¿Cómo realizar el cultivo de tejidos de plantas domésticas?

El cultivo de tejidos de plantas es imposible sin las condiciones y elementos más básicos, y no es imposible hacer un uso razonable de algunos de los instrumentos más sencillos del momento.

Primero, los elementos más necesarios

1. 1 olla a presión doméstica, preferiblemente más grande y con capacidad para más cosas. Se utiliza para la desinfección de medios de cultivo, agua esterilizada, etc.

2. Hay una caja de inoculación (caja esterilizada), que debe hacer usted mismo, utilizando unas tablas de madera, un trozo de vidrio y dos pies de tela. Para inoculación y transferencia.

3.1 La mejor balanza médica es la de 500 g o menos. Se utiliza principalmente para pesar agar, azúcar y otros elementos.

4. Compra una olla de acero inoxidable o de aluminio (de las que se utilizan para cocinar sopa y fideos). Se utiliza para cocinar medio de cultivo.

5. La cuchara utilizada para revolver y reenvasar el medio se utiliza para cocinar y reenvasar el medio.

6. Varios frascos de cultivo,

7. Se utiliza mucho algodón, gasa e hilo para hacer tapones de algodón, y tapones de algodón para hacer tapones de botellas. Cabe señalar que para el algodón se debe utilizar ropa acolchada de algodón normal, no el algodón absorbente que se utiliza en los hospitales, ya que esto puede provocar fácilmente desgaste, obstrucción y contaminación.

8. Algo de papel kraft y gomas elásticas se utilizan para envolver tapas de botellas y papel de regalo.

Lámpara de alcohol 9,65.438+0, bisturí 65.438+0, varias hojas, dos pares de pinzas, una probeta que contiene 65.438+00 ml y 65.438+000 ml respectivamente, pipeta de 2ml 65.438+0 y algunas algodón absorbente.

2. Cómo solucionar el problema del agua destilada y los fármacos alcalinos

El agua utilizada en el medio de cultivo siempre es muy importante en la mente de la gente común, pero en realidad es un preocupación innecesaria. Utilice agua hervida fría y agua de río limpia, lo que no afectará el efecto de reproducción. El agua purificada que se vende en el mercado es agua ideal para medios de cultivo en general. Los más utilizados, necesarios y usados, solo compra los siguientes.

1. Una gran cantidad de elementos en el medio de cultivo MS (el cultivo doméstico o en sala de cultivo de tejidos de bolsillo generalmente usa base MS). *** 5 tipos. También se pueden adquirir medios de cultivo de MS disponibles comercialmente.

(1), Nitrato de amonio

(2)Nitrato de potasio

(3), Cloruro de calcio

(4) Ácido nítrico Magnesio

(5), dihidrogenofosfato de potasio

2. Alcohol

3. Papel de prueba de precisión (PH 5,4-7,0)

4. Polvo blanqueador o lejía

5. Agar

6. Azúcar refinado

7. Manganato alto en potasio ( puedes comprarlo en el hospital o en la farmacia)

9. Rara vez se utilizan oligoelementos, sales de hierro, vitaminas y hormonas. Por ejemplo, el contenido de algunas hormonas, vitaminas, medicamentos, inyecciones y tabletas es relativamente preciso y usted puede establecer las proporciones según sus necesidades.

Las discusiones y sugerencias sobre el cultivo de tejidos por parte de entusiastas del entorno doméstico, la tecnología del cultivo de tejidos vegetales, especialmente la propagación rápida, no pueden ser logradas por profesionales y laboratorios profesionales por sí solos. Como entusiasta con un gran interés en las suculentas y el cultivo de tejidos, también puede preparar plántulas en tubos de ensayo usted mismo aprovechando al máximo las condiciones de su hogar. Durante el cultivo de suculentas, reconocimos algunas variedades hortícolas raras, como Wanxiang, Jade Fan, Shroud, Gaowen Eagle Claw, etc. O plantas tuberosas como los olivos de colores y la petunia Heru, o incluso planetas y robles piñoneros, entre otros. , el coeficiente de reproducción convencional es bajo, el cultivo de tejidos se puede utilizar para solucionar el problema de reproducción y obtener un número considerable de plántulas. El cultivo de tejidos también se puede utilizar para la siembra estéril de plantas que tienen dificultades para la germinación de las semillas, como Fantasia. Durante el proceso de cultivo de tejidos, no sólo podemos tener una comprensión más profunda de las plantas cultivadas, sino que también tiene una gran importancia para el cultivo de rutina. Muchos expertos dedicados al cultivo de tejidos no se especializaron en cultivo de tejidos al principio, pero lograron logros brillantes gracias a su interés y espíritu de exploración. La clave es que los fanáticos tienen un gran interés, una excelente observación y una operación meticulosa, pueden compensar las deficiencias de los no profesionales y aprovechar al máximo los diversos recursos disponibles en la vida diaria, lo cual es suficiente para que los fanáticos completen la capacitación organizacional en un ambiente hogareño. Al mismo tiempo, no sólo satisface los propios intereses, sino que también tiene ciertos beneficios económicos e incluso puede realizar inventos innovadores.

