En el experimento de la capacidad de eliminación de radicales hidroxilo, ¿por qué deberíamos explorar la dosis óptima del fármaco experimental?

El cuerpo produce una variedad de radicales libres durante el proceso metabólico, incluido el radical anión superóxido (O-2), el radical hidroxilo (OH) y su derivado activo H2O2, de los cuales el OH es el más activo. El cuerpo puede utilizar una cierta cantidad de radicales libres de oxígeno, pero demasiados radicales libres de oxígeno actuarán sobre biomoléculas como proteínas, ácidos nucleicos y lípidos en el cuerpo, causando daños a la estructura y función celular, lo que lleva a trastornos metabólicos en el cuerpo y la enfermedad [1 ~ 4]. Por lo tanto, la síntesis y búsqueda de eliminadores de radicales libres se ha convertido en una de las principales direcciones de la investigación médica actual, y la medicina tradicional china es más popular debido a su naturalidad, abundancia y baja toxicidad. Actualmente existen muchos métodos para medir el efecto eliminador de radicales libres sobre los radicales hidroxilo. Entre ellos, el método de oxidación de o-fenantrolina-Fe2+ es simple de operar, requiere pocos equipos y es fácil de promover y aplicar. Este experimento aporta algunas mejoras a este método.

1 Materiales y métodos

1.1 Reactivos Vitamina C, o-fenantrolina, sulfato ferroso de amonio, peróxido de hidrógeno, dihidrógeno fosfato, etanol absoluto e hidróxido de sodio.

1.2 Instrumentos: Espectrofotómetro UV-visible 752N, baño María de tres usos a temperatura constante DK-600S. 1.3 Método Utilizando vitamina C como eliminador de radicales libres, se utilizó el método de oxidación de o-fenantrolina-Fe2+ para detectar el ·OH producido por la reacción de Fenton en el sistema H2O2/Fe2+. El OH generado por el sistema H2O2/Fe2+ oxida la o-fenantrolina-Fe2+ a o-fenantrolina-Fe3+, lo que debilita la absorción máxima de o-fenantrolina-Fe2+ a 536 nm y reduce significativamente el A536. Cuando hay un eliminador de OH en el sistema de reacción, el proceso de oxidación se inhibe, pero el A536 no se reduce significativamente. La capacidad de eliminación del eliminador de OH se puede comparar con el valor de A536 [5]. El experimento se mejoró en tres aspectos: primero, el entorno de reacción se cambió de pH 7,4 a pH 4,5; segundo, el tiempo de mantenimiento a 37 °C se cambió de 60 min a 30 min, tercero, la longitud de onda de absorbancia se cambió de 536 nm a; 510 nm. En el experimento, los experimentos de control se realizaron en tampón fosfato a pH 7,4 y tampón ácido acético-acetato de sodio a pH 4,5. En el intervalo de tiempo de 5 a 60 min, se midió la absorbancia a 536 nm y 510 nm respectivamente, y se comparó la diferencia de absorbancia en las dos condiciones de pH. Durante la reacción, se agregaron en secuencia o-fenantrolina, solución tampón, vitamina C eliminadora de radicales libres, Fe2+ y H2O2 como tubo de dosificación; no se usó vitamina C como tubo de oxidación, no se agregaron vitamina C ni H2O2 como tubo de control; .

1.4 Procesamiento estadístico La prueba t se utiliza entre grupos y los datos se representan por s.

2 resultados

2.1 Comparación de diferentes longitudes de onda de medición y diferentes entornos de pH Como se puede observar en la Tabla 1, la longitud de onda de absorción máxima del complejo o-fenantrolina-Fe2+ es de 510 nm. , el ambiente ácido-base óptimo es un pH de 4,5. Tabla 1 Comparación de diferentes longitudes de onda de medición y diferentes entornos de pH (omitido)

2.2 Comparación de diferentes tiempos de retención y entornos de pH La Figura 1 muestra el impacto de diferentes tiempos de retención en A510 a pH 7,4. La absorbancia del control. El tubo alcanza el pico a los 15 min y luego disminuyó lentamente; sin embargo, la absorbancia del tubo de dosificación y del tubo de oxidación mostró una fuerte tendencia a la baja desde el principio. La Figura 2 muestra el efecto de diferentes tiempos de retención en A510 a pH 4,5. La absorbancia del tubo de control alcanzó un máximo a los 30 min y se mantuvo básicamente estable a partir de entonces. Después de 30 minutos, la absorbancia del tubo de dosificación y del tubo de oxidación disminuyó significativamente.

2.3 Comparación de los valores de cambio de absorbancia (δA) entre tubos Se puede observar en la Tabla 2 que a medida que aumenta el tiempo de retención, el δA entre tubos aumenta gradualmente, pero a pH 4,5, el δA aumenta a los 30 min. El tubo de oxidación del fármaco es el más grande y luego se vuelve más estable. Tabla 2 Comparación de los valores de cambio de absorbancia (δ A) entre tubos de ensayo (omitido)

3 Discusión

Los resultados experimentales muestran que el complejo o-fenantrolina-Fe2+ reacciona en condiciones ácidas Condiciones (pH 4,5) Relativamente estable, con alta absorbancia y la longitud de onda de absorción máxima es de 510 nm. El tiempo de espera también es una parte importante del experimento. Cuando se mantiene durante un cierto período de tiempo, la absorbancia de cada tubo es grande y el valor de cambio de absorbancia (δ A) entre tubos también es grande, lo que es beneficioso para la selección de eliminadores de radicales libres.

Se observó en el experimento que cuando el tubo control mantuvo el pH 4,5 durante 30 minutos, hubo un pico de absorción máximo, y el tubo dosificador también tuvo una absorbancia mayor, haciendo que el δ A entre el tubo dosificador y el tubo de oxidación (δ A tubo dosificador-tubo oxidación) alcanza el máximo. Este valor puede explicar mejor el papel de los eliminadores de radicales libres, es un indicador importante para juzgar los eliminadores de radicales libres y también puede reflejar la sensibilidad del método. Sin embargo, a pH 7,4, el tubo de dosificación y el tubo de oxidación mostraron una fuerte disminución al principio. Aunque la absorbancia de los dos tubos es diferente, el tubo de dosificación δ A-tubo de oxidación es mucho más pequeño que el de pH 4,5, lo que no convence y reduce la sensibilidad de la reacción. En resumen, cuando se utiliza el método de oxidación de o-fenantrolina-Fe2+ para determinar el efecto de los eliminadores de radicales libres, las condiciones óptimas de reacción son pH 4,5, longitud de onda de detección de 510 nm e incubación a 37 °C durante 30 minutos.