Introducción a la prueba de función de glóbulos rojos de pollo fagocíticos
Descripción general Los defectos de la función fagocítica se pueden encontrar en defectos de actina, defectos de glicoproteínas de membrana, defectos de G6PD, granulomas crónicos, tumores malignos, etc. La prueba de fagocitosis de macrófagos se utiliza principalmente para juzgar el efecto terapéutico de los tumores.
3 Nombre de la prueba Prueba de fagocitosis de función de los glóbulos rojos de pollo
4 Clasificación prueba inmunológica>; Inmunoensayo celular
5 Extracción de sangre.
6 Principio de la prueba de fagocitosis de glóbulos rojos de pollo: los macrófagos tienen una potente función de fagocitosis de sustancias antigénicas granulares. Por lo tanto, cuando se incuba una cierta cantidad de glóbulos rojos de pollo con una suspensión de macrófagos, se puede observar fagocitosis.
7 reactivos (1) Líquido de ampolla: Utilice 2 trozos de papel de filtro de 1 cm2, sumérjalo en 100 g/L de extracto alcohólico de cantaridina 95, colóquelo sobre la piel del antebrazo del paciente y utilice un trozo de plástico un poco más grande. que el papel de filtro Cubra el papel de filtro con un paño y envuélvalo bien con una gasa esterilizada. Después de 4 a 5 horas, retire el papel de filtro y la tela plástica. Puede ver que la piel debajo del papel de filtro está roja y la superficie está suelta. Luego cúbralo con una cubierta de plástico arqueada y fíjelo con cinta adhesiva para evitar que se formen ampollas en la piel. rompiendo. Después de 48 horas, retire el tapón pequeño y se formará una ampolla. Utilice una jeringa esterilizada para extraer el líquido de la ampolla y cubra el área con un apósito esterilizado. El apósito se puede retirar después de dos días.
(2) Suspensión de 5 glóbulos rojos de pollo: tome sangre de la vena subalar o del corazón del pollo, guárdela en la solución de conservación Alsever en una proporción de 1:5 y guárdela en un refrigerador a 4 °C. durante 1 mes. Antes de su uso, lave la suspensión de eritrocitos de pollo tres veces con solución salina fisiológica, deseche el sobrenadante después de la tercera centrifugación (2000 r/min) durante 5 minutos y prepare la suspensión de eritrocitos de pollo con solución salina fisiológica.
8 Método de operación (1) Tome 1 ml de líquido para ampollas cutáneas y 0,04 ml de suspensión de 5 glóbulos rojos de pollo, mézclelos en un tubo de centrífuga siliconado, transfiéralo a una incubadora a 37 °C durante 30 minutos y agite una vez. cada 10 minutos.
(2) Centrifugar a 1000 r/min durante 10 min, tomar la suspensión de sedimento celular, hacer cortes finos, secar al aire, teñir con Giemsa y observar y contar con microscopio de aceite.
9 El porcentaje de fagocitosis de las personas normales es (62,77 1,38), y el índice de fagocitosis es 1,058 0,049.
La significancia clínica de los 10 resultados de la prueba es (67,46±1,32) y el índice fagocítico es 1,276±0,062. El porcentaje de fagocitosis de los pacientes con cáncer fue de (38,67±1,94) y el índice de 0,618±0,034. Se informa que el porcentaje de deglución de pacientes con tumores malignos como cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer intestinal, cáncer de mama y cáncer de cuello uterino es inferior a 45. La función de fagocitosis puede aumentar en diversos grados después de la resección del tumor, por lo que este experimento se utiliza a menudo como indicador de referencia para juzgar el efecto del tratamiento del tumor.
11 Notas (1) Debido al diferente estado inmunológico del cuerpo, la cantidad de líquido en las ampollas de la piel varía de persona a persona. Las personas sanas y los jóvenes reaccionan fuertemente y presentan una gran cantidad de ampollas en la piel. El curso de la enfermedad es largo, la afección es grave, los ancianos y los enfermos tienen reacciones leves y la cantidad de ampollas en la piel es pequeña, a veces incluso sin ampollas.
(2) La dosificación del extracto etanólico de cantaridina debe ser adecuada y constante. Dosis grandes, reacción fuerte. Los neutrófilos representaron la mayoría en el líquido vesicular a las 48 horas. Con una dosis adecuada se puede obtener una gran cantidad de macrófagos 48 horas después de la formación de ampollas.
(3) Debido al alto contenido de proteínas, el líquido de las ampollas individuales puede coagularse después de ser colocadas, por lo que generalmente se puede agregar anticoagulante al tubo de centrífuga.
(4) La capacidad de los macrófagos para digerir los glóbulos rojos de pollo se puede dividir en tres niveles:
①No digeridos: los glóbulos rojos de pollo tienen núcleos claros y coloración normal;
② Digestión leve: los núcleos de los glóbulos rojos de pollo están borrosos, hinchados y ligeramente teñidos
③ Digestión completa: los núcleos de los glóbulos rojos de pollo están disueltos y la tinción es extremadamente débil; .
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