La inmunidad no específica es

Pertenecen a la inmunidad inespecífica, los macrófagos fagocitan los gérmenes que invaden el cuerpo humano.

Macrófagos:

Los macrófagos son células inmunes con múltiples funciones y son objetivos importantes para estudiar la fagocitosis celular, la inmunidad celular y la inmunología molecular. Los macrófagos son fáciles de obtener, fáciles de cultivar y pueden purificarse. Los macrófagos son un grupo de células que no se reproducen y pueden vivir de 2 a 3 semanas en condiciones adecuadas. Se utilizan principalmente para cultivos primarios y es difícil que sobrevivan durante mucho tiempo.

Ciclo de vida de los macrófagos:

Cuando los monocitos entran en un tejido dañado a través de la capa de células endoteliales de los vasos sanguíneos (este proceso se llama extravasación de leucocitos), sufre una serie de transformaciones hasta convertirse en un macrófago.

Los monocitos son quimiotaxis y son atraídos hacia las áreas dañadas por estímulos químicos, incluidas células lesionadas, patógenos, histamina liberada por mastocitos y basófilos, y citoquinas liberadas por macrófagos en el sitio. En algunos lugares, como los testículos, se ha demostrado que los macrófagos colonizan mediante proliferación.

Entorno de cultivo de macrófagos y métodos de cultivo:

Entorno de cultivo de macrófagos:

El cultivo de macrófagos es una tecnología de operación estéril que requiere un entorno de trabajo y las condiciones deben garantizar que no haya microbios. contaminación y sin influencia de otros factores nocivos. El principio de diseño de la cámara de cultivo de macrófagos es prevenir la contaminación microbiana y factores nocivos, y requiere un ambiente de trabajo limpio con aire fresco, seco y libre de polvo.

El principio de diseño de una sala de cultivo de macrófagos es generalmente que el área de operación estéril está ubicada en el lado interior de la sala, donde hay menos movimiento. Las operaciones de rutina y el cultivo cerrado se realizan en una sala, mientras que el lavado y el cultivo están cerrados. La desinfección está en otra habitación.

Método de cultivo de macrófagos:

1. Tres días antes del experimento, inyectar 1 ml de caldo de ácido tioacético estéril en la cavidad abdominal de cada ratón (no inyectar en el intestino).

2. Mata al animal cortándole el cuello. Sujeta la cola de la rata y sumerge toda la rata en alcohol al 70% durante 3 a 5 segundos.

3. Coloque al animal en la mesa de disección, fije las extremidades con agujas, use fórceps con ambas manos para abrir la piel y tirar de ella hacia ambos lados para exponer el peritoneo, pero sin dañar el peritoneo. muro.

4. Después de frotar la pared peritoneal con alcohol al 70%, utilice una jeringa para inhalar 10ml de solución Eagle e inyéctela en la cavidad abdominal al mismo tiempo, frote la pared peritoneal con los dedos de ambos. lados para permitir que el líquido fluya completamente en la cavidad abdominal.

5. Utilice la aguja para levantar suavemente la pared abdominal, incline al animal ligeramente hacia un lado y permita que el líquido de la cavidad abdominal se acumule debajo de la aguja y lo succione hacia el tubo de la aguja.

6. Saque con cuidado la aguja, inyecte el líquido en el tubo de centrífuga, centrifugue a 250 gy 4 ℃ durante 10 minutos, retire el sobrenadante y agregue 10 ml de medio Eagle.

7. Contar macrófagos. Cada ratón puede producir 20-30×105 macrófagos, el 90% de los cuales son macrófagos.

8. Para obtener 3×105 macrófagos adheridos/cm2 es necesario inocular 2,5×106/ml.

9. Para purificar y cultivar macrófagos, retire otros glóbulos blancos. Después de unas horas de inoculación, retire el medio de cultivo, enjuague con solución Eagle 1 a 2 veces, agregue nuevo medio de cultivo Eagle y almacene. a 37°C durante 5 Cultivados en incubadora con %CO2.