Investigación científica sobre diacetilo descarbonilado
Propósito
Estudiar los efectos del dietino descarbonilado (ANO) y su α-isómero (α-ANO), el tamoxifeno (TAM), el cisplatino (CDDP) y la vitamina totalmente trans del fórmico. ácido (ATRA) sobre condrosarcoma de rata enjambre (SRCS) in vitro e in vivo y su mecanismo. Métodos: Se observó el efecto de SRCS sobre el crecimiento de las glándulas capsulares renales en ratones; se utilizó el método de VonKossa para observar el efecto del tratamiento farmacológico sobre la deposición de sales de calcio en SRCS. Se utilizó tinción con azul tripán para observar el efecto de los fármacos sobre el crecimiento de células SRCS in vitro. Utilizando fosfato de p-nitrofenol como sustrato, se estudió el efecto del fármaco sobre la actividad de la fosfatasa alcalina de las células SRCS. Se utilizó el método colorimétrico de cetona del complejo de o-cresolftaleína para determinar el contenido de calcio de las células SRCS.
Resultados: Varios fármacos tuvieron diversos grados de efectos inhibidores sobre el crecimiento de SRCS bajo la cápsula renal de ratones. La tasa de inhibición del crecimiento de α-ANO a una dosis de 20 mg/kg fue de 79,4; ATRA La CI50 de TAM, α-ANO y ANO en el crecimiento de células SRCS in vitro es 0,45, 1,47, 115,2, 161,7 y 241,5 μm ol/L respectivamente. α-ANO y ATRA pueden provocar la deposición de sal de calcio de SRCS después de 96 horas; del cultivo in vitro, la actividad de la fosfatasa alcalina y el contenido de calcio de las células SRCS aumentaron significativamente. Sin embargo, CDDP y Tan no presentan el fenómeno anterior.
Conclusión: El efecto inhibidor de α-ANO y ATRA sobre el crecimiento de SRCS está relacionado con la diferenciación de SRCS en osificación, lo que sugiere que la inducción de la terapia de diferenciación puede convertirse en un método nuevo y eficaz para el tratamiento clínico. de condrosarcoma.
El condrosarcoma de rata en enjambre (SRCS) es un tumor espontáneo que se desarrolla en ratas Sprague-Dawley hembra de 18 meses de edad y que se aísla y se establece a lo largo de generaciones sucesivas. Según los criterios de clasificación del condrosarcoma de O'Neill, el SRCS es un tumor maligno de grado II y puede utilizarse como un buen modelo experimental para estudiar el condrosarcoma humano.
La anordrina (ANO) es un derivado del androstano con un anillo A descarbonatado que tiene actividad antagonista parcial frente a los estrógenos y ha sido ampliamente utilizado como anticonceptivo antiimplantación. En 1989, nuestro laboratorio descubrió por primera vez que tiene actividad antitumoral, y que la actividad proviene principalmente de su isómero α.
Materiales y métodos
Primero, líneas tumorales. SRCS fue introducido por el Instituto de Farmacología de la Academia China de Ciencias Médicas. Se inocularon ratas Wistar por vía subcutánea y se les realizaron pases 65438 ± 0 veces cada 6 semanas.
2. Fármacos y reactivos principales. El α-ANO producido por la Fábrica Farmacéutica No. 19 de Shanghai fue separado y preparado por nuestro instituto mediante cromatografía de baja presión de alúmina. CDDP producido por Qilu Pharmaceutical Factory; ATRA, colagenasa II, productos Sigma; productos de tripsina, medio DMEM, suero de ternera de la Universidad de Ciencia y Tecnología del Este de China; Los productos de la empresa son fosfato de p-nitrofenol (p-NP); cetona del complejo de o-cresolftaleína, productos de la fábrica de reactivos número 3 de Shanghai.
En tercer lugar, los animales. Ratones Kunming, 23 ~ 25 g, hembra, proporcionados por el Centro Experimental de Animales de Shanghai, Academia de Ciencias de China.
