Cómo extraer y aislar la antraquinona del ruibarbo utilizando el método de extracción por gradiente de pH
Hay varios derivados de antraquinona con efectos purgantes en el ruibarbo, entre los cuales los glucósidos son los componentes principales, porque sus efectos purgantes suelen ser más fuertes que los de las agliconas correspondientes. Las principales agliconas incluyen el crisofanol y el ruibarbo. aloeemodina y emodina metil éter. El efecto laxante del ruibarbo es directamente proporcional a la cantidad de proteína unida. La aglicona de antraquinona libre casi no tiene efecto purgante. Hay varios glucósidos de antraquinona con fuertes efectos diarreicos: crisofanol-1-glucósido, emodina-6-glucósido, aloe-emodin-8-glucósido, reína-8-glucósido y emodina metil éter, y disacáridos que contienen derivados de antraquinona, como. como diglucósido de emodina, diglucósido de emodina de aloe, diglucósido de crisofanol y senósido. En los últimos años, el japonés Takeo Nishioka ha aislado cuatro nuevos componentes de la diarrea del ruibarbo, llamados rhein A, B, C y d. Además, también contiene rhein ácido tánico y sustancias relacionadas. Por ejemplo, el ácido gálico (parte de él es libre y parte está combinado en galósido), las catequinas, los taninos y sustancias relacionadas tienen efectos antidiarreicos, que es exactamente lo opuesto al efecto antidiarreico de los derivados de antraquinona.
1. Crisofanol
Cristales en escamas doradas. Mp196 ℃ (etanol o benceno) puede sublimar, soluble en acetona, ácido acético, cloroformo, metanol, etanol y benceno caliente, ligeramente soluble en éter de petróleo y éter dietílico, insoluble en agua, soluble en solución de NaOH.
2. Emodin
Los cristales en forma de aguja de color amarillo anaranjado pueden sublimar a MP 256 ~ 257 ℃ (etanol o ácido acético glacial). Su solubilidad es de 0,14 en éter, 0,041 en. benceno y 0,0718 en cloroformo. Casi insoluble en agua, soluble en etanol, soluble en amoníaco diluido y solución acuosa de Na2CO3. Emodin tiene efectos inhibidores sobre el melanoma y el adenoma mamario en ratones.
3. Aloína
Cristal amarillo en forma de aguja, MP 223 ~ 224 ℃ (tolueno) puede sublimar, soluble en éter, benceno, etanol caliente, amoníaco diluido, Na2CO3, NaOH acuoso. solución .
4. Rin
Cristal amarillo en forma de aguja, MP 321 ~ 322 ℃ (sublimación). Insoluble en agua, soluble en solución acuosa de piridina y bicarbonato de sodio, ligeramente soluble en etanol, benceno, cloroformo, éter y éter de petróleo. Rhein puede inhibir el cáncer de ascitis de Ehrlich.
5. Emodin metil éter (Physcion)
El cristal rojo en forma de aguja mp206 ℃ (benceno) puede sublimar. La solubilidad es similar a la del crisofanol.
6. Glucósidos de hidroxiantraquinona
①Monoglucósido de éter metílico de emodina (monoglucósido de éter metílico de emodina)
Cristales amarillos en forma de aguja mp235 ℃
②Aloe monoglucósido de emodina.
mp239℃
③Monoglucósido de emodina.
MP 190 ~ 191 ℃ cristal de aguja de color amarillo claro
④Rhein monoglucósido.
mp266~270℃
⑤Glucósido de crisofanol (glucósido de crisofanol)
mp245~246℃
⑥Emodin -l-O-β-D- glucósido (1-0-β-D-glucopiranosil emodina)
mp239~241 ℃
⑦Aloe emodina (w-o- β-d-glucopiranosil aloe-emodina)
mp187~189℃
8 rhein a, b, c, d
Rhein A: R = OH Rhein B: R = OH
Rhein c : r = h
De acuerdo con el hecho de que el glucósido de antraquinona en el ruibarbo se puede hidrolizar en hidroxiantraceno libre cuando se calienta en condiciones ácidas, mientras que la hidroxiantraquinona libre es insoluble en agua y soluble en disolventes orgánicos lipófilos. como éter y cloroformo. En este experimento, se extrajo la hidroxiantraquinona libre del hidrolizado y luego se separó mediante extracción con gradiente de pH.
Las antraquinonas libres también se pueden separar mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando diferentes polaridades.
Instrumentos, materiales y reactivos
Instrumentos: matraz de fondo redondo de 500 ml, vaso de precipitados, cuentagotas, tubo de goma, cilindro cromatográfico condensador esférico (750 px), frasco de muestra, extractor Soxhlet, embudo de decantación de 250 ml , Embudo Buchner, botella de filtro de succión, papel de filtro común, placa TLC, rociador y una gran cantidad de papeles de prueba de PH.
Materiales y reactivos: Ruibarbo 10~20g ~ 20g, NaHCO3, Na2CO3, NaOH, ácido sulfúrico, amoniaco, ácido clorhídrico, éter, éter de petróleo, acetato de etilo.
