Investigación experimental sobre carbacol
2. Estudiar los efectos del fármaco colinérgico carbacol (CAR) en la administración temprana de glucosa oral en ratas con 40% de pérdida de sangre. Efecto de la solución de electrolitos (GES) sobre el vaciamiento gástrico y el flujo sanguíneo gástrico. Métodos 48 ratas SD macho se dividieron aleatoriamente en un grupo de GES (GES oral posoperatorio, n = 16) y un grupo de GES con sangrado (. GES sangrante, n = 16) y el grupo de carbacol GES sangrante (GES/CAR sangrante, n = 16). Después de la anestesia combinada con inyección intramuscular de ketamina-sumosina II, se intubó la arteria carótida derecha a intervalos del 40% de los pacientes. el volumen sanguíneo sistémico fue de 65438 ± 05 minutos, y el modelo de shock hemorrágico se estableció sangrando dos veces. Se disolvió carbacol (60 μg/kg) en GES dos veces a las 0,5 horas y 1 hora después de la pérdida de sangre, y se administró por vía intragástrica durante la primera. tiempo Se midió el flujo sanguíneo del tejido gástrico con un flujómetro láser Doppler a las 2 horas y 4 horas después de la pérdida de sangre, y la tasa de vaciado gástrico se midió con el método de rojo de fenol. Resultados: A las 2 horas y 4 horas después de la pérdida de sangre, se midió el vaciamiento gástrico. La tasa del grupo GES fue menor que la del grupo GES 565, 438 ± 0,4% y 30,2% (P
3. Explorar los efectos de diferentes dosis de carbacol sobre el flujo sanguíneo gástrico y el vaciamiento gástrico. función en ratas escaldadas Métodos: 40 ratas Wistar macho se dividieron aleatoriamente en un grupo de quemadura simulada (n=5), un grupo de quemadura única (n=5) y un grupo de carbacol oral (n=30), este último se divide en 20, 40. , 60, 80, 100 y 120 μg/kg (5 ratas en cada grupo) a las ratas del grupo de quemadura simulada se les administró una solución de rojo de fenol al 0,1,0% mediante sonda nasogástrica. Al grupo de carbacol se le administró 0,1,0 TBSA ⅲ de grado de quemadura inmediatamente. 1,5 ml de solución de rojo de fenol. Al grupo de carbacol oral se le administró la dosis correspondiente de carbacol + 1 ml de solución salina normal 0,5 h después de la lesión. Los efectos de diferentes dosis de carbacol sobre el flujo sanguíneo gástrico y el efecto sobre la tasa de vaciado gástrico. Resultados: La tasa de vaciado gástrico de las ratas después del escaldado fue (29,50 ± 13,42) %, que fue significativamente menor que la del grupo escaldado simulado (92,65438). +). El flujo sanguíneo gástrico aumentó de (476,00 ± 765438 ±) antes de la lesión (0,24) U y cayó a (65438 ± 003,60 ± 565438 ± 0,28) U 2 horas después de la lesión, P < 0,065438 ± 0,28. aumentar la tasa de vaciado gástrico y el flujo sanguíneo gástrico después de quemaduras, pero 60 μg/kg. El efecto más significativo (P
4. Explorar los efectos del fármaco colinérgico carbacol sobre el factor de necrosis tumoral α, la interleucina 6 y el plasma. citoquina antiinflamatoria interleucina en conejos con lesión por isquemia-reperfusión intestinal 10 contenido Método: El experimento se completó en el Hospital No. 34 del Ejército Popular de Liberación en mayo de 2005. Se dividieron aleatoriamente 45 conejos blancos de orejas grandes en tratamiento con carbacol. grupo (20 conejos) y grupo de isquemia-reperfusión intestinal parcial (20 animales) y el grupo de control de operación simulada (5 animales) En el grupo de tratamiento con carbacol, 2 horas después de la oclusión parcial de la arteria mesentérica superior, se inyectó carbacol en el. intestino a una dosis de 30 mg/kg. En el grupo de isquemia-reperfusión intestinal parcial, se utilizó un dispositivo de oclusión del flujo sanguíneo de fabricación propia para bloquear el flujo sanguíneo de la arteria mesentérica superior y la perfusión se restableció 4 horas después. La arteria mesentérica superior no fue bloqueada en el grupo de control operado de forma simulada. Se midieron los contenidos de citocinas proinflamatorias plasmáticas, factor de necrosis tumoral α, interleucina-6 y citocina antiinflamatoria interleucina-10 antes del bloqueo y 2, 4, 8 h, 1, 2 y 3 días después del bloqueo. Resultados: 40 conejos ingresaron al experimento de análisis de resultados, incluidos 65438 ± 08 conejos en el grupo de tratamiento con carbacol, 65438 ± 07 conejos en el grupo de isquemia-reperfusión intestinal y 5 conejos en el grupo de control de operación simulada. Los niveles de TNF-α, IL-6 e IL-10 en plasma aumentaron significativamente.
