¿Cuál es la preparación del medio de cultivo?

Según sus propiedades físicas, los medios de cultivo se pueden dividir aproximadamente en dos categorías, a saber, medios de cultivo sólidos y medios de cultivo líquidos. Un medio que agrega una cierta cantidad de coagulante (como agar, gelatina, etc.) es un medio sólido, mientras que un medio que no agrega coagulante es un medio líquido. La aplicación específica debe seleccionarse de acuerdo con los diferentes requisitos de. el propósito de la cultura.

Los componentes básicos de los medios de cultivo sólidos y líquidos son similares y generalmente se pueden dividir en dos partes, a saber, medios de cultivo básicos como MS, B5, N6, Nitsh, etc. e ingredientes adicionales como hormonas y aditivos naturales. Los componentes básicos se muestran en las Tablas 1 y 2.

Tabla 1 Componentes principales de varios medios de cultivo

Tabla 2 Componentes adicionales de varios medios de cultivo

2 Preparación de los medios de cultivo

(1) Preparación y almacenamiento del licor madre Debido a las diferentes plantas cultivadas, es necesario preparar diferentes medios de cultivo. Para reducir la carga de trabajo, el fármaco se puede convertir primero en una solución madre (es decir, una solución concentrada), que generalmente se expande de 10 a 100 veces. La expansión de los elementos principales es ligeramente menor, generalmente de 10 a 20 veces, y la expansión. de oligoelementos, componentes orgánicos y sales de hierro puede ser de 50 a 50 veces. Se debe prestar atención a los siguientes aspectos al preparar y conservar las aguas madre: ① El pesaje de los medicamentos debe ser preciso, especialmente los compuestos de oligoelementos deben tener una precisión de 0,0001 gy los compuestos de macroelementos deben tener una precisión de 0,01 g. ② La concentración del licor madre preparado debe ser adecuada y el múltiplo no debe ser demasiado grande. En primer lugar, es fácil precipitar después de un almacenamiento prolongado. En segundo lugar, si la concentración es alta, la dosis será pequeña, lo que fácilmente afectará la precisión al preparar el medio de cultivo. (3) El tiempo de almacenamiento de las aguas madre no debe ser demasiado largo, normalmente unos pocos meses. La fecha de preparación debe marcarse en el recipiente de licor madre preparado para una inspección periódica. Si está turbio, precipitado o mohoso no se puede utilizar. ④Las aguas madre deben conservarse en el frigorífico entre 2 y 4°C.

(2) Prepare el medio de cultivo Primero, calcule la cantidad de licor madre que se absorberá de acuerdo con la fórmula del medio de cultivo y extraiga en secuencia, luego agregue la solución de sacarosa y agregue agua destilada a la cantidad requerida. Volumen y use 0,1 ~ 1 mol/L de ácido clorhídrico o hidróxido. El sodio ajusta el pH, agrega agar y calienta hasta que se derrita. El medio preparado debe dividirse en alícuotas mientras está caliente y verterse en recipientes de cultivo, como tubos de ensayo y matraces Erlenmeyer, generalmente en el recipiente 650.

(3) Desinfección del medio de cultivo Debido a que el medio de cultivo contiene ricos nutrientes, es muy propicio para la reproducción de bacterias y hongos, provocando contaminación y afectando el éxito del cultivo de tejidos. Por tanto, la desinfección de los medios de cultivo es un paso imprescindible. Generalmente, se utilizan esterilización y esterilización por filtración a alta temperatura y alta presión.

Desinfección por alta temperatura y alta presión: Generalmente se utiliza un esterilizador para la desinfección. Primero, coloque el recipiente de cultivo que contiene el medio de cultivo en la canasta de esterilización y luego colóquelo en el recipiente de esterilización lleno de agua. Tenga cuidado de no llenar demasiado el recipiente para evitar afectar la circulación del vapor en la olla. Después de la instalación, apriete la tapa, caliente y abra la válvula de aire. Después de que el agua hierva, desinfle durante 3 a 5 minutos para descargar el aire frío de la olla, luego cierre la válvula de escape y continúe calentando para mantener la presión y la temperatura en la olla a 108 kPa y aproximadamente 120 °C durante aproximadamente 15 minutos. -20 minutos.

Filtración y desinfección: Algunos componentes del medio de cultivo que se dañan fácilmente con las altas temperaturas, como el ácido indol acético (IAA), el ácido indol butírico (IBA), la zeatina (ZT), etc., no son adecuados. para desinfección a alta temperatura y alta presión. Se puede agregar a medios de alta temperatura y esterilizados en autoclave después de la filtración y esterilización. Las bacterias con diámetros mayores se pueden filtrar con un esterilizador de filtro bacteriano, y la filtración y esterilización deben realizarse en una habitación estéril o en un banco de trabajo ultralimpio.