Cuarto, método. 1. Trasplante renal subcapsular y tratamiento farmacológico de ratones SRCS. Un día antes del experimento, a los ratones se les inyectó por vía intraperitoneal ciclofosfamida (150 mg/kg) para inmunosupresión. Se seleccionaron SRCS de 4 semanas de edad y se cortaron en trozos tumorales uniformes de aproximadamente 2 mm3 en DMEM (que contiene 15 % de suero de ternera) en condiciones estériles. Anestesiar al ratón con hidrato de cloral y exponer sus riñones desde la parte posterior. El tumor se trasplantó debajo de la cápsula renal utilizando una aguja de punción número 1. 16. Luego se reajustaron los riñones, se suturaron las incisiones y los pacientes se dividieron aleatoriamente en grupos. La dosis y vía de administración se muestran en la Tabla 1. Los resultados se observaron los días quinto y séptimo.
Extraiga el riñón que contiene el tumor y mida el diámetro más largo (a) y el diámetro más corto (b) del tumor con un microscopio de disección equipado con un micrómetro ocular. Volumen tumoral teórico (mm3) = 0,52ab2, tasa de inhibición del crecimiento tumoral () = (volumen de 1 tumor del grupo de tratamiento/volumen de tumor del grupo de control) × 100,2.
Se utilizó el método VonKossa para observar la deposición de sales de calcio. Los riñones portadores de tumores se fijaron en formalina al 10% y se incluyeron y seccionaron de forma rutinaria. Cubra las secciones con una solución de nitrato de plata 5, irradíelas bajo luz ultravioleta durante 30 a 40 minutos, luego trátelas en una solución acuosa de tiosulfato de sodio 5 durante 3 a 5 minutos, tiña con 1 rojo neutro durante unos segundos y selle con pegamento neutro. . 3. Efectos de varios fármacos sobre el crecimiento de células SRCS in vitro.
Cultivo primario de SRCS: se cortó asépticamente SRCS10g cerca del borde sin necrosis ni congestión. Se extrajeron la cápsula y otro tejido conectivo y se cortaron en trozos pequeños. Digerir en tripsina 5 (p/v) (que contiene un volumen igual de 1 mmol/LEDTA) a 37 °C durante 1 h, luego digerir con colagenasa (160 u/ml) a 37 °C durante 2 h, luego filtrar a través de tamices de malla 100 y 400. , Recoger el filtrado. 1 μmol/l de hidrocortisona, lavada tres veces con 15 mmol/l de HEPES, diluida a 106/ml para cultivo y tinción con azul tripano demostraron que las células por encima del 90 % eran células viables.
Inocular 150 μl de células lsrcs (3×105 células/ml) en cada pocillo de una placa de cultivo de 96 pocillos y añadir varios fármacos a diferentes concentraciones 4 horas después. Después de 4 días de cultivo, se utilizó tinción con azul tripán para contar el número de células viables en cada grupo, se calculó la tasa de inhibición del crecimiento celular y se utilizó el método Logit para calcular el valor de CI50 de cada fármaco. 4. Efectos de varios fármacos sobre la actividad de la fosfatasa alcalina en células SRCS. Se inocularon células SRCS (2 x 105/ml) durante 4 horas y luego se añadieron diversos fármacos en diferentes concentraciones. Después de 96 horas, se recogieron las células y se contó el número de células viables mediante tinción con azul tripán. Suspender la solución de 9NaCl (que contiene 0,2 TritonX-100), homogeneizar a 0 °C, centrifugar a 12000 xg durante 1530 minutos y hacer reaccionar el sobrenadante con 0,01 mol/LT de tampón Tris-HCl (pH 9,0, que contiene 0,5 mmol/). Utilice p-nitrofenol como curva estándar. La unidad de actividad enzimática (U) se define como 37 °C y pH 9,0. Utilizando p-N como sustrato, la cantidad de 1 μmol/L de p-fenol liberado por la enzima en 30 minutos puede explicarse por el agua. Los resultados se expresan como u/106 células.
Éster diacetilenodescarbonílico
5. Efectos de varios fármacos sobre el contenido de calcio en las células SRCS. Recoger células SRCS en diferentes concentraciones, suspender con ácido clorhídrico 0,1 N, centrifugar a 1500 r/5 min a 4 °C durante la noche y tomar el sobrenadante. Las concentraciones de calcio y proteína en el sobrenadante se determinaron mediante el método colorimétrico directo de o-cresolftaleína y el método de Bradford, respectivamente. El contenido de calcio en las células SRCS se expresó como nmol/mg de proteína.
