Eliminar proteínas de alta abundancia del plasma
2017-07-27 15:14
Los fluidos corporales típicos, como el suero, el plasma y el líquido cefalorraquídeo, son usuarios frecuentes en el campo de la proteómica basada en plataformas de espectrometría de masas. Estas muestras contienen una variedad de proteínas, de las cuales las proteínas de alta abundancia (HAP) representan del 97% al 99%, incluidas albúmina, IgG, IgA, fibrinógeno, transferrina, haptoglobina, antitripsina, etc. Sin embargo, las proteínas de baja abundancia suelen ser biomarcadores específicos de enfermedades o moléculas de proteínas diana para fármacos. Por lo tanto, cómo eliminar las proteínas de alta abundancia que interfieren con la detección durante la preparación de la muestra y enriquecer tantas proteínas de baja abundancia como sea posible se ha convertido en uno de los factores clave en la cantidad de identificación por espectrometría de masas.
Se ha desarrollado una variedad de tecnologías para abordar este tema candente. Las tecnologías de uso común actualmente incluyen tecnología de afinidad, ultrafiltración por precipitación y tecnología de cromatografía, entre las cuales la tecnología de afinidad se usa ampliamente y tiene mejores resultados. Logra el propósito de separar o eliminar la proteína diana de la muestra mediante la afinidad específica entre el ligando inmovilizado y la proteína diana. Dependiendo del ligando, se introducen los siguientes cuatro productos comerciales altamente eficaces.
(1)¿ProteoExtracto? Kit de eliminación de proteínas de alta abundancia (Merck, Alemania)
La columna de purificación de flujo automático por gravedad proporcionada por el kit contiene una mezcla de resina de afinidad (ligando de anticuerpo IgG), que puede unirse de manera eficiente y específica a la albúmina sérica y a la IgG, que puede eliminar más del 80% de la albúmina sérica y la IgG de la muestra. El funcionamiento es sencillo, la contaminación cruzada es pequeña y la capacidad de adsorción de cada columna es de hasta 2 mg de albúmina y 0,7 mg de IgG.
(2) Producto de eliminación de proteínas de anticuerpo policlonal basado en IgY (Seppro)
Este tipo de producto utiliza anticuerpos de unión a IgY contra HAP del plasma humano como ligandos y tiene una mayor afinidad con HAP. Fuerte, puede eliminar 14, 20 o incluso 50 tipos de proteínas de alta abundancia, lo que representa el 97% de todo el grupo de proteínas. La eficiencia de eliminación es >:95%. Los productos se encuentran en diversas formas, incluidas columnas de centrifugado. columnas de cromatografía, personalización personalizada, etc. , se puede reutilizar.
(3) Sistema de enriquecimiento de proteínas de baja abundancia Proteomenem (Bole Company)
Este kit utiliza los hexapéptidos de la biblioteca combinatoria como ligandos y puede usarse en muestras de afinidad de alta especificidad de proteínas de baja abundancia, mientras que el exceso de proteínas de alta abundancia que no están unidas al sitio de unión se eliminará. La producción de proteínas de baja abundancia por columna en el kit de pequeña capacidad alcanza los 10 mg. Este método tiene buena reproducibilidad y bajo costo. Este kit no tiene requisitos de especies. Si desea comprender el principio de los zapatos para niños, haga clic en la imagen a continuación para verla ↓↓↓
(4) Sistema de eliminación por afinidad múltiple (Agilent)
El método para eliminar Las proteínas de alta abundancia se realizan mediante el método de columna de cromatografía de afinidad de proteínas de alta abundancia para la eliminación de las proteínas de alta abundancia. El sistema consta de columnas de cromatografía de afinidad de diferentes especificaciones y tampones optimizados.
El sistema dispone de una variedad de columnas cromatográficas para elegir, entre las que se encuentra la H14? y M3, que pueden eliminar respectivamente hasta el 94% de 14 proteínas de alta abundancia en suero humano y 3 proteínas de alta abundancia en suero de ratón. El principio fundamental se muestra en la siguiente figura:
El principio de eliminación por afinidad de proteínas de alta abundancia
Los anteriores son métodos comunes de eliminación de proteínas de alta abundancia. Ha notado que los diferentes métodos para restringir especies y eliminar diferentes tipos de proteínas de alta abundancia tienen diferentes efectos. Generalmente, puede ser necesario seleccionar los métodos requeridos para experimentos en función de diferentes necesidades o especies. ¡Amigos necesitados espero que estos puedan ayudarlos!