¿Quién ha realizado cultivo primario de adipocitos?
Colagenasa DMEM-ADMEM-B de rata macho
Reactivos y kits
tampón KRBH Tampón KRBH-A
Instrumentos y consumibles
Placa de Petri tubo de centrífuga cónico tubo de polipropileno botella de polipropileno de baja densidad punta de filtro de nailon tijeras de disección pinzas Perry caja de plástico cortador de heno tubo de pipeteo
Pasos experimentales
Primero, retire la almohadilla de grasa del epidídimo
1. ¿Cuándo se inyecta 70% de dióxido de carbono? También hay 30 de oxígeno. Se anestesiaron ratas (ratas macho Sprague-Dawley: 145 ~ 170 g, serie CD) en una caja de plástico con una mezcla de gases.
2. Utilice una cortadora de césped para cortar la cabeza y provocar sangrado.
3. Remojar el ratón en etanol al 70% durante un rato.
4. Intente eliminar la bolsa de grasa epididimal en condiciones estériles.
(a) Utilice un bisturí para hacer una incisión en la piel de la parte inferior del abdomen para exponer el peritoneo.
(b) Utilice otro par de tijeras de disección para cortar el peritoneo y luego utilice unas pinzas Perry para tirar del testículo hacia arriba.
(c) Cortar la almohadilla grasa del epidídimo, teniendo cuidado de preservar los vasos sanguíneos.
5. Transferir el tejido al laboratorio de cultivo.
Digerir y lavar la colagenasa de los adipocitos (añadir 20 mg/ml de colagenasa a 2 ml de tampón KRBH y filtrar a través de un filtro de 0,22 micras).
6. Poner 4 g de bolsa de grasa (equivalente a 8 bolsas de grasa del epidídimo) en 4 ml de tampón KRBH (solución de Krebs-Ringer, pH 7,4), añadir 10 mmol/L de NaHCO3, 30 mmol/L. HEPES (Sigma), 200 nmol/L de adenosina (Boche) y 1. Al preparar 1 litro de tampón KRBH, 7 g de NaCl, 0,55 g de KH2PO4, 0,25 g de MgSO4?7H2O, 0,84 g de NaHCO3, 0,11 g de CaCl2, 7,15 g de HEPES, 10 g de BSA, 1 ml de 200 μmol/l de adenosina y agregue agua ultrapura para 1 L, luego envasar en 100 ml. Antes de usar, calentar a 37°C y ajustar el pH a 7,4. ) (37°C) en frascos de polipropileno de baja densidad de 30 ml.
7. Cortar la almohadilla de grasa en trozos de tejido con un diámetro de aproximadamente 2 mm.
8. Coloque el bloque de tejido en la botella y luego agregue 1 ml de solución de colagenasa. Incubar en un agitador con baño de agua a 37 °C durante aproximadamente 65 438 ± 0 horas hasta que la mezcla de células forme un líquido cremoso y viscoso.
9. Después de la digestión con colagenasa, añadir 4 ml de tampón KRBH (37°C) al frasco.
10. Mezclar las células en el matraz agitando, luego filtrar suavemente las células en un tubo de centrífuga cónico de 50 ml con malla de nailon con un tamaño de poro de 250 micras (colocado en un soporte o embudo).
11. Añadir 30 ml de tampón KRBH (37°C) al tubo de centrífuga y lavar las células. Centrifugar brevemente (200 g) en una centrífuga de mesa y aspirar el sobrenadante con una pipeta. Observe los adipocitos flotando sobre el tampón acuoso.
12. Lavar las células añadiendo 40 ml de tampón KRBH, centrifugar y eliminar el sobrenadante. Repita este paso 1 vez.
13. Utilice 40 ml de DMEM-A (DMEM, pH 7,4), agregue 25 mmol/L de glucosa, 2 mmol/L de glutamina, 200 mmol/L de (R)-N6-(L-metilo). -2-feniletil)adenosina (PIA, Sigma) y 6544. Dividir en paquetes de 100 ml, calentar a 37°C (37°C) y limpiar la batería dos veces antes de usar.
14. Utilice aproximadamente el 40% de la citocina DMEM-A para suspender las células flotantes.
Segundo cultivo primario de adipocitos
15 Utilice 200 μl de transferencia. 2 ml de suspensión DMEM-A de 40 citocritos en una placa de Petri de 60 mm con una pipeta de gran calibre.
