Protocolo detallado para la determinación de la deshidrogenasa del suelo

Principios

El cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) es un pigmento redox con un potencial de oxidación estándar de 80 mV. Se vuelve una solución incolora cuando se disuelve en agua, pero al reducirse forma trifenilmetina roja (TPF), que es insoluble en agua. El TPF es relativamente estable y no se autooxidará con el oxígeno del aire, por lo que el TTC se utiliza ampliamente como aceptor de hidrógeno en experimentos enzimáticos. La reducción de TTC por deshidrogenasas en las raíces de las plantas puede inducirse mediante la adición de ácido succínico, ácido fumárico y ácido fumárico. Por lo tanto, la reducción de TTC puede representar la actividad deshidrogenasa y servir como indicador de la actividad de la raíz.

Pasos de determinación

1 Pesar 4 g de suelo fresco en un matraz Erlenmeyer de 50 ml, añadir 4 ml (tampón TTC-glucosa-Tris (pH 7,6, 2 ml de solución tampón TTC-Tris al 1%). , 2 ml de glucosa al 1%), incubar en cuarto oscuro a 37°C durante 24 horas

2 Sacar, extraer con una pequeña cantidad de metanol, filtrar y luego diluir a volumen con un 50. matraz aforado de ml o tubo colorimétrico Se mide inmediatamente el filtrado con espectrofotómetro a una longitud de onda de 485nm

Anexo: Preparación de tampón tris con pH 7,6

A: 0,2m tris. Solución de (hidroximetil)aminometano (1000 ml, que contiene 24,23 g).

B: ácido clorhídrico 0,2 M

100 ml A+76,8 ml B, diluir a 400 ml con agua. ajustar el pH a 7,6 con precisión. p>

Preparación de la curva estándar de TPF: Pesar con precisión 10 mg de TPF y disolverlos en 250 ml de metanol para obtener una solución madre de 40 mg/L. Pipetear 0, 1, 2, 3. , 4 y 5 ml de éste en un matraz aforado de 50 ml, diluir a volumen con metanol para obtener la curva estándar de 0, 40, 80, 120, 160, 200±200 ug TPF

Referencia.

Casida LC Jr, Kleinda. , Santoro T (1964) Soil Science 98, 371-376

H. Li Zhenguo (2003) Lantano en el polo superior. Efectos de la actividad deshidrogenasa del suelo y la liberación de dióxido de carbono Australian Journal of Soil Research 41, 731-739

H.