1. Cómo solucionar el problema del espacio y equipamiento básico:

Sin un determinado equipamiento no se puede realizar el cultivo de tejidos. Los equipos de cultivo de tejidos en los laboratorios formales son relativamente caros y no son adecuados para el consumo doméstico, pero sería fantástico si existiera una forma de comprar equipos de laboratorio baratos.

Si no tiene acceso a equipo de laboratorio, también puede fabricar usted mismo algunos equipos sencillos.

1. El equipo principal para la operación aséptica: caja de inoculación y olla a presión:

Caja de inoculación: la operación principal del cultivo de tejidos vegetales debe realizarse en un ambiente estéril relativamente cerrado. . Luego, primero debe crear un ambiente cerrado. Puede pegar una pequeña caja de inoculación con algunos materiales baratos como madera, tableros de plástico, plexiglás o marcos de aleación de aluminio. Los parámetros específicos se pueden encontrar en el libro "Cultivo de hongos comestibles". Simplemente haga una caja de inoculación que imite la caja de cultivo de hongos. Cabe señalar que la caja de inoculación de cultivo de tejidos requiere un alto sellado y trate de evitar madera podrida y materiales oxidados. En la parte superior de la caja se colocan dos luces: una lámpara UV de 20w y una lámpara fluorescente de 20w. La periferia de la caja debe ser de vidrio tanto como sea posible, porque es más fácil de observar. A veces se puede tomar prestada una caja de inoculación como incubadora, y la periferia de la caja debe ser de vidrio, que es más fácil de observar. y cultura.

Olla a presión: utilizada principalmente para la esterilización de medios de cultivo y otros materiales. Los autoclaves médicos se utilizan generalmente en laboratorios, pero en los hogares conviene aprovechar al máximo las ollas a presión que se utilizan en la cocina. La presión de la olla a presión es menor que la del esterilizador, pero aún así podemos conseguir buenos resultados ampliando adecuadamente el tiempo de esterilización. Por ejemplo, esterilizar el medio de cultivo durante 40 minutos (20 minutos para un esterilizador) básicamente puede lograr el efecto de esterilización. El agua esterilizada se esteriliza en lotes y se puede presionar en una olla a presión durante 40 minutos y dejar reposar durante 24 minutos. horas. Presione durante 20 minutos.

2. Ubicación:

Esto es fácil para las personas. El requisito general es que el lugar donde se realiza el cultivo de tejidos esté lo más libre de polvo posible, reduzca el movimiento del aire y preferiblemente tenga algo de luz solar. Por ejemplo, se pueden utilizar salas de estudio y salas de escritura para operaciones asépticas.

Se puede prestar la cocina para preparar el medio de cultivo, pero los utensilios utilizados deben estar separados de los utensilios de cocina. En general, casi todos los productos químicos utilizados en el cultivo de tejidos son inofensivos para los humanos, con excepción de algunas hormonas y desinfectantes. Los materiales tóxicos deben almacenarse con cuidado para evitar peligros.

3. Equipo auxiliar:

Se refiere principalmente al frigorífico, utilizado para almacenar productos químicos y medios de cultivo. La balanza puede ser una balanza de paleta con una sensibilidad de 100 gramos o incluso una balanza de medicina tradicional china. Rack cultural, este es más sencillo. La incubadora de vidrio de aleación de aluminio puede cumplir con los requisitos. Si no hay suficiente luz solar, puedes utilizar lámparas fluorescentes para complementarla.

4. Reactivos químicos:

Los reactivos químicos son esenciales porque el núcleo del cultivo de tejidos son los componentes del medio de cultivo, no simples operaciones asépticas. Es necesario adquirir algunos productos químicos que se utilizan en grandes cantidades, como macroelementos (nitrato de amonio, nitrato de potasio, dihidrógenofosfato de potasio, sulfato de magnesio, cloruro de calcio, etc.), permanganato de potasio, formaldehído, alcohol, azúcar, agar, etc. No es necesario adquirir oligoelementos y compuestos orgánicos porque se utilizan en pequeñas cantidades y en su lugar podemos utilizar zumo de verduras o zumo de patatas. Las hormonas son esenciales y su pesaje requiere la ayuda de una balanza analítica, pero las condiciones familiares no lo permiten. Si es posible, puedes usar unidades relacionadas en lugar de hacer licor madre, y puedes tomar algunas a la vez. La mejor manera es acudir a una tienda de suministros agrícolas (una que venda pesticidas y fertilizantes). Suelen vender hormonas agrícolas, algunas de las cuales se envasan en ampollas y se añaden al medio de cultivo en una determinada proporción. En los últimos años, algunas empresas químicas han comenzado a producir polvo crudo de medio de cultivo de tejidos vegetales, lo cual es conveniente con solo pesar una cierta cantidad de agua. Por ejemplo, para el polvo MS producido por Pantech Chemical Company, solo necesitas pesar 40 gramos, agregar 1 litro de agua y calentarlo en el microondas durante 5 minutos. Es bastante sencillo.