Pasos experimentales
1. Extracción de antraquinona libre
Pesar 50 gramos de polvo grueso de ruibarbo, añadir 150 ml de solución acuosa de 20H2SO4 y calentar en agua. baño durante 3-4 horas, enfriar, filtrar por succión, lavar la torta de filtración con agua hasta que esté casi neutra, filtrar por succión, secar a 70°C, pulverizar, colocar en un extractor Soxhlet, agregar 150 ml de éter a reflujo y extraer durante 3-4 horas para obtener un extracto etéreo.
El extracto etéreo se identificó mediante TLC como reína, aloe-emodina, emodina, emodina metil éter y crisofanol. El tablero de capa delgada es un tablero adherido de silicona y CNC y el agente revelador es éter de petróleo (60 ~ 90 ℃): acetato de etilo (7: 3), que se puede revelar casi horizontal o verticalmente. Bajo luz visible se pueden ver cuatro puntos. La mancha amarilla con Rf = 0,9 es una mezcla de crisofanol y emodinmetiléter, que no se puede separar en estas condiciones. Los otros tres puntos son emodina (manchas anaranjadas), aloeemodina (manchas amarillas) y rhein (manchas amarillas) en orden de valor Rf.
2. Extracción y separación por gradiente de PH
(1) Añadir el extracto etéreo en un embudo de decantación de 250 ml y extraer tres veces con 40 ml de solución acuosa de 2,5 nah co 3. El examen de la capa de éter mediante cromatografía en capa fina (condiciones de CCF) mostró que se extrajo rin del extracto etéreo, luego los tres extractos de nahco3 se combinaron y acidificaron con ácido clorhídrico concentrado para obtener el precipitado de rin. (Nota: agregue ácido lentamente para evitar que el ácido se desborde)
(2) La capa de éter extraída con una solución acuosa de NaHCO3 2,5 se extrajo tres veces con una solución acuosa de NaHCO3 2,5, 40 ml cada vez, y se verificó mediante dilución. Cromatografía en capa Capa de éter. Los resultados muestran que después de extraer completamente la emodina, los extractos de Na2CO3 se combinan tres veces y se acidifican para obtener la precipitación de emodina. (Preste atención a la misma operación que antes al acidificar) La solución de éter extraída con una solución acuosa de Na2CO3 2,5 se extrajo con una solución acuosa de Na2CO3 2,5 aproximadamente cuatro veces, 30 ml cada vez. El examen de TLC mostró que el aloe-emodina se extrajo completamente. Se combinaron cuatro extractos y se acidificaron para obtener un precipitado de aloe-emodina. (Como se mencionó anteriormente, preste atención a la operación durante la acidificación)
(3) Después de extraer la capa de éter con una solución acuosa de Na2CO3 al 2,5, luego extraiga con una solución acuosa de NaOH al 2,5 hasta que la capa acuosa alcalina sea incolora ( aproximadamente 4 veces), 50 ml cada vez, combinar los extractos de NaOH y acidificar para obtener la precipitación. Filtrar y lavar con agua hasta que el eluato sea neutro. Después de secar a baja temperatura, disolverlo en un pequeño volumen de éter de petróleo y utilizarlo como solución de muestra para cromatografía en columna. Mediante análisis TLC, la solución de muestra tenía manchas amarillas (manchas de la mezcla de crisofanol y emodina metil éter). Los dos se pueden separar si se utilizan las siguientes condiciones de cromatografía en papel.
Condiciones de cromatografía en papel: papel de filtro Xinhua 7×20 (cm)
Agente de revelado: éter de petróleo saturado con agua (BP 60 ~ 90 ℃)
Extendido modo: Orden ascendente
Cromógeno: solución de etanol 4NaOH.
3. Separación de crisofanol y emodina metil éter mediante cromatografía en columna de polvo de celulosa.
(1) Preparación de celulosa en polvo;
Corte el papel de filtro Xinhua (o su papel) en trozos pequeños, pese 15 g y agregue 300 ml de ácido nítrico diluido (por 100 ml). de agua 5 ml de ácido nítrico 65-68), calentar e hidrolizar (aproximadamente 2 horas), filtrar con succión (embudo resistente a los ácidos G3), lavar la torta de filtración con agua destilada hasta neutralidad, luego agregar una pequeña cantidad de etanol y éter a lavar uno por uno.
(2) Llenado de la columna: Llene en húmedo aproximadamente 8 g de polvo de celulosa con agua y éter de petróleo (BP 60 ~ 90 ℃).
(3) Carga de muestra: utilice una pipeta para añadir con cuidado la solución de muestra en la parte superior del lecho de la columna cromatográfica.
(4) Elución: Eluir con burbujas de agua y éter de petróleo (BP 60 ~ 90 ℃), recoger en secciones, cada sección es de 10 ml, concentrar por separado y verificar mediante cromatografía en papel (las condiciones de la cromatografía en papel son las igual que arriba), combine los mismos y recoja crisofanol y emodina metil éter respectivamente. El punto de fusión del crisofanol se determinó después de recristalización en acetato de etilo.
4. Identificación del crisofanol
(1) Compruebe la reacción del crisofanol con las soluciones de prueba de NaOH y MgAc2 mediante una reacción de gotitas en una placa de capa fina.
(2) Determinación del espectro UV del crisofanol.
(3) Determinar el espectro infrarrojo del crisofanol utilizando el método de tableta con bromuro de potasio.