6. Procesamiento estadístico. Los datos experimentales están representados por s. Primero, se analiza la homogeneidad de las varianzas de los dos conjuntos de datos. Cuando las varianzas son homogéneas se utiliza la prueba de Student y cuando las varianzas son desiguales se utiliza la prueba de Mann-Whitney para comparar la significancia de las diferencias de medias.
Resultados
1. Efectos de varios fármacos sobre el crecimiento de SRCS bajo la cápsula renal de ratones. Entre varios medicamentos, CDDP y ATRA tienen los efectos más fuertes, siendo el primero el 1. A la dosis de 5 mg/kg, la tasa de inhibición tumoral fue de 87,5 (P lt; 0,01), y esta última a la dosis de 20 mg/kg fue de 90,3 (P lt; 0,01). α-ANO ocupa el segundo lugar, y la mezcla de ANO y TAM también tiene cierto efecto inhibidor. OXL a una dosis de 200 mg/kg no tuvo ningún efecto significativo sobre el crecimiento de SRCS bajo la cápsula renal de ratones.
En segundo lugar, los efectos de varios fármacos sobre la deposición de sales de calcio en SRCS. La tinción de VonKossa mostró que básicamente no había partículas negras en el SRCS del grupo de control, mientras que aparecieron partículas negras en el SRCS de los grupos de tratamiento ANO, α-ANO y ATRA, especialmente en el grupo de tratamiento ATRA, lo que indica deposición de sal de calcio, pero no en los grupos de tratamiento OXL, TAM y CDDP.
En tercer lugar, los efectos de varios fármacos sobre el crecimiento de SRCS in vitro.
CDDP y ATRA tienen los efectos inhibidores más significativos sobre el crecimiento de células SRCS in vitro. Son consistentes con los resultados in vivo, TAM α-ANO y ANO tienen poco efecto por debajo de 100 μmol/L/L. Según el método Logit, CDDP, ATRA, la IC50 de TAM, α-ANO y ANO en el crecimiento in vitro de SRCS son 0,45, 1,47, 115,2, 161,7 y 241,5 μmol/L.
En cuarto lugar, varios fármacos Efecto sobre la actividad de la fosfatasa alcalina de las células SRCS. α-ANO puede aumentar significativamente la actividad de la fosfatasa alcalina en células SRCS de manera dependiente de la dosis durante 96 horas. ATRA tiene un efecto más significativo que α-ANO, pero CDDP y TAM no tienen este efecto.
Discusión
El condrosarcoma es un tumor maligno derivado directamente del cartílago, y su incidencia es superada sólo por el osteosarcoma entre los tumores óseos malignos. La cirugía es el método principal para el tratamiento clínico del condrosarcoma. Sin embargo, debido a que el condrosarcoma ocurre principalmente en partes importantes como la cadera, el fémur, la escápula y la base del cráneo, el tratamiento quirúrgico suele ser conservador y las tasas de metástasis, recurrencia y mortalidad finales del paciente son altas. Por lo tanto, la quimioterapia como método de tratamiento sistémico. es cada vez más clínico. Pero el condrosarcoma, al igual que otros tumores de huesos y tejidos blandos, es insensible a muchos fármacos de quimioterapia de uso común. Este artículo utilizó CDDP para tratar experimentalmente el SRCS y logró buenos resultados, pero los efectos tóxicos y secundarios fueron obvios, los animales perdieron peso y algunos incluso murieron. ATRA también tiene un efecto inhibidor significativo sobre el crecimiento de SRCS. A una dosis de 20 mg/kg, la tasa de inhibición alcanza 90,3, pero no hay efectos secundarios evidentes. También se descubrió por primera vez que α-ANO y TAM también pueden inhibir el crecimiento de SRCS. Los experimentos in vitro encontraron que después del tratamiento con CDDP, las células SRCS eran en su mayoría células muertas teñidas con azul tripán, mientras que los otros cuatro fármacos eran en su mayoría células viables con membranas celulares intactas y sin tinción con azul tripán, lo que indica que el CDDP es un fármaco citotóxico típico. Los últimos cuatro fármacos deben ser fármacos citostáticos para las células SRCS. Efectos del monómero α (α? anordrina, α? óxido nítrico) sobre el crecimiento de células de cáncer de próstata dependientes de hormonas LNCaP.