El desinfectante suele ser cloruro de mercurio (altamente tóxico). Si no está disponible, se puede utilizar polvo blanqueador.

A la hora de ajustar el valor del pH, se puede utilizar carbonato de sodio y vinagre blanco de uso habitual en el hogar.

5. Recipientes de cultivo y cristalería:

Los requisitos para los recipientes de cultivo de tejidos no son muy elevados, siempre y cuando el vidrio sea de color transparente (no se permite el vidrio sódico).

Podemos ir al basurero a recoger unas botellas viejas de mermelada. La mejor botella es la salsa de chile Axiangpo, que también se utiliza en nuestro laboratorio. La película selladora de la botella puede estar hecha de plástico de polipropileno. Si es difícil de encontrar, puedes usar papel de aluminio o incluso una bolsa de fideos instantáneos apta para microondas, doblarla en dos capas y asegurarla con una banda elástica.

Otros artículos de vidrio, como vasos de precipitados, varillas de vidrio, etc., se pueden reemplazar con tazas y palillos domésticos; algunos instrumentos de medición, como probetas, pipetas, etc., se compran mejor en tiendas de instrumentos de vidrio. . Me temo que no es necesario gastar 20 yuanes para configurar un conjunto de excelentes instrumentos de vidrio para cultivo de tejidos.

6.Otros:

También hay algunos suministros que son necesarios.

Por ejemplo, si necesita comprar un papel de prueba de pH preciso (5,4~7,0), le costará alrededor de 1,5 yuanes. No es necesario comprar un quemador de alcohol. Utilice un frasco de tinta con un anillo de vidrio y una mecha de algodón. Finalmente, la tapa de la botella de agua mineral Nongfu Spring se utilizó como bombilla. Esta lámpara de alcohol es pequeña y cabe en la caja de inoculación. Son necesarios cuchillos, tijeras y pinzas. Ve al puesto de herramientas en el mercado de flores y consíguelo todo por 10 yuanes. Tenga cuidado al elegir herramientas más pequeñas.

En cuanto al agua, se debe utilizar agua destilada, pero el agua pura que bebemos en casa es más pura que el agua destilada, por lo que con pedir prestada un poco de agua potable es suficiente. Usamos agua purificada de Master Kong para cultivar células animales y los resultados son muy buenos, y mucho menos el cultivo de células vegetales.

Los anteriores son los equipos y reactivos básicos del cultivo de tejidos, destacando principalmente sus alternativas relacionadas, ya que al ser de rápida propagación en cultivo de tejidos, sus requerimientos son bastante bajos. Nuestro cultivo doméstico es diferente del cultivo industrial. La producción industrial de plántulas de cultivo de tejidos requiere una alta tasa de proliferación, por lo que sus requisitos son más precisos y estandarizados. Nuestro entrenamiento en casa no necesita ser tan preciso, siempre que el entrenamiento sea exitoso. Por supuesto, si desea mejorar la tasa de proliferación y la calidad de las plántulas de probeta, debe acercarse lo más posible a los utensilios y equipos de laboratorio. Los sustitutos siempre tienen ciertos defectos.

(a) Instalaciones necesarias y alternativas

1. Alternativas

Se pueden utilizar refrigeradores domésticos para conservar la solución madre del medio de cultivo (4 ℃) y aquellos que lo requieran. Conservación a baja temperatura. Medicamentos (como reguladores biológicos).

Olla a presión: puede utilizarse para esterilizar medios de cultivo, agua esterilizada, cristalería y otros recipientes de cultivo de tejidos. Si la dureza del agua utilizada es alta, se puede utilizar agua hervida fría para la desinfección y esterilización. Evite incrustaciones en la superficie de los artículos desinfectados.

Olla de acero inoxidable o olla de aluminio: se puede utilizar para la esterilización de medios de cultivo, agar disuelto (a modo de baño maría) y equipos de cultivo de tejidos.

Barriles de aceite usado para cepillado: se puede utilizar para almacenar agua destilada.

