Pasos básicos para la clonación posicional

Después de obtener numerosos ADNc candidatos, los genes de longitud completa se clonan mediante el cribado de bibliotecas de ADNc o RACE y otros métodos. Para identificar los genes causantes es necesario detectar uno a uno sus cambios en las familias afectadas y analizar sus funciones. El análisis funcional suele ser un punto difícil en la clonación posicional, porque diferentes enfermedades tienen características diferentes y requieren diferentes sistemas de detección funcional para el análisis. Los métodos comúnmente utilizados incluyen el estudio de cambios en la morfología y función celular después de la expresión de genes sentidos o antisentido a nivel celular, la detección de cambios en la morfología celular y la inhibición por contacto en la investigación de tumores, cambios en la capacidad de crecimiento del agar blando y análisis de tumorigenicidad en ratones desnudos. Un análisis funcional adicional incluye experimentos de eliminación de genes a nivel individual.

También se han desarrollado algunas ideas nuevas que se combinan con otros métodos, como la combinación con hibridación sustractiva para cribar genes expresados ​​diferencialmente ubicados en regiones candidatas, lo que mejora enormemente la posibilidad de obtener genes valiosos. Al mismo tiempo, con el desarrollo del mapa de transcripción [15] del Proyecto Genoma Humano, muchas tecnologías ecológicamente racionales se han localizado con precisión en diferentes regiones del cromosoma, lo que ha permitido realizar investigaciones funcionales directas. Con la profundización de la investigación, se han completado cada vez más trabajos de mapeo EST y el mapa de transcripción genética se ha mejorado continuamente. Podemos omitir por completo el segundo paso de la clonación posicional e ir directamente a la identificación funcional y la clonación completa del gen. Este será probablemente el método más rápido de clonación posicional. Hoy en día, con la mejora continua de los métodos de análisis y separación y la implementación intensiva del Proyecto Genoma Humano, están surgiendo una tras otra varias ideas y métodos nuevos, y el tiempo del ciclo de los métodos de clonación posicional también seguirá reduciéndose, brindando la posibilidad de humanos para eventualmente clonar diversos genes de enfermedades.