16. Colocar la placa de Petri en una incubadora humidificada a 37°C y 5 CO2. En condiciones de 1,5 h
17. Añadir 5 ml de DMEM-B (DMEM-A, 7 albúmina de suero bovino) a la placa de cultivo.
En este momento se debe realizar una prueba de absorción de glucosa [Quom 1998] para comprobar la viabilidad celular.
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Revista de la Universidad Médica Sun Yat-sen (Acadjsum), 2001, 22 (6): 443 ~ 446443.
Cultivo primario de preadipocitos humanos
1, 2, Li? Yan 2, Yang 1, Kuang 1.
(¿Universidad Médica Sun Yat-sen? 1. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Memorial Sun Yat-sen, 2. Departamento de Biología, Guangzhou, Guangdong? 510120)
Elija ? quieres:? Objetivo Establecer un método de cultivo primario de preadipocitos humanos y sentar las bases para futuras investigaciones sobre las características biológicas de la hiperplasia del tejido adiposo humano. ? Métodos Se seleccionó tejido adiposo abdominal adulto y se utilizó el método de cultivo de células digestivas primarias para cultivar células prismáticas. Al mismo tiempo, se tomó como control el cultivo de tejido cutáneo. ? Resultados: Las células prismáticas cultivadas tuvieron una composición uniforme, una proliferación vigorosa y una alta tasa de diferenciación. Mediante la observación de cambios dinámicos morfológicos, curvas de crecimiento y métodos de tinción y extracción de grasa Oil Red O, se demostró que eran preadipocitos activos y se reprodujo in vitro todo el proceso de su proliferación. ? Conclusión Hay preadipocitos en el tejido adiposo maduro que pueden diferenciarse y producir grasa. Dado que los adipocitos son una de las células diana clásicas para la acción de la insulina, este experimento sienta las bases para futuras investigaciones sobre la obesidad y las enfermedades relacionadas con la resistencia a la insulina, como el síndrome de ovario poliquístico.
Palabras clave: preadipocitos; cultivo celular; tejido adiposo
Número de clasificación de la Biblioteca de China: Q254, R711.75? Código de identificación del expediente: a? Número de artículo: 1000-257 x(2001)06-0443-04.
cultivo primario del predipocito humano
¿Wang Zhu? ¿Chen 1? ¿Zhong 2, Li Yan 2, Yang Dong? zi1, espada loca? quan1
(1. Departamento de Obstetricia y Ginecología, Universidad Sun Yat-sen. Memorial Hospital, 2. Departamento de Biología,
Academia de Ciencias Médicas de la Universidad SunYat? de Guangzhou, China , 510120)
Resumen :? Objetivo Establecer un método de cultivo primario de preadipocitos humanos para comprender mejor las características de los preadipocitos humanos. ? ¿Métodos que utilizan cultivo celular primario, fibroblastos? Como las células cultivadas. Como resultado, las células eran muy uniformes, con altas tasas de proliferación y diferenciación. Sus cambios morfológicos dinámicos, curvas de crecimiento, intracitopsiclípidos teñidos y extraídos con aceite rehacer, verificaron su identidad preipocítica. En condiciones controladas, los preipocitos reprodujeron el proceso de hiperplasia in vitro. ? Conclusión En el tejido adiposo adulto existen preadipocitos y adipocitos diferenciados. Debido a que las células grasas son un tipo de células objetivo clásicas de la insulina, este estudio sentó las bases para la piel. La propensión a la obesidad y las enfermedades resistentes a la insulina, como el síndrome de ovario quístico.
Palabras clave: preadipocitos; cultivo celular; tejido adiposo
Los adipocitos son una de las células diana clásicas de la insulina y
Enfermedades relacionadas con la obesidad y la resistencia a la insulina. como el síndrome de ovario poliquístico
Las investigaciones están estrechamente relacionadas y han recibido mayor atención en el campo de la endocrinología ginecológica en los últimos años.
Mira. Los preadipocitos son un tipo de células que proliferan y se diferencian en adipocitos.
Células precursoras especializadas de capacidad quimiotáctica, cuya existencia y función continúan.
En la vida humana, hemos cultivado preadipocitos a partir de tejido adiposo humano.
Las células sientan las bases para futuras investigaciones.
Fecha de recepción: 2001-04-23
Proyecto del fondo: Fondo de Investigación Científica del Departamento de Salud Provincial de Guangdong (2001189)
, 1? y métodos 1.1? De septiembre de 2000 a septiembre de 2006 5438 0, 1, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65438, 65 ,65438 Se recogieron tejido adiposo subcutáneo y tejido cutáneo durante laparotomía.