Plato pequeño de porcelana blanca: se puede utilizar para inocular y contener desinfectante (si pones desinfectante no lo comas para evitar intoxicaciones).

Lámpara fluorescente: se puede utilizar para complementar la fuente de luz en el cultivo de tejidos.

Lave las latas desechadas: se pueden utilizar para cultivo de tejidos en lugar de matraces Erlenmeyer y tubos de ensayo.

Los sitios de cultivo de tejidos se pueden realizar en su propia habitación. Al preparar medios de cultivo e inocular, no hacerlo cuando haya muchos miembros de la familia. Si se ha instalado aire acondicionado en el interior, será beneficioso para la transición del cultivo primario, el cultivo secundario e incluso las plántulas.

2. Electrodomésticos

(1) Producción de cajas de inoculación: el banco de trabajo limpio es un equipo muy valioso en el proceso de cultivo de tejidos. Si en su lugar se utilizan cajas de vacunación caseras, se puede ahorrar mucho dinero y será beneficioso para la promoción.

Los materiales para las cajas de inoculación caseras pueden ser madera contrachapada, tableros de fibra, vidrio (de 3 mm de espesor), listones de madera (quillas que se utilizan para decorar las casas) o incluso cajas de cartón (cajas de calidad ligeramente mejor, como las de TV). cajas), también puede ser de plexiglás.

El tamaño del box de vacunación podrá determinarse según sus condiciones familiares. Si es demasiado pequeño, es incómodo de operar, pero es relativamente fácil de desinfectar y ocupa un área pequeña; uno grande es fácil de operar, pero el trabajo de desinfección no es fácil y ocupa un área grande. En general, el largo es de 70 cm y el ancho es de 45 cm. Una altura de 50 cm es más adecuada.

(2) Producción de incubadora: La incubadora puede reemplazar la sala de cultivo y también puede usarse para plántulas de transición. Puede ser de cristal o de pecera rectangular. Por tanto, se puede fabricar mediante unión de vidrio. Su tamaño se puede determinar según el área de su habitación y la cantidad de cultivo de tejido.

3. Es necesario comprar equipo

Balanza ordinaria (500 g): se utiliza para pesar y preparar medicamentos de medio de cultivo, o para pesar oro, plata y medicina tradicional china para preparar el cultivo. medicamentos medianos, oligoelementos y reguladores biológicos, o al comprar oligoelementos y reguladores biológicos, cómprelos envasados. Lámpara de alcohol 1: utilizada para quemar, desinfectar y esterilizar durante la vacunación. Embudo (también se puede utilizar para comprar aceite de cocina embotellado para su distribución): se utiliza para dispensar medios de cultivo. 2 pinzas largas: para inoculación. 2 bisturíes y varias hojas: para inoculación. Probeta graduada de 10, 50, 100 ml: se utiliza para preparar medio de cultivo. 2 Cuchara de ángulo largo: se utiliza para preparar medio de cultivo y tomar medicamentos. Pipeta de 1, 2, 5 ml: 1 para preparar medio de cultivo.

Película plástica resistente a altas temperaturas o papel kraft: se utiliza para envolver la boca del frasco de cultivo y las esquinas de la caja de inoculación casera. Anillo de goma: se utiliza para atar la boca del frasco de cultivo. Algodón absorbente: Se utiliza para la desinfección con hisopos a base de alcohol de operadores y equipos de cultivo de tejidos. Papel de prueba PH (5 ~ 7) 1: cuando se usa, se puede cortar en tiras pequeñas para detectar el valor de pH del medio de cultivo. 1 botella de alcohol: se utiliza para lámpara de alcohol y desinfección.

1 bote de polvo blanqueador: para desinfección. 1 frasco de formol: se utiliza para desinfectar la caja de inoculación (de 2 a 10 horas antes de cada operación, verter de 10 a 20 ml de formol en un pequeño plato de porcelana blanca y sacarlo antes de la operación). Medicamentos necesarios para el medio de cultivo MS; utilizados para preparar el medio de cultivo. Ácido clorhídrico e hidróxido de sodio: se utilizan para ajustar el pH. Si compra 1 lámpara UV, es ideal para la desinfección de interiores y cajas de inoculación.

(2) Precauciones operativas

La cirugía domiciliaria es diferente de la cirugía en la unidad. Se debe prestar atención a los siguientes aspectos: prestar atención a la seguridad y conservar los medicamentos de forma adecuada. Especialmente los ancianos y los niños; desinfecten cuidadosa y estrictamente durante la operación. Al inocular, los operadores deben usar máscaras y gorros de trabajo, evitar los ventiladores eléctricos y el clima ventoso y polvoriento, y los miembros de la familia deben evitar la operación a largo plazo. Evite que las mascotas domésticas entren al lugar de trabajo antes y después de la desinfección; pese los medicamentos con precisión si el hogar no tiene control de temperatura (como regulación de temperatura, aire acondicionado), evítelo en pleno verano y en invierno, el cultivo de tejidos de anthurium debe realizarse paso a paso; . Las flores que son fáciles de cultivar se pueden cultivar primero y las flores que son difíciles de cultivar se pueden cultivar después de adquirir experiencia.