Métodos
Métodos utilizando una capa de columna de alúmina Los α y Se analizaron y purificaron epímeros β de anordrina, y se realizó tinción de células SRB para detectar el efecto de ANO sobre el crecimiento de células LNCaP y el efecto de promoción del mimético antiandrógeno R1881 sobre el crecimiento celular para observar el efecto de α ANO? células; ELISA para detectar el efecto del óxido nítrico α? sobre la secreción de antígeno específico de la próstata en medio de cultivo convencional, la tasa de supervivencia celular fue de 85,8, 51,5, 40,8, 29,2, 1,0; α? ANO tuvo un fuerte efecto inhibidor sobre el crecimiento celular. Contra el efecto promotor del crecimiento celular de R1881, la capacidad de secreción de PSA de las células LNCaP disminuyó después del tratamiento con ANO. LNCaP y tiene efectos antiandrogénicos y promotores del crecimiento celular.
Los moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM) son compuestos que pueden interactuar con los receptores de estrógenos y producir efectos específicos según el tejido diana y el entorno hormonal que tengan. efectos bifásicos sobre el estrógeno, es decir, al resistir el estrógeno y tener efectos similares al estrógeno, se ha demostrado que los SERM son eficaces en el tratamiento del cáncer de mama, la osteoporosis y las enfermedades cardiovasculares.
Línea celular y cultivo celular, célula de cáncer de próstata humano LNCaP (proporcionado por el Dr. Degui Chen, Centro Oncológico de la Universidad de California, Los Ángeles) en presencia de 10 suero fetal bovino, 100 UI/mL de penicilina y 100 UI/mL de cadena. Las células crecen de forma adherente y en racimos, con una adhesión débil a la matriz y una proliferación lenta. El tiempo de duplicación es de 72 horas. Las células se adhieren firmemente y requieren ácido etilendiaminotetraacético 0,0,02 25. Digestión con tripsina.
El medio se cambió cada 5 días y el líquido cada 8 días. Las células se cultivaron a una temperatura constante de 37 °C con una fracción de volumen de 0,05 CO2 y humedad saturada en la incubadora.
El fármaco se separa y purifica mediante cromatografía en columna de alúmina utilizando 1 g de una mezcla de α, βANO y una columna de baja presión de alúmina 1:50 (como Merck alumina g), presión de columna de 0,5 kg/cm2, benceno. : Éter de petróleo = 2:1, 20 ml de cada fracción, comprobar cada fracción según las condiciones de capa fina de la fase móvil anteriores y combinar las fracciones de un solo punto. Las fracciones 6 a 11 se combinaron y se evaporaron hasta sequedad, y luego se recristalizaron con n-hexano para obtener 120 mg de β puro con un punto de fusión de 136 a 137°C. Las fracciones 18 a 22 se combinaron y se evaporaron hasta sequedad para obtener. 560 mg de monómero α puro con un punto de fusión de 60°C. El monómero alfa se prepara con etanol absoluto para obtener una solución de almacenamiento de 12,8 mmol/L. Antes de su uso, se debe diluir con medio de cultivo hasta la concentración requerida. La fracción de volumen final de etanol en el medio de cultivo no debe exceder 0,2.
Detección de α por método SRB: Efecto del ANO sobre el crecimiento celular. Las células LNCaP en fase de crecimiento logarítmico cultivadas en medio regular se digirieron completamente y se sembraron en placas de 96 pocillos. El volumen de siembra celular es de aproximadamente 8.000 células/pocillo, 65.438 ± 000 l por pocillo. Después de 24 horas, la adhesión celular alcanzó 80. En el grupo ANO, cada pocillo contiene una concentración final diferente de α? Agregue ANO (8, 12, 16, 24, 32 μmol/L) a 100 μL, agregue una cantidad igual de medio de cultivo al grupo de control y configure 3 pocillos múltiples. Los fármacos se incubaron con células durante 5 días. Al final del tiempo de acción, se detectó el efecto inhibidor del fármaco sobre el crecimiento celular mediante tinción con SRB: añadido a cada pocillo. Después de reposar durante 5 minutos, fijar a 4 °C durante 65438 ± 0 h, luego absorber el fijador, lavar 5 veces con agua desionizada, centrifugar, agregar 65438 ± 000 μL de solución SRB a cada pocillo y dejar reposar a temperatura ambiente durante 65438 ±00mín. Lave el SRB sin proteínas con ácido acético 1x, séquelo al aire y agregue 10 mmol. Calcule la tasa de supervivencia de cada grupo de concentración. Tasa de supervivencia = grupo de administración D/grupo de control D × 100 Se utilizó el método SRB para detectar el efecto antiandrogénico de α: ANO. Se preparó un medio especial sin hormonas a partir de IMDM sin rojo de fenol y suero tratado con carbón activado. Las células se precultivaron en medio libre de hormonas durante 24 horas antes de la intervención farmacológica para eliminar la interferencia de las hormonas en el medio de cultivo convencional en los resultados experimentales. En un medio libre de hormonas, las células crecen lentamente y la cantidad de siembra de células aumenta a 10.000 células/pocillo. Entornos experimentales: grupo de control (agregando una cantidad igual de medio de cultivo), α? A los grupos individuales y combinados de ANO (3, 6, 12, 24 μ mol/L) y 1 nmol/LR1881 se les administró el mismo volumen final. A cada grupo se le proporcionaron tres pocillos múltiples, que se incubaron con células durante 5 días. , mediante tinción con el método SRB, tinción mediante ELISA.