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1.2? Materiales de prueba
1.2.1? ¿Suministros de prueba principales y reactivos químicos? ¿DMEM/F? 12 Se adquirieron de GIBCO medio (1! 1), suero bovino fetal libre de micoplasma, colagenasa tipo A, Hepes, transferrina humana, penicilina y estreptomicina. Biotina, ácido pantoténico, hidrocortisona, triyodotironina (T3), 3? ¿Isobutilo? 1?Metilxantina es un producto de SIGMA Company. La albúmina sérica bovina se adquirió de Roche. Los reactivos inorgánicos necesarios para el experimento se compraron en el Departamento Mayorista de Pruebas Químicas de la Compañía Farmacéutica de Guangzhou, y todos eran reactivos analíticamente puros. Los frascos de cultivo se adquirieron en KORNING Company.
1.2.2? ¿Preparación del medio de cultivo y reactivos principales? Medio A [1] Journal of Sun Yat-sen Medical University (Acadjsum), 2001, 22 (6) El medio A se convierte en una suspensión celular y se inocula en un matraz de cultivo de 25 cm2 con una densidad de 3?65 y una fracción de volumen de 43800 células a 5 Incubar en una incubadora de CO2 37# durante 65, 438, 06 h. Posteriormente, se lavó suavemente PBS para eliminar las sustancias no adherentes en el matraz de cultivo y se usó medio C para inducir y mantener la diferenciación de adipocitos. Cambie a medio B después de 3 días y luego cambie a medio B cada 2 o 3 días. 1.3.2? ¿Tinción histológica de preadipocitos y fibroblastos de piel humanos? ¿Cortar el cubreobjetos en 0?5 cm? 1,0 cm de tamaño, colóquelo en un matraz de cultivo durante la inoculación. Después de que las células se adhieran, retire el matraz de cultivo cada 2 o 3 días para teñirlo. Sumerja el lado con las células grasas hacia arriba en la fracción de volumen.
Fijar en una solución salina isotónica de formaldehído número 10 durante 10 minutos, luego ponerlo en una solución tampón PBS, enjuagar suavemente durante un rato, dejar en posición vertical para que el agua restante fluya hacia el borde y secar con absorbente. papel. Después de un ligero secado, ¿los preadipocitos humanos se obtienen a partir de rojo Sudán? tinción de gota nuclear de células amp y doble tinción con hematoxilina de Meyer, sellados con glicerina y gelatina, fibroblastos de piel teñidos con hematoxilina y eosina, deshidratados y transparentes, sellados con resina neutra, observados al microscopio óptico y fotografiados para preservar los resultados.
¿1.3.3? ¿Dibujo de la curva de crecimiento celular? La suspensión celular se inoculó en 24 frascos de cultivo y se dividió aleatoriamente en 8 grupos, con 3 frascos en cada grupo. El número total de células en cada botella de un grupo se detectó cada 2 días y se tomó el promedio de las tres botellas para finalizar el octavo grupo. El método de recuento de células se refiere a experimentos médicos de biología celular [3].
1.3.4? ¿Método de tinción y extracción con Oil Red O para determinar el contenido de grasa intracelular? El método de inoculación es el mismo que en 1.3.3.
