Preguntas posteriores al segundo semestre del segundo año de secundaria. Proceso de mejoramiento del tabaco transgénico resistente a insectos

1. Propósito experimental

El tabaco es una planta modelo para la transformación genética y se ha establecido un sistema completo de transformación y regeneración. Este experimento utiliza el tabaco como material experimental para permitir a los estudiantes comprender los principios básicos y los pasos generales del método mediado por Agrobacterium tumefaciens y dominar las técnicas operativas básicas de la transformación genética.

2. Equipo experimental y fármacos

Hojas de tabaco, vector plásmido LBA4404, agitador, placa de petri (con papel de filtro), pipeta, pinzas, bisturí y agua esterilizada.

En tercer lugar, métodos experimentales

El método de transformación mediado por Agrobacterium tumefaciens es relativamente maduro y fácil de realizar en laboratorios de cultivo de células y tejidos vegetales. Los pasos operativos específicos son los siguientes:

(1) Preservación del plásmido de Agrobacterium: inocular el plásmido de Agrobacterium construido en medio sólido YEP. La composición del medio sólido YEP es NaCl, 0,5 g de NaCl, 1 g de levadura, 1 g. caseína hidrolizada, 1,5 g de agar, pH 7,0, refrigerada.

(Preparación del medio de cultivo líquido YEP: Los ingredientes son los mismos que los anteriores, excepto que no se agrega agar y se divide en tubos de ensayo. Agregue aproximadamente 5 ml de medio de cultivo líquido a cada tubo de ensayo, alícuota, autoclave y guárdelo en el refrigerador para su uso posterior.

(3) Agite las bacterias: use palillos de dientes o cerillas esterilizados para extraer parte de la solución bacteriana, colóquelos en el medio de cultivo líquido YEP y luego. Agite las bacterias en una coctelera durante 16-17 horas (180 r/min) hasta que la solución se vuelva turbia, es decir, crezca una gran cantidad de micelio.

(4) Utilice un punzón esterilizado de 0,5 mm. para cortar el disco foliar de las hojas y luego colocarlo. Suspensión de Agrobacterium durante 5 minutos

(5) Utilice papel de filtro para absorber el exceso de líquido bacteriano y coloque las hojas en MS 6-BA. 1,0 mg/L deca IAA 0,1 mg/L de medio de cultivo días, y luego se transfirió a un medio suplementado con 100 mg/L de kanamicina y 500 mg/L de carbenicilina para su detección y cultivo.

(6) Después. dos semanas, se diferenció la resistencia a la kanamicina. Las yemas (deben ser verdes) se cortan de la base y se transfieren a MS 0,1 mg/LIAA que contiene 100 mg/l de kanamicina y 500 mg/l de carbenicilina para el cultivo de enraizamiento. el invernadero para cultivo

IV.Resultados esperados

Callo: Una semana después, crecerán callos sueltos de color amarillo claro en el medio de desdiferenciación.

Cogollos: Kanamicina. -Los brotes resistentes se diferencian dos semanas después de que el callo se transfiere al medio de diferenciación.

Enraizamiento: Los brotes se transfieren al medio de enraizamiento para que echen raíces.

Verbo. ) Requisitos operativos

Inducir el callo del tabaco y regenerar las plantas. Cada grupo recibe de dos a tres plantas de tabaco transgénicas regeneradas y enraizadas.