, cebadores de diferentes longitudes adyacentes al extremo 5' del sitio polimórfico y plantillas de productos de PCR.
La imprimación termina cuando se extiende una base. Después de la detección con un secuenciador ABI, el sitio SNP correspondiente al producto de extensión se determina basándose en la posición de cambio del pico. En función del color del pico, se puede conocer el tipo de base a dopar, determinando así el genotipo de. la muestra. La plantilla para el producto de PCR se puede obtener mediante un sistema de reacción de PCR múltiple. Normalmente se utiliza para analizar entre 10 y 30 sitios SNP.
3. Método de gestión de recursos humanos
El análisis de la curva de fusión (HRM) de alta resolución es una herramienta de investigación de SNP emergente en los últimos años. Puede determinar la presencia de SNP mediante el monitoreo en tiempo real de la unión del tinte fluorescente de ADN de doble cadena a los productos de amplificación por PCR durante el proceso de calentamiento. Los diferentes sitios de SNP y heterocigotos afectarán la forma del pico de la curva de fusión, por lo que el análisis HRM puede. ser eficaz para distinguir diferentes sitios SNP entre diferentes genotipos.
Este método de detección no está limitado por el sitio y tipo de bases mutadas y no requiere sondas específicas de secuencia. La fusión de alta resolución se puede ejecutar directamente después de la PCR para completar el análisis de los genotipos de las muestras. Este método no requiere el diseño de una sonda, es simple, rápido, de bajo costo y preciso, y realiza una verdadera operación de sellado de tubos.
4. Método Mass Array
La tecnología de matriz de peso molecular MassARRAY es la herramienta de análisis genético líder en el mundo lanzada por Sequenom. La detección de genotipado se puede lograr combinando reacciones de extensión o escisión del cebador con tecnología MALDI-TOF-MS sensible y confiable. La tecnología IPLEX GOLD basada en la plataforma MassARRAY puede diseñar hasta 40 reacciones de PCR y detección de genotipo, y los resultados de tipificación son muy precisos.
Dependiendo de los requisitos de la aplicación, MassARRAY tiene el mejor rendimiento en cuanto a costos cuando se analizan de cientos a miles de muestras de docenas a cientos de sitios SNP, y es particularmente adecuado para validar los resultados de estudios de genoma completo, o cuando identificar un número limitado de sitios de estudio.
5. Método Illumina BeadXpress
Utilice el sistema BeadXpress de Illumina para detectar sitios SNP en lotes. Puede detectar entre 1 y 384 sitios SNP al mismo tiempo. resultados de chip y es adecuado para la detección de alto rendimiento.
El chip de microperlas tiene las características de alta densidad, alta repetibilidad, alta sensibilidad, baja carga de muestra, personalización flexible y densidad de integración extremadamente alta, logrando así una velocidad de detección y detección extremadamente alta, lo que puede reducir significativamente el costo. de paso alto El costo de la detección.
Enciclopedia Baidu - Pruebas genéticas
Enciclopedia Baidu - Genotipado