Según Ramírez[2]4: ¿Tomar DMEM/F? 5 g de polvo de cultivo 12, agregue suero bovino fetal para obtener la fracción de volumen 10, volumen de agua triplemente destilada 500 ml Medio b: ¿Tomar DMEM/F según las instrucciones? 12 Polvo de cultivo 10 g, concentración final 15 mmol/lnahco3 y 15 mmol/lhep? es, 33? Mol/L de ácido pantoténico, 17? Mol/L de transferrina humana, 100000 U/L de penicilina, 0?1 g/L de estreptomicina, 100 nmol/L de hidrocortisona, 60 nmol/L de insulina, 0?2 nmol/LT3, agua triplemente destilada a 1000 ml de medio de cultivo c: Tome 200 ml de medio a y; sumar 3? ¿Isobutilo? 1. Metilxantina, de modo que la concentración final sea de 0,25 mmol/L; jugo digestivo: pesar colagenasa (tipo ?150 mg, albúmina sérica bovina 2 g, solución salina tamponada con fosfato (PBS) 0,0,1 mol/L hasta 100 ml; lisis de glóbulos rojos tampón: pesar cantidades apropiadas de NH4Cl, K2HPO4 y EDTA para obtener la concentración final 154 mmol/L, 5?7 mmol/L y 0?1 mmol/L, agua triple destilada
Diluir el volumen fijado a 250 ml. Las soluciones anteriores se ajustaron a un pH de 7,4 a 7,6, se filtraron y esterilizaron mediante una membrana microporosa de 0,22 µm y se almacenaron en una solución de trabajo de color rojo aceitoso -30#, etc. El cultivo se fijó con un tampón salino isotónico con una fracción de volumen de formaldehído al 10% durante 1 hora y luego se enjuaga con agua destilada. Tome 10 ml de solución de trabajo de Oil Red O, coloque el lado del cultivo hacia abajo y luego vierta el Oil Red O en la botella. 2 horas
Enjuague el frasco de cultivo varias veces con solución de trabajo y agua destilada hasta que flote por completo. Coloque el frasco de cultivo teñido en una incubadora de 32# para evaporar el agua del frasco, luego agregue 1 ml de. alcohol isopropílico e inmediatamente Aspirar la solución de colorante extraída con una pipeta y medir la absorbancia a una longitud de onda de 510 nm con un espectrofotómetro HITACHIG2000: Peso 4? Disolver 2 g de Oil Red O en 1200 ml de alcohol isopropílico y dejar reposar a temperatura ambiente. temperatura durante la noche. Recoger el filtrado después de la filtración y agregar 900 ml de agua triplemente destilada. Déjelo reposar durante la noche y guárdelo a temperatura ambiente. 1.2.3 ¿Equipo de incubación de CO2, microscopio invertido, etc.? Cultivo primario de preadipocitos humanos y fibroblastos de piel [1] Durante la operación, se utilizaron aproximadamente 60 g de tejido adiposo y aproximadamente 0,5 cm x 3 cm para lavar con PBS. Separar y eliminar los componentes fibrosos visibles y los vasos sanguíneos en el tejido adiposo. y grasa subcutánea del tejido de la piel, cortarla en trozos pequeños de aproximadamente 2 mm?, agregar jugo digestivo y colocar en una incubadora de CO2 37# con una fracción de volumen de 5 durante 15 horas. Luego, centrifugar por un corto tiempo a 200. ?Observación morfológica de preadipocitos humanos cultivados primarios y fibroblastos de piel: después de la adhesión, las células eran inicialmente pequeñas y redondas con una gran proporción núcleo-citoplasma (Figura 1-1). Después de 4 días, se observó que las células se volvieron fusiformes. Después de 7 días, las células gradualmente adquirieron forma de huso. Una gran cantidad de células prismáticas proliferaron en los lados izquierdo y derecho, y las partículas de grasa comenzaron a acumularse después de que el área en el fondo de la botella de cultivo alcanzó la mitad (. Figura 1? 2). Al noveno día, se observó que las células cambiaron gradualmente de prismáticas a ovaladas o redondas (Figura 1? 3), acumulando partículas de grasa.
Fase 6? al.Cultivo primario de preadipocitos humanos 445 (Figura 1? 4). Los adipocitos cultivados in vitro son de gran tamaño y tienen membranas celulares delgadas, no son lisas, desiguales y tienen una gran cantidad de lípidos redondos. gotitas de diferentes tamaños y dispersas en el citoplasma. También hay casos en los que una gran cantidad de pequeñas gotas de lípidos se combinan para formar grandes gotas de lípidos y el núcleo todavía está en el borde. Al mismo tiempo, los fibroblastos de piel cultivados proliferaron a un ritmo similar, pero siempre mostraron una forma de prisma largo sin acumulación de gotas de lípidos (Figura 2?1, Figura 2?2).
2.2 Curvas de crecimiento de los preadipocitos humanos y fibroblastos de la piel
A partir de las curvas de crecimiento, podemos ver los preadipocitos humanos (Figura 3?1) y los fibroblastos de la piel (Figura 3 ? Los tiempos de duplicación de 2) son 60h y 55h respectivamente.