② Después de la inyección intestinal de carbacol, el contenido de TNF-α en plasma disminuyó significativamente a los 65,438±0 días después de la operación, y la IL-6 disminuyó significativamente a las 4 y 8 horas después del bloqueo. La diferencia fue significativa en comparación con el grupo de isquemia-reperfusión intestinal. ③ No hubo diferencias significativas en la interleucina 10 plasmática entre el grupo de isquemia-reperfusión intestinal y el grupo de tratamiento con carbacol. Conclusión: El carbacol puede inhibir significativamente la producción y liberación de citocinas proinflamatorias, factor de necrosis tumoral α e interleucina-6, pero tiene poco efecto sobre la citocina antiinflamatoria interleucina-10, lo que indica que el carbacol es un fármaco colinérgico. efecto inflamatorio.
5. Estudiar los efectos antiinflamatorios y protectores de órganos del carbacol (agonista del receptor colinérgico) en modelos de sepsis. Métodos Se utilizaron 128 ratas para crear un modelo de sepsis. Los pacientes se dividieron aleatoriamente en el grupo de carbacol y el grupo de sepsis, y se les inyectó carbacol 10 μg·kg-1 o una cantidad igual de solución salina normal, respectivamente. Mortalidad en 24 horas, índice de función hepática, renal y cardíaca, niveles de factores proinflamatorios y contenido de agua tisular. Resultados: Las tasas de mortalidad de 24 horas en el grupo de carbacol fueron del 25% y 50% respectivamente, que fueron significativamente más bajas que las del grupo de sepsis (37,5% y 75%). Conclusión El carbacol puede mejorar la función de los órganos y reducir la mortalidad temprana en ratas sépticas. El mecanismo puede estar relacionado con la inhibición de factores proinflamatorios y la reducción de la inflamación y el edema de los órganos.
6.Objetivo: Observar el efecto del carbacol sobre la liberación de citocinas inflamatorias de macrófagos peritoneales de rata estimulados por lipopolisacárido. 6.2 Estudiar la vía del receptor mediante la cual el carbacol inhibe la liberación de citocinas proinflamatorias de los macrófagos peritoneales de rata estimulados por lipopolisacárido para proporcionar una base experimental para la prevención y el tratamiento de enfermedades inflamatorias excesivas como la sepsis y la disfunción multiorgánica. Métodos: Se utilizó lipopolisacárido (LPS, 100 ng/ml) para estimular el modelo de macrófagos peritoneales de rata, y los resultados se estudiaron mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y métodos de inmunofluorescencia. Este estudio se divide en dos partes: 1. Efectos del carbacol sobre la liberación de citocinas inflamatorias de macrófagos estimulados por lipopolisacáridos y comparación con otros agonistas de los receptores colinérgicos. Tome macrófagos peritoneales de rata Wistar macho, ajuste la concentración a 106 células/ml y agréguelos a una placa de cultivo celular de 24 pocillos. Agregue carbacol (K1,2 mmol/L, K2 0,2 mmol/L, K3 0,02 mmol/L, K4 2 μmol/L, K5 0,2 μmol/L, K60,02 μmol/L) y ácido nicotínico agonista del receptor de N-colina, respectivamente. o ácido muscarínico, agonista del receptor colinérgico M. Luego agregue LPS a cada pocillo e incube durante 4 horas a 37 ° C en una incubadora de cultivo celular de CO2 al 5 %. Se detectaron las concentraciones de citocinas proinflamatorias TNF-α, IL-6 y citocina antiinflamatoria IL-10 en el sobrenadante del cultivo celular. El experimento se dividió en cinco grupos: ① grupo de control en blanco C; ② grupo de control de lipopolisacáridos, L; ③ grupo de carbacol, K; ④ grupo de nicotina, n; ⑤ grupo de muscarina, m. -K6) se utilizó para observar diferencias en sus efectos y para determinar la concentración de agonistas del receptor colinérgico en experimentos posteriores. 