Poco se sabe sobre los exosomas(1)
Los exosomas están ampliamente implicados en el transporte de material intercelular y la transmisión de información, regulando las actividades fisiológicas celulares. Al mismo tiempo, los exosomas tienen funciones tales como presentación de antígenos, evasión inmune, inducción de la transformación celular normal y promoción de la aparición de tumores y metástasis. Además, los exosomas también pueden servir como "nanopartículas naturales" para la administración de fármacos.
La investigación sobre exosomas suele implicar los siguientes experimentos: 1. Kit o ultracentrifugación diferencial; 2. Microscopía electrónica de transmisión (TEM); 3. Análisis de seguimiento del tamaño de nanopartículas (NTA); 6. Marcado o rastreo de exosomas; 7. Detección de la función de las células exosomas; 8. Verificación del modelo animal de exosomas, etc.
? Entre ellos, una vez aislados los exosomas, es necesario realizar una serie de identificaciones para determinar si los exosomas aislados son exosomas. Los métodos de identificación van desde características físicas hasta marcadores moleculares de superficie.
(1) Método de identificación mediante microscopio electrónico de transmisión: TEM para abreviar, es adecuado para observar la ultraestructura de la membrana de doble capa de los exosomas, que suele tener forma de platillo o semiesférica, con un lado deprimido.
(2) Método de análisis de trazadores de nanopartículas: NTA para abreviar, puede garantizar el estado original de los exosomas, tiene una velocidad de detección rápida y puede proporcionar información sobre el tamaño de las partículas y la concentración de los exosomas después de la detección.
(3) Detección de marcadores moleculares por transferencia Western: las proteínas marcadoras de exosomas incluyen cuatro familias de proteínas transmembrana, como CD9, CD63 y CD 81; proteínas citoplasmáticas, como actina y anexina implicadas en procesos biológicos; , como la proteína X que interactúa con el gen 2 de transducción de apoptosis (ALIX), la proteína 101 del gen de susceptibilidad tumoral (TSG101), las proteínas de choque térmico (HSP70, HSP90) y proteínas específicas secretadas por las células.
(4) Detección de exosomas de alto rendimiento: los exosomas contienen proteínas y ácidos nucleicos relacionados con el origen celular y pueden transportar proteínas, ARNm, miARN, lncRNA, circRNA, etc. Entra en las células receptoras y participa en la comunicación intercelular. Los exosomas de diferentes células contienen diferentes componentes proteicos y ARN y pueden usarse como marcadores de diagnóstico temprano para una variedad de enfermedades y como portadores de medicamentos específicos para el tratamiento de enfermedades.
(5) Marcado o rastreo de exosomas: el etiquetado in vitro o el rastreo in vivo de exosomas aislados ayudará a estudiar más a fondo las funciones de los exosomas. Actualmente, los colorantes lipófilos se utilizan habitualmente para marcar los exosomas. Hay dos tipos principales de tintes lipófilos, uno es PKH67 (verde) y PKH26, y el otro es DiI (fluorescencia naranja), DiO (fluorescencia verde), DiD (fluorescencia roja) y DiR (fluorescencia rojo oscuro).
(6) Investigación de la función de los exosomas: agregue exosomas marcados al medio de cultivo de células receptoras y * * * cultive con las células receptoras para observar los cambios funcionales de las células, como la proliferación y migración celular. , apoptosis, etc. O inyectar exosomas en modelos animales, observar los cambios fenotípicos de los animales y detectar indicadores relacionados con los animales.