Observación de la morfología celular: Digerir las células LNCaP que crecen en fase de crecimiento logarítmico en medio de cultivo convencional, diluirlas en medio de cultivo convencional, sembrarlas en una placa de 6 pocillos con 50.000 células por pocillo y añadir α ? Ano (3, 6, 12, 24 μmol/L), y se añadió la misma cantidad de medio de cultivo al grupo de control. Después del tratamiento farmacológico durante 48 horas, se observaron los cambios morfológicos de las células LNCaP bajo un microscopio de contraste de fases.
Método ELISA para determinar el efecto de fármacos sobre la secreción celular de PSA: Las células en fase de crecimiento logarítmico se cultivaron en medio IMDM sin hormonas durante 72 horas y luego se trataron con ácido etilendiaminotetraacético al 0,0,02. La solución de digestión con tripsina al 25 % se digirió completamente en una suspensión de células individuales y se sembró en una placa de 96 pocillos. El número de células fue de aproximadamente 65.438.00.000 células/pocillo. Cada pocillo se equipó con tres pocillos de 65.438.000 µl y se incubó en la incubadora durante 24 horas. Después de que las células se adhieran a la pared, se añaden a cada pocillo 100 µl de medio de cultivo de diferentes concentraciones. Después de 24 horas de acción del fármaco, cada pocillo se aspira una vez. El sobrenadante recogido se utilizó para medir el contenido de PSA. Para eliminar la influencia de los cambios en el número de células sobre los cambios de PSA, se usó el número de células en el grupo de control para corregir el número de células en cada grupo de concentración y se calculó la tasa de inhibición. Los pasos de detección se realizaron según las instrucciones del kit ELISA.
Resultados
El efecto de α-ANO sobre el crecimiento de células LNCaP en medio de cultivo convencional, el efecto de α-ANO (8, 12, 16, 24, 32 μ mol /L) 5 Después de días, la tasa de supervivencia de las células LNCaP fue 85,8, 51,5, 40,8, 29,2, 1,0. Las concentraciones bajas mostraron inhibición del crecimiento y las concentraciones altas mostraron citotoxicidad de una manera dependiente de la dosis.
El efecto promotor del crecimiento de α-ANO sobre los andrógenos: las células LNCaP se precultivaron en medio libre de hormonas durante 24 horas y se trataron con diferentes concentraciones de α-ANO y 1 nmol/LR1881 durante 5 días, lo que muestra diferente efecto inhibidor de la proliferación. Una dosis única de 1 nmol/LR1881 puede promover el crecimiento celular, con una tasa de supervivencia celular de 120,8 dando Alfa solo; Las tasas de supervivencia celular de ANO (3, 6, 12 y 24 μ mol/L) fueron 92,9, 80,1, 44,8 y 22,1 respectivamente. La aplicación combinada de R1881 inhibió completamente el crecimiento de las células y la tasa de supervivencia fue 77,9, 67,9, 37,2, 19,5 en comparación con el grupo sin R1881 en la misma concentración, mostró una tendencia a la baja (Figura 2). grupo, la diferencia fue estadísticamente significativa (P <0,05).01).
