Problemas de reparación inmunohistoquímica
La recolección y fijación oportuna de muestras de tejido fijadas es el primer paso fundamental para la tinción inmunohistoquímica, que puede prevenir eficazmente la autolisis y necrosis del tejido y la aparición de la pérdida de antígeno. Los tejidos aislados deben recolectarse y fijarse lo antes posible, preferiblemente dentro de los 20 minutos, porque es posible que algunos antígenos no se detecten si no se fijan a tiempo. La selección del fijador debe basarse en la tolerancia del antígeno, pero es difícil hacerlo en el trabajo patológico de rutina. El mejor momento para la fijación del tejido es entre 6 y 24 horas y, en general, no debe exceder las 24 horas. A medida que aumenta el tiempo de fijación, la intensidad de detección de los antígenos del tejido disminuirá gradualmente. Los tampones de formalina no neutros y los fijadores que contienen ácido y mercurio también pueden provocar fallos o debilitamiento del etiquetado.
La correcta selección de los bloques de cera para inmunohistoquímica es también uno de los factores clave para garantizar la calidad de la tinción. En muchos casos, hay más de un bloque de cera de tejido y los componentes del tejido en diferentes bloques de cera a menudo no son exactamente iguales. Generalmente, se selecciona el bloque de cera que es más representativo de la especificidad del tumor y es mejor contenerlo. un control interno. Además de contener tejido específico del tumor, el bloque de cera seleccionado debe intentar evitar sangrado, necrosis y tejido graso. La mayoría de los antígenos en estos tejidos se han destruido o se han perdido y, por lo general, terminan con tinciones irregulares y difusas, lo que fácilmente puede llevar a errores de juicio o diagnóstico.
La recuperación de antígenos se refiere al uso de enzimas, tensioactivos, microondas, sales metálicas, etc. para exponer y reparar los determinantes antigénicos enmascarados o antígenos desnaturalizados antes de la tinción inmunohistoquímica de las secciones de parafina, de modo que se obtenga la antigenicidad. proceso de recuperación. Los métodos de reparación incluyen digestión enzimática (tripsina, proteasa, etc.), calentamiento (baño de agua, microondas, ebullición a alta presión, etc.) y tratamiento ultrasónico, o una combinación de los métodos anteriores. En la actualidad, el método más utilizado es calentar y hervir, y algunos utilizan digestión enzimática. La comparación de la intensidad de la tinción de varios métodos de reparación es: método de alta presión > método de baño de agua > método de microondas. En el trabajo diario, se deben seleccionar métodos de reparación adecuados en función de las características de los diferentes antígenos. Las soluciones de recuperación de antígenos de uso común incluyen tampón citrato (pH 6,0), tampón EDTA (pH 8,0 ~ 9,0), etc.
El proceso de tinción inmunohistoquímica es complejo y tiene muchos factores que influyen, por lo que se deben establecer controles positivos y controles negativos. Los controles positivos son particularmente importantes. Hay dos tipos de controles positivos, uno es el control interno, que es un control ideal. Los tejidos de control y de prueba están en el mismo corte y en las mismas condiciones experimentales, lo que hace que los resultados sean más confiables y comparables. El otro se llama control externo. A veces no hay ningún antígeno conocido en los cortes analizados. Por ejemplo, se sospecha un melanoma maligno en la muestra gástrica. No hay ningún antígeno relevante en el propio tejido gástrico. Los resultados aún pueden indicar que se trata de melanoma, pero si hay un resultado negativo, no se puede determinar que el tejido en sí no contenga anticuerpos contra el melanoma.