1. Preparación de los recipientes de cultivo y la cristalería:

Para preparar el medio de cultivo, primero se debe preparar el frasco de cultivo y la cristalería. Los frascos de cultivo suelen utilizar varios frascos de mermelada. Primero, remoje la botella en jabón para platos durante 4 a 8 horas y luego enjuáguela varias veces con agua corriente. Otros artículos de vidrio también deben limpiarse de esta manera hasta que la pared de vidrio se convierta en una película de agua en lugar de gotas de agua. Se debe dar la vuelta al recipiente de vidrio limpio y vaciar el agua de la botella.

Los envases limpios deben protegerse del polvo y colocarse en vitrinas en la medida de lo posible. Es más fácil tapar el recipiente con una toalla limpia.

La pipeta se debe limpiar con una bola de succión y aspirar repetidamente con agua destilada hasta que quede limpia. Coloque la pipeta en un tubo largo para facilitar el acceso. Generalmente, las pipetas sólo se pueden utilizar una vez, lo que significa que es necesario limpiarlas, por lo que es necesario preparar varias pipetas. Recomendación: 10ml/2, 5ml/2, 1ml/5.

2. Preparación del medio:

El medio clásico para el cultivo de tejidos es la fórmula MS, que se divide básicamente en: macroelementos, oligoelementos, sales de hierro, compuestos orgánicos, hormonas vegetales, Azúcares y soportes. La dosis de estos ingredientes es del nivel de miligramos, lo que es difícil de pesar con una báscula común. Para solucionar este problema, podemos aumentar la dosis de cada componente para hacer un licor madre y agregarlo en una cierta proporción al usarlo.

El esquema de preparación del licor madre del medio de cultivo MS es el siguiente:

Elementos principales: 66,0 gramos de nitrato de amonio

76,0 gramos de nitrato de potasio;

Cloruro de calcio anhidro 13,3g;

Sulfato de magnesio heptahidratado 14,8g;

Dihidrogenofosfato de potasio 6,8g.

Disolver las sustancias anteriores por separado y luego combinar y ajustar el volumen a 1l. Por cada 1l preparado, tomar 25ml de medio de cultivo MS estándar.

Sal de hierro: 5,56 gramos de sulfato ferroso heptahidratado

7,46 gramos de etilendiaminotetraacetato disódico;

Calentar y disolver las dos sustancias anteriores respectivamente, mezclarlas, diluir el volumen a 65438±0 litros, ajustar el pH por debajo de 5,5 y tomar 5 ml de MS por litro.

La cantidad de oligoelementos y compuestos orgánicos es demasiado pequeña. Para simplificar, podemos utilizar en su lugar extracto vegetal o extracto de patata. Por lo general, estamos acostumbrados a hervir 100 g de espinacas en 100 ml de agua durante 10 minutos, filtrar y retener el filtrado y agregar de 20 a 50 ml de solución de extracción por 1 litro de medio de cultivo ms. De la misma forma añadir 100 gramos de patatas peladas a 200 ml de agua y hervir durante 15 minutos, filtrar el filtrado y añadir de 50 a 100 ml por litro de medio de cultivo MS.

Después de añadir lo anterior Como ingredientes se requieren 30 gramos por litro de medio de cultivo MS, azúcar blanca y 7 gramos de agar.

Cabe señalar aquí que tanto el azúcar como el agar son cantidades variables y deben ajustarse según sea necesario. Además, la carragenina, que se utiliza para hacer gelatina, también puede sustituir al agar y tiene mejor transparencia.

Después de añadir los ingredientes anteriores el volumen será de unos 800 ml, y lo calentamos en el microondas hasta que el agar se disuelva por completo. En este momento, agregue las hormonas vegetales requeridas (generalmente se prepara una solución al 0,1%, por lo que cada 1 ml del medio de cultivo se convierte a 1 ppm). Luego agregue agua para llevar el volumen a 1100 ml (1,1 litros). El motivo de añadir 0,1 litro es compensar la pérdida en embalaje y esterilización. Finalmente, use ácido y álcali para ajustar el valor del pH a 5,8 ~ 6,0.

3. Utilice polvo de MS para preparar el medio de cultivo:

En la actualidad, algunas empresas químicas nacionales han desarrollado un medio de cultivo en polvo MS simple, que simplifica enormemente la preparación del medio de cultivo. a las instrucciones de diferentes empresas. Tipo de medio de cultivo.

