Banco de preguntas sobre biología tumoral de la Universidad de Shandong

Tema:

Pesca (materia de primer nivel); conservación y procesamiento de productos acuáticos (dos materias)

Cuando se utiliza la centrifugación, se mide la velocidad de sedimentación de las macromoléculas. Igual a la velocidad por unidad de campo centrífugo. O s=v/ω2r. s es el coeficiente de sedimentación, ω es la velocidad angular del rotor centrífugo (radianes/segundo), R es la distancia al centro de rotación y V es la velocidad de sedimentación. El coeficiente de sedimentación se expresa como el tiempo de sedimentación por unidad de gravedad y suele oscilar entre 1 y 200 × 10-13 segundos. El factor de 10-13 se denomina unidad de liquidación S, es decir, 1S=10-13. Los coeficientes de sedimentación de la mayoría de las proteínas y ácidos nucleicos están entre 4S y 40S, los ribosomas y sus subunidades están entre 30S y 80S y los polímeros están por encima de 100S.

Principios y métodos para la determinación del coeficiente de sedimentación.

Principios y métodos para la determinación del coeficiente de sedimentación.

Coeficiente de sedimentación

Según la definición de coeficiente de sedimentación dada por Svedberg (el fundador de la centrifugación, el "químico de proteínas" sueco) en 1924, el movimiento de partículas en una unidad centrífuga Velocidad del campo de fuerza.

Llame a los parámetros que describen el movimiento de la partícula en el campo de fuerza centrífuga.

El coeficiente de sedimentación se expresa en el tiempo.

La S de macromoléculas biológicas como proteínas y ácidos nucleicos suele rondar los 10-13 segundos, por lo que el coeficiente de sedimentación de 10-13 segundos se denomina unidad de Swedberg, abreviada como S, y su dimensión es segundos. .

[Unidad usada] segundo

[Otra unidad] 1 Swedberg = 1E(-13) segundo

[Unidad internacional] segundo

Debido a que cambia con el tipo de solvente y la temperatura, generalmente se convierte al valor en agua pura a 20°C, y luego la extrapolación se calcula cuando no hay fuerza intermolecular y la concentración es cero. El coeficiente de sedimentación está determinado por el peso molecular, la forma molecular y el agua. Es muy importante como característica de las macromoléculas biológicas.

Determinación del coeficiente de sedimentación

El coeficiente de sedimentación se determina con una centrífuga analítica.

Por lo general, sólo se necesitan decenas de miligramos o incluso decenas de microgramos de muestra para preparar una solución de 1 a 2 ml, colocarla en un tanque de análisis y centrifugar durante unas horas para obtener diagramas de sedimentación centrífuga de una serie. de muestras. Según el diagrama de sedimentación, se pueden analizar cualitativamente los componentes contenidos en la muestra, también se puede determinar el coeficiente de sedimentación y el tamaño molecular estimado de cada componente, se puede verificar la pureza y heterogeneidad de la muestra y el contenido relativo de cada componente. se puede determinar.

El principio de determinación del coeficiente de sedimentación

El principio de medición del coeficiente de sedimentación es medir la velocidad de sedimentación de las partículas de la muestra bajo un campo de fuerza centrífuga constante.

Dado que las partículas de la muestra son muy pequeñas y no se pueden ver directamente, la velocidad de movimiento de la interfaz de las partículas de la muestra durante el proceso de centrifugación se utiliza como la velocidad promedio de sedimentación de las partículas de la muestra. Los sistemas ópticos de absorción y Schlieren se utilizan comúnmente para registrar patrones de asentamiento de interfaz. En el diagrama de sedimentación, la interfaz de la muestra generalmente presenta un pico simétrico y el punto más alto del pico representa la posición de la interfaz. (Imagen)

En términos generales, la precisión de la medición del coeficiente de sedimentación es ±2%. Sin embargo, si el patrón del límite de la superficie muestra un patrón de pico asimétrico, o si se espera que la precisión de la medición del coeficiente de deposición sea del 1% o menos, no es suficiente utilizar el punto más alto del pico como ubicación de la interfaz. En este momento, se utiliza el método de distancia de segundo orden para calcular la posición de la interfaz.