2. El carbacol inhibe la vía receptora de las citocinas proinflamatorias liberadas por los macrófagos estimulados por LPS. Coloque los macrófagos en la concentración anterior en una placa de cultivo celular de 24 pocillos y agregue el antagonista del receptor colinérgico tipo M o el antagonista específico de la subunidad α7 del receptor colinérgico tipo N (α7nAChR) α-bungarotoxina (α-Bgt), incube a temperatura ambiente durante 65438±05 minutos. Los pasos experimentales posteriores son los mismos que los de la primera parte. Se detectaron las concentraciones de TNF-α e IL-6 en el sobrenadante del cultivo celular. El experimento se dividió en 6 grupos: ① grupo carbacol, K; ② grupo nicotina, n; ③ grupo atropina + carbacol, AK: ④ grupo atropina + nicotina, AN; . En el experimento de inmunofluorescencia, se tomaron células en la concentración anterior y se convirtieron en una placa trepadora de células en una placa de cultivo de 6 pocillos. Primero, trate con carbacol o nicotina (5 mmol/L) durante 65438 ± 05 min, luego agregue α-BGT marcado con FITc (30 μg/mL) e incube a 4°C durante 65438 ± 05 min. Después de limpiar y sellar la membrana, se observó la intensidad de la fluorescencia bajo un microscopio de fluorescencia y un microscopio de enfoque de barrido láser, y se fotografió la membrana. El experimento se dividió en cuatro grupos: ① grupo de control negativo; ② grupo de control positivo: las células se marcaron solo con FITC-α-Bgt; ③ grupo de control de nicotina: nicotina + FITC-α-BGT; ④ grupo de carbacol: carbacol + FITC -; α-Bgt. Resultados: 1.
Los macrófagos peritoneales de rata normales expresan una pequeña cantidad de citocinas, incluidos TNF-α, IL-6 e IL-10, en medio RPMI1640 in vitro. Después de la estimulación con LPS, los niveles de tres citoquinas fueron significativamente más altos que los del grupo de control en blanco. 2. Después de que los macrófagos fueron tratados con 6 concentraciones de carbacol, los niveles de TNF-α en cada grupo de concentración fueron más bajos que los del grupo L. Entre ellos, hubo diferencias significativas entre los grupos K1, K2, K3 y el grupo L. Se seleccionó K3 como concentración de agonista del receptor colinérgico en experimentos posteriores. 3. En comparación con el grupo L, los niveles de TNF-α e IL-6 en el grupo K se redujeron significativamente, mientras que el nivel de IL-10 no tuvo cambios significativos. 4. Los niveles de TNF-α e IL-6 en los grupos K, N y M fueron significativamente más bajos que los del grupo L en comparación con el grupo M, la disminución en el grupo K y el grupo N fue más obvia; En comparación con el grupo L, no hubo cambios significativos en los niveles de IL-10 en los grupos K y N. 5. En comparación con el grupo K, los niveles de TNF-α e IL-6 en el grupo AK no tuvieron cambios significativos. En comparación con el grupo N, los niveles de TNF-α e IL-6 en el grupo AN no tuvieron cambios significativos. En comparación con el grupo K, los niveles de TNF-α e IL-6 en el grupo BK aumentaron significativamente. En comparación con el grupo N, los niveles de TNF-α e IL-6 en el grupo BN aumentaron significativamente. 6. Resultados experimentales de inmunofluorescencia. Después del marcado con FITC-α-Bgt, se puede observar una fluorescencia obvia en la membrana celular. Sin embargo, después del tratamiento con altas concentraciones de nicotina y carbacol, y luego marcado con FITC-α-Bgt, la intensidad de la fluorescencia en la superficie celular disminuyó significativamente. Conclusión: 1 y carbacol inhiben de forma dosis-dependiente la liberación de TNF-α e IL-6 de los macrófagos peritoneales estimulados por LPS, pero no tienen un efecto significativo sobre los niveles de IL-10. 2. El efecto antiinflamatorio del carbacol es similar al de la nicotina, y ambos son significativamente más fuertes que la muscarina. 3. α-Bgt puede reducir significativamente la unión del carbacol y la nicotina a los receptores de la superficie de los macrófagos, inhibiendo así sus efectos antiinflamatorios; . efecto inflamatorio, mientras que la atropina no tiene ningún efecto evidente, lo que indica que el carbacol ejerce su efecto antiinflamatorio a través de α7nAChR.