Tomemos como ejemplo el polvo original de MS: el polvo original del medio de cultivo MS incluye macroelementos, oligoelementos, sales de hierro, compuestos orgánicos, azúcar y agar. Generalmente se pesa según el método de uso, se calienta y se disuelve en un. Diluir a 1100 ml (1,1 litros) y ajustar el pH a 5,8.

4. Subenvasado:

Empaque el medio de cultivo preparado en recipientes de cultivo. Preste atención a dispensarlo mientras esté caliente, porque el agar se solidificará por debajo de los 40 grados. El medio de cultivo en cada botella de cultivo es aproximadamente 1/6 ~ 1/5 del volumen de la botella. Tenga cuidado de no colgar el medio de cultivo en la pared exterior de la botella, lo que puede causar contaminación. Después de volver a empaquetarlo, séllelo con una película de polipropileno o una bolsa que contenga fideos instantáneos y fíjelo con un anillo de goma (el anillo de goma es resistente al calor, así que intente elegir una cámara de aire para bicicleta).

5. Desinfección:

Se recomienda comprar algún "papel de prueba del efecto de esterilización" en las tiendas de dispositivos médicos para la desinfección de ollas a presión domésticas. Se logra el efecto de esterilización, cambiará de color. Poner en la olla el papel de prueba y el medio de cultivo al mismo tiempo, calentar hasta que salga mucho vapor, cortar a presión y mantener a fuego lento de 30 a 40 minutos.

Después de la esterilización, enfriar de forma natural, sacar el medio de cultivo y colocarlo en un lugar fresco y libre de polvo para su uso posterior.

6. Preparación de la caja de inoculación:

La caja de inoculación recién hecha debe estar limpia y tener el menor número posible de rincones muertos. 2 horas antes de cada uso, coloque todos los elementos necesarios para la operación en la caja de inoculación, luego agregue de 3 a 5 g de permanganato de potasio en un vaso pequeño y colóquelo en la caja de inoculación. Vierta 2-3 ml de solución de formaldehído en el vaso de precipitados de la caja. Después de unos segundos, aparecerá vapor de formaldehído, lo que permitirá esterilizar todos los elementos de la caja de inoculación por primera vez. Al mismo tiempo, encienda la lámpara ultravioleta para irradiar. La lámpara ultravioleta se genera mediante vapor de mercurio penetrante a alta presión y la esterilización ultravioleta se utiliza para la esterilización secundaria. Después de unos 15 minutos de irradiación ultravioleta, se estimulará el oxígeno para formar ozono, que sirve como tercera línea de defensa para la esterilización. Después de tres esterilizaciones, la caja de inoculación puede alcanzar básicamente los estándares de esterilidad.

15 minutos antes de la operación, verter 5 ml de amoniaco concentrado en el vaso utilizado para evaporar el formaldehído. Debido a que el formaldehído es tóxico para el cuerpo humano, el amoníaco y el formaldehído pueden formar una sustancia sólida llamada "hexametilentetramina" para neutralizar el vapor irritante del formaldehído. No apague la lámpara ultravioleta en este momento, continúe irradiándola hasta que se apague 5 minutos antes de la cirugía, manténgala oscura durante 5 minutos y luego encienda la lámpara fluorescente para la cirugía. La razón para mantener la oscuridad durante 5 minutos es que la luz ultravioleta mata los microorganismos al actuar sobre los tetrámeros de timina en el ADN para formar tetrámeros, pero los microorganismos tienen una proteína de fotorresurrección que puede reducir los tetrámeros de timina en presencia de luz visible y resucitar los microorganismos. Este efecto se llama "fotorresurrección", por lo que es necesario mantenerlo oscuro durante unos minutos después de apagar los rayos ultravioleta para evitar que se produzca la fotorresurrección.

Cómo realizar un cultivo de tejidos en casa

Preparación

Debido a las condiciones limitadas, el cultivo de tejidos en casa no puede configurar una gran cantidad de medios nutritivos. Generalmente, 1 litro. se utiliza cada vez que debe. Después de hervir, use papel de prueba de pH para medir, divídalo en 35 a 40 botellas, tápelas con tapones de algodón y envuélvalas en papel de regalo. (Al hacer astillas de algodón, debe usar algodón enrollado en lugar de algodón absorbente. Luego envuélvalo bien con una gasa y átelo bien con hilo de algodón. La estanqueidad del tampón debe ser tal que la botella del tampón portátil no se deslice). Introducir en el autoclave a alta presión. Esterilizar. Cuando el vapor salga a borbotones de la boquilla del autoclave, abroche la válvula de presión, comience a cronometrar expulsando aire de la válvula de presión, manténgala así durante 15 a 20 minutos y luego apague el fuego. Una vez que desaparezca la presión, abra la tapa de la olla, saque el medio nutritivo y colóquelo en la caja de inoculación para su uso posterior. En el primer experimento, cuando no se observa crecimiento de moho, el medio esterilizado debe dejarse durante tres a cinco días antes de su uso. Si crece moho, significa que el tiempo de esterilización no es suficiente y es necesario aumentarlo adecuadamente.