Principio básico

Cuando un objeto gira alrededor del eje central, se verá afectado por la fuerza centrífuga f. Cuando la masa del objeto es m, el volumen es v, el la densidad es d y el radio de rotación es r. Cuando la velocidad angular es ω (radianes por segundo), podemos obtener:

F=Mω2r o F=V.D.ω2r (1)

Lo anterior explica que la fuerza centrífuga del material centrífugo y la masa del material, el volumen, la densidad, la velocidad angular centrífuga y el radio de rotación son directamente proporcionales. Cuanto mayor sea la fuerza centrífuga, más rápido se asentará el material centrifugado.

Durante el proceso de centrifugación, el material centrifugado debe superar los obstáculos de flotabilidad y fricción. La fuerza de flotación f} y la fuerza de fricción f}} se expresan mediante las siguientes fórmulas respectivamente:

F'=V.D', ω2r (2)

F''=f dr/ dt (3)

Donde d} es la densidad de la solución, f es el coeficiente de fricción y dr/dt es la velocidad de sedimentación (el cambio en el radio de rotación por unidad de tiempo).

Principio Básico

En algunos casos, puede ser:

F=F'+F ' '

V.D ω2r =V. .D'ω2r + f. dr/dt

dr/dt =Vω2r (D-D')/f (4)

La ecuación (4) muestra que el asentamiento La velocidad es directamente proporcional a la diferencia entre el volumen y la densidad del material centrífugo, e inversamente proporcional a F. Si s representa la velocidad de sedimentación bajo el campo de fuerza unitario (ω2r=1), entonces

S=V (D-D' )/f

s es el coeficiente de sedimentación.

Para las macromoléculas biológicas, el coeficiente de sedimentación se encuentra principalmente entre (1~500)×10-13 segundos. Para facilitar la aplicación, la gente define 1×10-13 segundos como una unidad (o 1S). Generalmente, las proteínas simples están entre 1 y 20S, las moléculas de ácido nucleico más grandes están entre 4 y 100S y las estructuras subcelulares más grandes están entre 30 y 500S.

Tomemos como ejemplo las proteínas.

Cuando la proteína de la solución se somete a una fuerte centrifugación, si la densidad de la solución de proteína es mayor que la densidad del disolvente, las moléculas de proteína se hundirán. En el campo centrífugo, cuando la fuerza centrífuga neta de las moléculas de proteína (fuerza centrífuga menos fuerza de flotación) y la fuerza de fricción del solvente alcanzan el equilibrio, la intensidad del campo de fuerza centrífuga unitaria es fija, y este valor fijo es el coeficiente de sedimentación. La velocidad de sedimentación se expresa por la distancia que descienden las partículas por unidad de tiempo.

Método de medición:

(1) Muestra: proteína.

⑵ Solución de muestra y centrifugación: disuelva la muestra en la solución tampón y agregue la solución y el disolvente en una celda de análisis de doble ranura de una determinada especificación. Equilibre los pesos del tanque de análisis y del tanque de equilibrio de modo que el tanque de equilibrio no sea más de 0,5 g más liviano que el tanque de análisis y luego instálelos en el rotor de análisis respectivamente. vacío. Encender la fuente de luz schlieren, seleccionar la velocidad de trabajo y centrifugar a temperatura ambiente. Después de que la cámara giratoria alcanza el vacío, la centrífuga comienza a acelerar y el patrón centrífugo se puede ver en la ventana de observación. Después de alcanzar la velocidad de trabajo, centrifugar a velocidad constante.

Tomemos como ejemplo las proteínas.

Después de ver el pico de muestra, podrás tomar fotografías a intervalos. Después de tomar la fotografía, puede apagar la máquina, retirar la solución de muestra y limpiar el rotor y la celda analítica. Después de revelar la fotografía y revelarla con un fuerte contraste, puede obtener una fotografía del patrón de depresión del camino de luz Schlieren.

⑶ Medición de la imagen de asentamiento: La imagen de asentamiento de Schlieren se puede medir con un medidor de longitud, un microscopio de lectura o un proyector. Al medir, coloque la película negativa de la imagen de asentamiento en el instrumento de medición de modo que la línea vertical del nivel del líquido coincida con la línea vertical en el instrumento de medición, y luego use marcas cruzadas para medir las posiciones del orificio de referencia interno, líquido nivel, pico de interfaz y orificio de referencia exterior en secuencia, cada imagen se lee y mide al menos tres veces y se toma el valor promedio. Mida cada imagen por turno utilizando el mismo método y enumere los datos.

(4) Cálculo del coeficiente de liquidación s: Sustituir en la fórmula de cálculo.

