Método de detección estándar nacional para la determinación del contenido de proteínas
El método de determinación del contenido de proteínas consiste en detectar el contenido del elemento N. Por ejemplo, en el caso de la melamina, el contenido de "proteína" se incrementa aumentando el contenido de N.
El método estándar nacional para detectar el contenido de proteínas se llama método Kjeldahl. La proteína de los alimentos se descompone en condiciones de calentamiento catalítico, lo que da como resultado la combinación de amoníaco y ácido sulfúrico para producir sulfato de amonio. La destilación alcalina no utiliza azufre, absorbe ácido bórico y se titula con ácido sulfúrico o solución de titulación estándar de ácido clorhídrico. Calcule el contenido de nitrógeno en función del consumo de ácido y luego multiplíquelo por el coeficiente de conversión, que es el contenido de proteína.
Los pasos de operación específicos son los siguientes:
1. Procesamiento de la muestra
Pesar con precisión 0,2-2,0 g de muestra sólida o 2-5 g de muestra semisólida o Absorba de 10 a 20 ml de muestra líquida (aproximadamente 30 a 40 mg de equivalente de nitrógeno). Transfiéralo a una botella seca fijada con nitrógeno de 100 ml o 500 ml, agregue 0,2 g de sulfato de cobre, 6 g de sulfato de potasio y 20 ml de ácido sulfúrico, agite suavemente, coloque un pequeño embudo en la boca de la botella, incline la botella hacia el asbesto. malla en un ángulo de 45 grados, con pequeños agujeros.
Después de calentar a fuego lento, el contenido se carbonizará y la espuma se detendrá por completo. Aumenta la potencia de fuego y mantén el líquido en la botella hirviendo ligeramente hasta que el líquido se vuelva azul verdoso, claro y transparente, y luego. continuar calentando durante 0,5 horas. Sacar y enfriar, agregar con cuidado 20 ml de agua, enfriar, transferir a un matraz aforado de 100 ml, lavar la botella de nitrógeno con una pequeña cantidad de agua, poner la solución limpiadora en el matraz aforado, luego enjuagar con agua hasta la marca. mezclar bien y reservar.
Tomar la misma cantidad de sulfato de cobre, sulfato de potasio y ácido sulfúrico concentrado como reactivos para realizar una prueba en blanco. Sin embargo, este método es peligroso y difícil de demostrar en el laboratorio. La mayoría de los laboratorios tienen un digestor que puede procesar más de 16 muestras a la vez y un ventilador que puede ajustar su propia temperatura. Es más seguro y operable.
2. Instale el dispositivo de fijación de nitrógeno
Instale el dispositivo de fijación de nitrógeno según el diagrama adjunto. Agregue unas gotas de indicador rojo de metilo y unos mililitros de ácido sulfúrico al generador de vapor de agua hasta aproximadamente 2/3 de su capacidad para mantener el agua ácida. Agregue algunas perlas de vidrio para evitar que hierva repentinamente. El agua de la botella generadora de vapor se calienta mediante el regulador de presión.
3. Agregue reactivos al frasco receptor.
Agregue 10 ml de solución de ácido bórico al 2% y una gota de indicador mezclado en el frasco receptor e inserte el extremo inferior del tubo del condensador. bajo la superficie del líquido. Absorba 10,0 ml de solución de digestión de muestra del vaso pequeño en la cámara de reacción, lave el vaso pequeño con 10 ml de agua para que fluya hacia la cámara de reacción y apriete la varilla de vidrio pequeña y el tapón de vidrio.
Vierta 10ml de solución de hidróxido de sodio al 40% en un vaso pequeño, levante el tapón de vidrio y déjelo fluir lentamente hacia la cámara de reacción. No tape herméticamente la tapa de vidrio inmediatamente, ya que esto fácilmente dañará el vidrio. El tapón para que se adhiera a la entrada de la muestra debe enjuagarse primero con agua destilada y luego taparse y llenarse con agua en un vaso pequeño para evitar fugas.
Sujete la abrazadera de tornillo y comience la destilación. El vapor ingresa a la cámara de reacción y el amoníaco ingresa a la botella receptora a través del tubo del condensador. La destilación dura 5 minutos. Mueva la botella receptora para que el extremo inferior del tubo del condensador salga del recipiente de líquido, luego destile durante 1 minuto y luego enjuague el extremo exterior del extremo inferior del tubo del condensador con una pequeña cantidad de agua. Retire la botella receptora y colóquela en una solución estándar de ácido sulfúrico 0,05 N o ácido clorhídrico 0,05 N, con un color gris o azul violeta como destino.
Información ampliada
Además del método Kjeldahl, los métodos de medición estándar incluyen:
Espectrofotometría
En los alimentos La proteína se descompone bajo condiciones catalíticas. condiciones de calentamiento, y el amoníaco producido por la descomposición se combina con ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio, que reacciona con acetilacetona y formaldehído en una solución tampón de acetato-acetato de sodio de pH 4,8 para formar 3,5-diacetil-2,6-dimetil- Compuesto de 1,4-dihidropiridina. Mida el valor de absorbancia a una longitud de onda de 400 nm, compárelo cuantitativamente con la serie estándar y multiplique el resultado por el factor de conversión para obtener el contenido de proteína.
Método de combustión
La muestra se quema a 900 ~ 1200 ℃. Durante el proceso de combustión se produce una mezcla de gases. Los gases perturbadores, como el carbono, el azufre y la sal, son absorbidos por el tubo de absorción y los óxidos de nitrógeno se reducen a nitrógeno. El flujo de nitrógeno resultante es detectado por un detector de conductividad térmica (TCD).
Referencia: Determinación de proteínas en alimentos Enciclopedia Baidu