. 3? Por favor. ¿En 3.1? La importancia de la investigación del cultivo de preadipocitos humanos en endocrinología ginecológica: los adipocitos son un componente importante del tejido adiposo y el órgano principal de su función. La investigación contemporánea cree que los adipocitos en el tejido adiposo son muy activos y que el número, la forma y el contenido de grasa intracelular de las células cambian dinámicamente y se mantienen durante toda la vida. Se cree que la obesidad es el resultado de una proliferación y diferenciación descontrolada de los adipocitos. En la actualidad, la obesidad
La obesidad se ha convertido en una enfermedad muy relacionada con la endocrinología ginecológica. La obesidad puede producir resistencia a la insulina/hiperinsulinemia, que es la misma señal de peligro para muchas enfermedades o síntomas clínicos, especialmente enfermedades endocrinas y metabólicas comunes como la diabetes, la hipertensión y la aterosclerosis, por lo que se ha convertido en lo mismo en muchas disciplinas médicas en los últimos años. puntos de interés. Especialmente en los últimos años, las investigaciones han encontrado que
Figura 3.1? Curva de crecimiento de preadipocitos humanos
¿Figura 3.1? Curva de crecimiento de preadipocitos humanos
La resistencia a la insulina/hiperinsulinemia cultivada también se asocia con hiperandrogenismo y anovulación en mujeres en edad fértil. Síndrome de ovario poliquístico,
Aproximadamente entre 5 y 10 mujeres en edad fértil padecen esta enfermedad, muchas veces acompañada de obesidad, y se desconoce la causa. Actualmente se cree que el síndrome de ovario poliquístico es una enfermedad endocrina y metabólica caracterizada por resistencia a la insulina, y la hiperinsulinemia secundaria a la resistencia a la insulina juega un papel importante en provocar signos de hiperandrogenismo e infertilidad [4]. Las células grasas actúan como inhibidores de la insulina.
¿Figura 3.2? Curva de crecimiento de los fibroblastos de la piel humana
¿Figura 3.2? La curva de crecimiento de la fibrosis de la piel humana es una de las células diana sensibles, por lo que estudiar su posible mecanismo de resistencia a la insulina tiene una importancia clínica especial. Cultivo in vitro de preadipocitos
Comprender de forma integral todo el proceso de generación y proliferación del tejido adiposo, observar directamente la regulación de diversos factores en este proceso y estudiar sus mecanismos, lo que supone un modelo ideal para estudiar el tejido adiposo. Aunque se han establecido en el extranjero líneas celulares derivadas de preadipocitos de ratón, como 3T3? ¿L1, 3T3? F442A, serie ob17, etc. , pero hasta el momento no se ha establecido ninguna línea celular de preadipocitos humanos [5], lo que limita la investigación futura.
3.2? Características biológicas de los preadipocitos humanos cultivados in vitro
En la actualidad, existen dos sistemas de cultivo in vitro de preadipocitos en el país y en el extranjero. Uno se deriva de células del componente estromal vascular (. Estromalvas? Fracción molecular (SVF), que es un preadipocito típico. Van et al. [6] estudiaron sistemáticamente el SVF para formar una teoría de preadipocitos completa, en la que se extrajo el tejido adiposo. El componente vascular estromal precipitado fue SVF y, en comparación con los fibroblastos cultivados, ambos cultivos proliferaron al mismo ritmo, con un tiempo de duplicación de aproximadamente 55 h. La comparación de las células bajo el microscopio reveló que inicialmente 2,3? de fibroblastos de la piel El contenido de grasa en los preadipocitos aumentó rápidamente después de 9 días de cultivo, alcanzando un máximo aproximadamente a los 16 días, mientras que solo se acumuló una pequeña cantidad de grasa en los fibroblastos de la piel (Figura 4). Figura 4: Cambios en el contenido de grasa intracelular de preadipocitos y fibroblastos de piel en cultivo
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Se puede acumular una gran cantidad de gotitas de lípidos en el citoplasma de los fibroblastos, pero no las hay. solo una pequeña cantidad de gotitas de lípidos, lo que demuestra que los SVF son preadipocitos con potencial para proliferar y diferenciarse en adipocitos. Los resultados son consistentes con ellos y con los tres estándares propuestos en la literatura [6]. , también se ha informado que el método de combinar bloques de tejido adiposo con cultivo en techo también ha tenido éxito [7].
Los preadipocitos obtenidos mediante este método son diferentes de los SVF y pueden derivar de las islas celulares descubiertas por Carraro et al. Modelos de investigación in vitro de algunas citocinas.
