Cultivo de células dendríticas derivadas de la médula ósea de ratón (BMDC)

¿CORRIENTE CONTINUA? Es la abreviatura de "célula dendrítica", que en chino se llama "célula dendrítica". Se llama así porque tiene muchas protuberancias dendríticas o pseudopodófilas cuando está maduro. La DC fue descubierta en 1973 por el científico canadiense Ralph M. Clark, ganador del Premio Nobel en 2011. Es la célula presentadora de antígenos (APC) más potente descubierta hasta el momento. Se ha demostrado que las CD son las únicas que pueden estimular significativamente las células T vírgenes (células T Na?Ve), mientras que otros tipos de APC (como los monocitos, las células B, etc.) sólo pueden estimular las células T activadas o de memoria. por lo que las CD son adaptativas. El iniciador de la respuesta inmune de las células T juega un papel extremadamente importante en la inmunidad tumoral.

? Aunque las CD existen en varios tejidos del cuerpo, su contenido es muy pequeño y no puede satisfacer las necesidades de la investigación científica y el tratamiento clínico. Por lo tanto, se han probado varios métodos para cultivar y expandir las CD in vitro. En humanos, el método más utilizado es inducir DC a partir de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC). Para ratones, el enfoque más común es inducir CD a partir de células de la médula ósea, es decir, CD derivadas de la médula ósea (BMDC).

Este artículo presenta principalmente:

Método de cultivo BMDC clásico: método de hoja de arroz (mejorado).

Preparación por lotes del método BMDC-Sen

Preparación por lotes del método BMDC-Lutz

Cosas a tener en cuenta

Método de cultivo clásico de BMDC - ¿Método Inaba (mejorado)?

Antecedentes:

El número de BMDC obtenido por 1. El método de Inaba es 5-7 x 106/animal;

2. El método de Inaba es más complicado y requiere la eliminación previa de linfocitos en la médula ósea mediante el método de anticuerpo + complemento. Los métodos mejorados posteriores omitieron este paso. De hecho, Inaba dijo más tarde que aunque este paso puede mejorar la pureza de BMDC, no afectará la producción de BMDC, por lo que se puede realizar o no. Tanto LPS como CD40L son fuertes inductores de la maduración completa de DC in vitro. La maduración de DC inducida por LPS y CD40L fue similar, pero los perfiles de citocinas inducidos por LPS fueron diferentes. Las BMDC maduras inducidas por CD40L exhiben las capacidades inmunomoduladoras más fuertes in vivo, incluida la generación de respuestas inmunes tumorales protectoras y terapéuticas.

La concentración de LPS utilizada para estimular la madurez completa de las DC es generalmente de 1 a 10 μg/ml, pero de hecho 0,1 μg/ml es muy potente, pero por razones de seguridad, generalmente se selecciona 1 μg/ml.

Cabe destacar que la molécula CD40L pertenece a la familia de ligandos del TNF, y su característica es que sólo puede funcionar después de formar un trímero. Por lo tanto, es mejor utilizar la proteína trímera CD40L recombinante para estimular las DC, lo que tendrá buenos resultados. Si las CD son estimuladas por monómeros CD40L, su madurez no es muy alta en la mayoría de los casos.

4. Selección de métodos de cultivo

Recomendación de reactivos relacionados con BMDC

Nota: La expresión de los marcadores de superficie utilizados para la identificación de DC se muestra como una sola en la diagrama de flujo Los picos, en la mayoría de los casos, no se pueden distinguir completamente de los picos negativos. Para evitar resultados inexactos causados ​​por un ajuste de compensación deficiente en el análisis multicolor, se recomienda que el análisis de marcador de superficie DC utilice preferiblemente un estándar único o, como máximo, estándares dobles, y se deben usar controles de isotipo en lugar de controles de celdas en blanco para excluir la tinción de fondo.

Dado que este artículo incluye mucho contenido técnico, si tiene alguna pregunta sobre los pasos experimentales, puede consultar la fuente original:/xwzx_936.html.

Nota: Este artículo es sólo de referencia.