Análisis de imágenes por centrifugación

Cuando comienza la centrifugación, si ve un pico que se asienta rápidamente, llegará al fondo de la celda de análisis en unos minutos. Esto generalmente se debe a la muestra. fracción. Se polimeriza para formar un polímero que sedimenta rápidamente. Después de alcanzar la velocidad de centrifugación, la imagen del centroide de la muestra muestra una forma de pico simétrica, que generalmente puede considerarse como una centrifugación homogénea. Sin embargo, otros métodos como la electroforesis, la cromatografía, etc. Se utiliza para probar aún más la verdadera homogeneidad de la muestra. Algunas muestras mixtas muestran ocasionalmente picos simétricos. Las formas de los picos a menudo se expanden con el tiempo como resultado de la difusión de la muestra. Sin embargo, si la forma del pico se expande rápidamente, la muestra puede estar polidispersa. Si hay varios picos en la imagen de centrifugación, significa que hay varios componentes en la muestra. Cada pico representa la interfaz de sedimentación del componente correspondiente, por lo que se puede determinar el valor del coeficiente de sedimentación de cada componente. Según el área del pico, se puede medir el valor de concentración del componente.

En ocasiones, las imágenes de centrifugación muestran picos asimétricos, que pueden deberse a las siguientes condiciones. ① Los picos de varios componentes con coeficientes de sedimentación similares se superponen; ② La muestra está polidispersa y la distribución del peso molecular es desigual. ③ La velocidad de sedimentación de algunos polímeros con interacciones fuertes depende en gran medida de la concentración. Si se mide en concentraciones altas, la forma del pico es asimétrica en la región de la interfaz debido a la velocidad de sedimentación inconsistente causada por los cambios de concentración.

Las unidades enzimáticas se definen en función de la actividad de la enzima. Según el Comité de Enzimas de la Asociación Internacional de Bioquímica, la cantidad de enzima que convierte 1 micromol de sustrato en producto en 1 minuto se define como 1 unidad, que se denomina unidad estándar. También se especifican las condiciones para la acción de la enzima. Dado que las unidades estándar son inconvenientes en aplicaciones prácticas, las unidades de actividad enzimática a menudo se formulan de acuerdo con diferentes enzimas en producción. Por ejemplo, la cantidad de proteasa que puede hidrolizar la caseína para producir 1 microgramo de tirosina en 1 minuto es 1 unidad de proteasa; la cantidad de amilasa licuada que puede licuar 1 g de almidón en 1 hora es 1 unidad, y así sucesivamente. Al medir la actividad enzimática, existen regulaciones unificadas sobre la temperatura de reacción, el valor de pH, la concentración del sustrato y el tiempo de acción para facilitar la comparación de productos similares.

Las unidades enzimáticas no reflejan directamente la cantidad absoluta de enzimas, sino que son sólo una base para una comparación relativa.

El ácido nucleico es un nutriente contenido en todos los alimentos humanos. Nuestra comida habitual puede proporcionarnos una gran cantidad de ácido nucleico, y el ácido nucleico se puede utilizar muchas veces en el cuerpo humano, por lo que la cantidad de ácido nucleico que necesitamos complementar todos los días no es muy grande, y complementarlo deliberadamente es un desperdiciar. Y los "productos para la salud", dijo, eran "ácidos nucleicos" y no "nucleótidos". La primera es una sustancia macromolecular y la segunda es una sustancia de molécula pequeña. Una vez que las moléculas grandes ingresan al cuerpo humano, deben hidrolizarse en moléculas pequeñas antes de que el cuerpo pueda absorberlas. Su absorción definitivamente no es tan buena como la de complementar directamente sustancias de moléculas pequeñas, lo que demuestra que la producción de este "producto para la salud" no se ha discutido completamente. Pensé que estaba usando "ácido nucleico" porque el ácido nucleico se puede extraer directamente de las células de varios organismos. Además, la extracción de ácidos nucleicos de baja concentración no requiere ninguna tecnología avanzada, y los estudiantes normales de secundaria pueden hacerlo, pero la producción de nucleótidos requiere hidrólisis de ácidos nucleicos o fermentación microbiana, lo que aumentará los costos;

El ácido nucleico es una sustancia macromolecular. La concentración de ácidos nucleicos en los "productos para la salud" es ciertamente mucho mayor que la de nuestra alimentación diaria. Después de ingresar al cuerpo humano, pueden ocurrir una serie de reacciones bioquímicas complejas que estimulan al cuerpo a producir anticuerpos. Los anticuerpos pueden combinarse con los mastocitos en la pared gástrica, provocando una reacción alérgica (esta reacción es muy compleja y nadie puede hacerlo). Teóricamente especulamos que no. Debería demostrarse mediante una gran cantidad de experimentos clínicos. No estoy seguro de que tales "productos para la salud" hayan sido probados.