El cultivo de preadipocitos aclara la relación entre proliferación y diferenciación, ¿actualmente se cree que es una detención del crecimiento? ¿Crecer de nuevo? Relación continua entre la diferenciación celular. Una pausa en el crecimiento es un primer paso necesario, tras el cual estas células sufren al menos una división más antes de continuar transformándose en adipocitos maduros. ¿Aparece la glicerina con el tiempo? El ARNm de la 3-fosfato deshidrogenasa (GPDH) es un marcador tardío y una enzima limitante de la velocidad necesaria para la síntesis de grasas, que finalmente se convierten en adipocitos. Nuestro estudio también observó que las células comenzaron a crecer después de un período de incubación, proliferaron en aproximadamente 3 o 5 días y comenzaron a acumular partículas de grasa después de 1 semana. Después de 2 semanas de cultivo, los adipocitos se diferenciaron en gotitas de lípidos o gotitas de lípidos, de acuerdo con los informes de la literatura.
El método de tinción y extracción Oil Red O puede cuantificar de forma sencilla y rápida la tasa de conversión de preadipocitos cultivados in vitro. La precisión y sensibilidad reportadas en la literatura son similares a las de GPDH, que es una enzima marcadora en la determinación de la diferenciación de preadipocitos [2]. Por lo tanto, se utiliza a menudo para identificar preadipocitos cultivados in vitro. Bajo la acción de la insulina y la hidrocortisona, la GPDH en preadipocitos cultivados in vitro comienza a aumentar y aumenta rápidamente, alcanzando un pico alrededor de los 8 días y manteniéndose en un nivel alto [2]. Utilizamos el método de extracción y tinción Oil Red O para la investigación. Los resultados mostraron que los preadipocitos comenzaron a acumular grasa el tercer día de cultivo, y la cantidad de acumulación aumentó significativamente después de 1 semana, alcanzando un pico a las 2 semanas, lo que era consistente con la aparición de partículas de grasa en las células después de 1 semana de cultivo morfológico. cultura. También muestra que la enzima aparece primero y la grasa aparece después. El aumento significativo en el contenido de grasa intracelular ocurre aproximadamente 1 semana después que la GPDH, lo que concuerda con los informes de la literatura [2].
3.3?Características de la tecnología de cultivo de preadipocitos humanos
El tejido adiposo deriva del tejido conectivo reticular primitivo y está compuesto por tejido conectivo y adipocitos. Los adipocitos son el principal componente celular, además de las células reticulares, las células mesenquimales, las células tisulares, las células endoteliales, etc. Tanto los adipocitos como los fibroblastos provienen del mesodermo, por lo que los adipocitos y los fibroblastos cultivados son similares [9], pero las condiciones de cultivo externo son diferentes [10] 2006 54 38, 22 (6). La diferencia es que requieren de la acción de factores adipogénicos. Actualmente, estas sustancias se conocen como insulina, glucocorticoides y glucocorticoides. ¿Isobutilo? 1? Metilxantina, fibronectina, etc. Generalmente se utilizan DMEM y F12 como medio de cultivo, con una proporción de 1:1 y un número moderado de células. Las células no se adhieren muy firmemente durante la inoculación inicial y las células deben moverse con cuidado para evitar que floten. Cuanto más joven sea el material elegido, más fácil será su cultivo. Los seres humanos generalmente optan por la cirugía para cortar el tejido adiposo abdominal. Si se utiliza una jeringa para aspirarlo, es fácil dañar las células y reducir la tasa de supervivencia. (Consulte la ilustración 2 para las Figuras 1 y 2 de este artículo) Referencias: [1] Haunerh, Petruschketh, Russm, et al. Factor de necrosis tumoral α (TNF?) en el transporte de glucosa y el metabolismo de los lípidos de la nueva? diferenciadohumanfatcellincellculere [J]. Diabetes, 1995, 38 (7): 764. [2] ¿Ramírez? ¿Zacarías JL de Castro? ¿Muñozledov, Curry? Har? cuchW. ¿Cuantificación de la conversión adiposa y triglucos? [1] Li, Li, et al. Histoquímica, 1992, 97 (6): 493. [3] ¿Zhao? Pandilla, Liu Jianzhong. Experimentos y ejercicios de biología celular médica [M]. Beijing: Science Press, 1999.35. [4]Du Naifa. ¿Insulinación en la polisicovalisina? dromo[J]. Hormonas endocrinas y hormonas endocrinas. MetabClinNorAm, 1999, 28(2): 341. [5] Facturaciones importantes.
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