Vacunar

Colocar el medio de cultivo esterilizado, el agua esterilizada, el desinfectante y el equipo usado en la caja de vacunación. Dado que el volumen en la caja de inoculación es relativamente pequeño, todos los artículos usados ​​deben colocarse en los lugares correspondientes de manera ordenada y no pueden colocarse al azar. La humedad dentro de la caja es alta, por lo que se debe utilizar un encendedor en lugar de una cerilla para encender la lámpara de alcohol. Se debe prestar especial atención a preparar los contenedores para aguas residuales y suciedad lo más grandes posible, ya que no está permitido sacar cosas de las cajas durante el funcionamiento. Después de colocar todos los elementos, coloque el vaso magnético que contiene 10-20 ml de formalina en la caja (es mejor no usar un vaso de vidrio, porque la temperatura es alta durante la reacción y es fácil de explotar), vierta 2 -5 g de manganato de potasio (polvo de PP) llena la caja con vapor para lograr el efecto de esterilización. En este momento, los orificios de escape y de funcionamiento de la caja de inoculación deben cerrarse para evitar la rápida difusión del vapor de formaldehído. La inoculación sólo puede comenzar después de que se agote el vapor de la caja, lo que dura entre 5 y 10 horas.

Al inocular, retire los sellos de los orificios de ventilación y de funcionamiento de la caja de inoculación, saque la copa magnética para fumigar, envíe el material de inoculación a la caja de inoculación, encienda la lámpara UV, apague Enciende la lámpara UV después de 15 minutos y enciende. Enciende las luces y ponte a trabajar. Durante la cirugía debemos establecer el concepto de esterilidad, tratar todo como portador de bacterias y prestar siempre atención a la prevención. El trabajo se debe a la alta temperatura y humedad en la caja, y las manos son propensas a sudar, por lo que después de cada frasco de vacuna es necesario limpiarse los dedos con alcohol o usar guantes. Además, preste atención a la prevención de incendios durante la operación. Debido a que el espacio es pequeño, es fácil quemarse los dedos o provocar un incendio de alcohol si no tiene cuidado. Al abrir el corcho, coloque la boca de la botella sobre la lámpara de alcohol, pellizque la cola del tampón con el dedo anular y el meñique de su mano derecha y saque suavemente el tampón. No se pueden colocar tampones sobre los artículos de la caja. Después de la inoculación, coloque la boca del matraz con una lámpara de alcohol y un tapón de algodón, luego tápelo suavemente sobre la llama de la lámpara de alcohol, ate el papel de regalo, marque la variedad, la fecha de inoculación y el número con un lápiz, y luego repita .

De hecho, las personas se sienten mucho más cómodas en el trabajo que en un banco limpio. La tasa de contaminación también es muy baja y casi no se produce contaminación después de una operación especializada. Después de la inoculación, la diferenciación de callos, la diferenciación de plántulas y el estado de crecimiento no fueron diferentes de los inoculados en la plataforma ultralimpia.

Cultivo

Las condiciones de cultivo no se pueden controlar en condiciones de aficionados en casa, por lo que se deben utilizar plenamente las condiciones naturales. El frasco de cultivo inoculado se puede colocar en un lugar con luz intensa y difusa, como una estantería junto a una ventana, un escritorio, etc., pero se debe evitar la luz solar directa. Generalmente, puede crecer normalmente a una temperatura ambiente de 22-28 grados centígrados. No es una variedad especial y no requiere cuidados especiales. Si la temperatura ambiente es demasiado baja, puede usar cartón, tiras de madera y película plástica para hacer una incubadora simple e instalar una o dos lámparas tejidas blancas de 15 a 25 vatios en el interior, que no solo pueden complementar la luz sino también aumentar la temperatura del cultivo. Cuando la temperatura es demasiado alta en verano, si es posible, se puede colocar en una habitación con aire acondicionado. Si no hay una habitación con aire acondicionado, es difícil enfriarse, pero la mayoría de las plántulas de probeta pueden tolerarlo y no morirán. Después de que las plántulas crezcan, sin duda es un placer colocarlas en una estantería o banco de trabajo y sentir las pequeñas y vibrantes criaturas que has cultivado.