En resumen, creo que es mejor no hacerlo. compre productos tan publicitados.

Los glicosaminoglicanos, antes conocidos como mucopolisacáridos, son heteropolisacáridos que se encuentran principalmente en los tejidos conectivos de los animales superiores y también se encuentran en las plantas. Es un polisacárido de cadena larga compuesto por unidades de disacárido repetidas, una de las cuales es hexosamina (glucosamina o galactosamina), por lo que se llama glucosaminoglicano; la otra es ácido urónico. Es un componente importante del intersticio, la mayor parte del. intersticio son los glucosaminoglucanos.

Los glucosaminoglicanos se dividen en ácido hialurónico, condroitina 4-sulfato, condroitina 6-sulfato y dermatán sulfato, heparán sulfato, heparina y sulfato de queratina. La precipitación por fraccionamiento es uno de los métodos comunes para separar proteínas. Los disolventes orgánicos pueden precipitar muchas macromoléculas biológicas solubles en agua y su función principal es reducir la constante eléctrica del medio de las soluciones acuosas. C es 80 y la constante dieléctrica de la solución de etanol al 82% es 40. La disminución de la constante dieléctrica de la solución significa que la atracción de Coulomb entre las cargas de las moléculas del soluto aumenta, reduciendo así la solubilidad del soluto. p>

Reacción de color de las proteínas

1. Prueba de Biuret Biuret NH2-Co-NH-Co-NH2 es el producto de la condensación de 2 moléculas de urea, (NH2-Co-NH2) pierde 1 molécula de amoniaco La molécula polipeptídica contiene muchos enlaces peptídicos -co-NH-similares al biuret. Por lo tanto, cuando se agrega álcali y una pequeña cantidad de sulfato de cobre a la solución de proteína, se forma un complejo de cobre de color rojo púrpura. El intermediario de hidrólisis tiene una prueba de biuret. Esta propiedad está relacionada con el número de enlaces peptídicos en la molécula de proteína, lo que se puede atribuir a la formación de cobre con una valencia de +2. Reacción amarilla: Algunas proteínas se vuelven amarillas cuando reaccionan con ácido nítrico concentrado y se vuelven naranjas cuando se tratan con agua con amoníaco. Las moléculas de proteínas que sufren esta reacción generalmente tienen anillos de benceno. Las proteínas son como aminoácidos. Las proteínas pueden reaccionar con el reactivo de ninhidrina hidratada para producir una reacción púrpura, que puede identificar las proteínas.

Efectos clínicos de la heparina: ki.com.cn/Article/CJFDTotal-HZZZ200830021.htm

1 Unidad de actividad enzimática por unidad de peso (mg) de proteína o ARN en condiciones específicas. número.

2. La actividad específica es una medida de la pureza de la enzima, es decir, el número de unidades de actividad enzimática por unidad de peso de proteína, generalmente expresada en UI/mg de proteína. En términos generales, cuanto mayor es la actividad específica, más pura es la enzima.

3. La actividad específica se refiere al número de unidades de actividad enzimática por miligramo de proteína, generalmente expresada como unidades de actividad enzimática/mg de proteína. En la investigación enzimológica, la actividad específica de una enzima se utiliza para medir la pureza de la enzima. Para la misma enzima, cuanto mayor sea la actividad específica, mayor será la pureza de la enzima. La actividad específica se puede utilizar para comparar la capacidad catalítica de la proteína por unidad de masa en preparaciones de enzimas y es un indicador importante de la pureza de la enzima.