Cambios en la morfología celular: después de que 12 μmol/l de α-ano actuaran sobre las células LNCaP durante 48 horas, el número de células disminuyó, algunas se deformaron y se volvieron redondas y más pequeñas. 24μmol/Lα? Bajo la acción de ANO, la morfología de las células LNCaP cambió significativamente. Las células se vuelven redondas y más pequeñas, algunas células se fragmentan, el citoplasma se vacuola, la superficie celular se vuelve rugosa y granular, la adhesión entre células disminuye y las células son en su mayoría individuos dispersos.
El efecto de αANO sobre la secreción de PSA en células LNCaP: αANO puede inhibir la secreción de PSA en células LNCaP. En el caso de 1 nmol/LR1881, α? ANO tiene un fuerte efecto inhibidor sobre la secreción de PSA. El propio R1881 puede aumentar la secreción de PSA de las células LNCaP casi 10 veces, α? Después de 24 horas de tratamiento con ANO, la cantidad de células no cambió mucho. La dosis más alta fue de 1,5 μmol/L y el número de células fue el 90% del control, mientras que el PSA secretado por las células fue solo alrededor del 35% del control, que fue mucho mayor que el cambio en el número de células. ¿Existe el grupo R1881 en α? Cuando la concentración de ANO es de 1 μmol/L y 5 μmol/L, su tasa de inhibición es mayor que la del grupo sin R1881 (P
αANO: monómero α de anordrin. n=3. En comparación con el grupo de control Por el contrario, P
Discusión
Pca es un tumor maligno estrechamente relacionado con las hormonas, y su patogénesis está relacionada con el desequilibrio de andrógenos y estrógenos en el cuerpo. papel principal en el desarrollo del cáncer de próstata El papel del estrógeno y del receptor de estrógeno (RE) en el cáncer de próstata no está claro. Algunos estudiosos creen que el estradiol (E2) causa tumores intraepiteliales de próstata de alto grado en animales de edad avanzada. la sensibilidad de la AR a la testosterona.
ANO se sintetizó por primera vez en mi país en la década de 1960 y se usó clínicamente como anticonceptivo en los primeros días, con buenos efectos antifertilidad. efecto estrogénico, pero los estudios farmacológicos han demostrado que ANO también tiene una actividad estrogénica débil, similar a los medicamentos SERM. Actualmente, hay muchos medicamentos SERM utilizados en estudios experimentales para la prevención y el tratamiento de Pca en el extranjero. de este experimento muestran que α? ANO inhibe el crecimiento de células LNCaP de una manera dependiente de la dosis durante 5 días. LNCaP es una célula dependiente de hormonas típica que contiene AR mutante, puede expresar AR y ER y puede producir fosfato ácido de próstata humano. .Enzima y PSA Bajo la estimulación de andrógenos, las células LNCaP crecen más rápido [8]. Los agonistas sintéticos de los receptores de andrógenos [9] son actualmente reactivos experimentales de uso común en países extranjeros para reemplazar los andrógenos.
1 nmol/LR1881 estimuló el crecimiento de células LNCaP, pero también contenía α? En los grupos ANO y R1881, esta parte del efecto promotor del crecimiento se compensó completamente y la tasa de supervivencia fue menor que la del grupo sin R1881 en la misma concentración, lo que indica que α? En presencia de andrógenos, ANO puede mejorar su efecto inhibidor sobre las células y antagonizar la proliferación celular causada por los andrógenos.
El PSA es producido por las células epiteliales de la próstata y sintetizado en las células acinares y epiteliales. Su síntesis y secreción están reguladas por receptores de andrógenos y se correlacionan positivamente con los andrógenos. Actualmente es uno de los indicadores sensibles para el tratamiento de la Pca. Los resultados de ELISA mostraron que los andrógenos pueden aumentar la secreción de PSA de LNCaP casi 10 veces, mientras que α? ANO puede antagonizar significativamente el aumento de PSA causado por los andrógenos. Este resultado confirma una vez más α? ANO tiene efectos antiandrogénicos. Debido a que la Pca temprana depende de hormonas, la proliferación celular en el cuerpo es causada principalmente por niveles elevados de andrógenos, α? Las propiedades antiandrogénicas de ANO tienen cierto valor potencial en el tratamiento temprano del cáncer de próstata. ¿Pero α? ¿Cuál es la relación entre el efecto antiandrogénico de ANO y sus efectos antiestrogénicos y débiles similares a los del estrógeno, y mediante qué mecanismo, α? La relación entre la actividad anticáncer de próstata de ANO y AR y ER necesita más estudios.