Cultivo

Cuando las plántulas crezcan hasta cierto punto, puedes configurar algún medio de enraizamiento y transferir las plántulas para que echen raíces. Cuando un determinado sistema de raíces haya crecido, puedes plantarlo. fuera de la botella. Al cultivar plántulas fuera de botellas, se debe prestar atención a los siguientes aspectos: primero, bajar la temperatura adecuadamente; segundo, aumentar la humedad; tercero, controlar estrictamente los peligros de diversas bacterias; cuarto, asegurarse de que el medio de siembra esté suelto y respirable; quinto; , asegúrese de que haya una iluminación adecuada. Yo suelo utilizar metatarsianos, aserrín y cáscaras de arroz como sustrato mixto. Después de plantar las plántulas, rocío las raíces con clorotalonil y las cubro con una película plástica. Algunas plántulas simplemente se cubren con vidrio. Después de unos 15 días, se puede retirar la cubierta y realizar el tratamiento normal.

De hecho, no es muy difícil realizar un cultivo de tejidos en casa. Es fácil de hacer siempre que uses tu cerebro y pienses en algunas formas. Todo es difícil al principio, pero siempre hay más métodos que dificultades. 65438 a 0974 Soy director de un instituto de investigación de tabaco curado con humo en un determinado condado, pero las condiciones originales no lo permiten y los fondos para la investigación científica son muy escasos. Al principio, la financiación de la investigación científica era sólo de 3.000 yuanes al año. Ese año hice cultivo de haploides de anteras de tabaco, cultivo de anteras de arroz, cultivo de endospermo de cítricos, cultivo de tejidos de puntas de brotes de caña de azúcar negra, cultivo de callos de Panax notoginseng y cultivo de esterilidad de semillas de nudo negro (Dendrobium), fusión de células somáticas. Lo hicimos de esta manera. En ese momento, muchos institutos de investigación de Beijing y Shanghai vinieron a verlo y quedaron muy sorprendidos. Pensaban que estábamos tirando preciosas plántulas de cultivos de tejidos por todas partes. Es increíble que no pudieran hacerlo, pero sí pudieron hacerlo en una zona montañosa muy remota. Lo que digo no es para alardear de mí mismo, sino para decirles a mis amigos que quieran trabajar en esta industria que no subestimen su propia energía y que no sean supersticiosos con la autoridad. Mientras tengan confianza, seguirán estrictamente las leyes científicas. nada es imposible.

Selección y evaluación del efecto de los medios de cultivo de tejidos domésticos

La selección de los medios adecuados es la base para un cultivo de tejidos vegetales exitoso.

La selección de un medio de cultivo adecuado considera principalmente los dos aspectos siguientes: uno es el medio de cultivo básico; el otro es la concentración y proporción relativa de varias hormonas.

El medio MS es adecuado para la mayoría de las plantas dicotiledóneas, el medio B5 y N6 son adecuados para muchas plantas monocotiledóneas, especialmente el medio N6 es muy eficaz para el trigo, el arroz y otras plantas herbáceas, y el medio blanco es adecuado para el cultivo de raíces.

Primero pruebe estos medios para experimentos preliminares, que pueden evitar desvíos y reducir en gran medida el consumo de tiempo, mano de obra y recursos materiales. Después de pasar una serie de pruebas preliminares, algunos componentes se pueden ajustar en un pequeño rango según la situación real.

Al realizar ajustes, puede consultar las siguientes situaciones. Primero, cuando se utiliza un compuesto como fuente de nitrógeno, el nitrato es mejor que el amonio, pero el nitrato por sí solo cambiará el pH del medio hacia una dirección alcalina. Esta deriva se puede superar si se añade nitrato junto con una pequeña cantidad de sal de amonio. En segundo lugar, cuando el suministro de ciertos elementos es insuficiente, las plantas cultivadas mostrarán algunos síntomas y podrán ajustarse según los síntomas. Por ejemplo, cuando no hay suficiente nitrógeno, el tejido cultivado suele mostrar el color de las antocianinas (rojo y morado), y es difícil ver la diferenciación de las moléculas de los vasos dentro del callo cuando no hay suficiente nitrógeno, potasio o fósforo; las células crecerán significativamente, formando algunos callos inusuales esponjosos o incluso transparentes cuando hay deficiencia de hierro y azufre, el tejido perderá su color verde, la división celular se estancará y el callo mostrará síntomas de envejecimiento marrón cuando la célula tenga deficiencia de boro; la división tiende a ser lenta y demasiado alargada; cuando hay deficiencia de manganeso o molibdeno, el crecimiento celular se ve afectado.

Los efectos de las hormonas exógenas en el medio de cultivo también provocarán situaciones similares en el cultivo, por lo que se requiere un análisis cuidadoso y no se pueden sacar conclusiones fácilmente.