Los productos en los que los extremos reductores de los azúcares y otros componentes no azúcares se combinan mediante enlaces de valencia, incluidas las glicoproteínas y los glicolípidos, también se denominan glicoconjugados. Los glicoconjugados tienen diversas estructuras y diferentes funciones. Las glicoproteínas están ampliamente distribuidas, son de muchos tipos y varían mucho en su contenido de azúcar. Generalmente, las que tienen menos azúcar que proteínas se denominan glicoproteínas, las que tienen más azúcar que proteínas se denominan proteoglicanos y las que tienen cadenas peptídicas más cortas también se denominan peptidoglucanos. Las glicoproteínas tienen múltiples funciones. La mayoría de las proteínas del plasma animal son glicoproteínas. Muchas enzimas y proteínas con funciones de transporte son glicoproteínas. Además, muchas hormonas y sustancias del grupo sanguíneo, como las proteínas que sirven como componentes estructurales o desempeñan un papel protector, también son glicoproteínas. Los proteoglicanos son componentes básicos del tejido conectivo animal y también se encuentran en las superficies celulares o directamente asociados con la membrana plasmática. Las bacterias grampositivas tienen múltiples capas de peptidoglicano que rodean sus células. Los glicolípidos se encuentran ampliamente distribuidos en animales, plantas y microorganismos y están compuestos de lípidos y azúcares. Se pueden dividir en glicolípidos y lipopolisacáridos. Los glicolípidos contienen menos azúcar y sus funciones no se comprenden completamente. Desempeña un papel importante en la regulación del transporte de azúcar, la biosíntesis de glicoproteínas y proteoglicanos, el reconocimiento celular, la diferenciación celular y la carcinogénesis. El tejido nervioso de los animales es rico en gangliósidos, que son glicolípidos. El lipopolisacárido es un componente esencial de la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. Más importante aún, tanto las glicoproteínas como los glicolípidos participan en la formación de biopelículas, lo que resalta la ubicación de los azúcares en la membrana. Hay varias cadenas de oligosacáridos en la membrana, y la estructura de estas cadenas de oligosacáridos está estrecha y sutilmente relacionada con la función de la membrana e incluso con la función de toda la célula.

La desnaturalización de proteínas se refiere a cambios en la conformación espacial específica de una proteína bajo la acción de ciertos factores físicos y químicos, dando como resultado cambios en sus propiedades físicas y químicas, perdiendo así su actividad biológica. Este fenómeno se llama desnaturalización de proteínas.

1. Cuando una proteína se une a un ion metálico cargado positivamente, ¿en qué dirección se mueve el punto isoeléctrico? ¿Por qué? Realmente no puedo encontrar esto.

El ácido ribonucleico inmune (ARNi) existe en los linfocitos y su peso molecular es mayor que el del factor de transferencia (TF) (13500). El ARNI puede extraerse del bazo y de los ganglios linfáticos de ovejas u otros animales inmunizados con tejido tumoral humano, o de leucocitos de sangre periférica y leucocitos de sangre del bazo de seres humanos normales. Convierte los linfocitos no sensibilizados en células inmunológicamente activas. Este producto es ácido ribonucleico y tiene la función de transferir la actividad inmune. Puede ser la activación de los núcleos celulares o de receptores específicos de la membrana celular los que convierten los linfocitos normales en linfocitos sensibilizados y mejoran la función inmune celular del cuerpo. El IRNA es activo en animales receptores homólogos y heterólogos e incluso con xenobióticos.

Se utiliza para la miocarditis viral, la hepatitis crónica activa, la encefalitis japonesa y algunas enfermedades autoinmunes; también se utiliza para el tratamiento adyuvante de tumores malignos, como el cáncer de riñón, el cáncer de pulmón, el cáncer del tracto digestivo y neuroblastoma. Citoma y osteosarcoma.

Aplicaciones clínicas de la heparina. Éste es

Ki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZHHY801.033.htm, que es un método de purificación común para péptidos y fármacos proteicos.

Método de purificación de glicosaminoglicano ki.com.cn/Article/CJFDTotal-QDHY5S1.033.htm

Definición de términos científicos

Nombre chino:

Cromatografía de afinidad

Nombre en inglés:

Cromatografía de afinidad

Definición 1:

Uno Una técnica cromatográfica que utiliza unión por afinidad entre moléculas y sus ligandos para su separación. Se pueden elegir varios métodos de separación cromatográfica diseñados mediante efectos de afinidad, como bioquímica, inmunoquímica u otros ajustes estructurales.

Por ejemplo, el oligodesoxitimidilato de celulosa se utiliza para aislar y purificar el ARN mensajero. Separación con ADN-celulosa. ADN polimerasa dependiente de ADN: Separación de antígenos mediante preparación de anticuerpos en agarosa.

Tema:

Bioquímica y Biología Molecular (disciplina de primer nivel Métodos y Tecnología (dos disciplinas)

Definición 2: