Cómo prepararse para la validación de métodos de enumeración microbiana
1. Producto de prueba: XXXXXX cápsulas (número de lote: XXXXXX)
2. Cepa bacteriana:
Para recuento de colonias Bacterias:
(1) Bacillus subtilis [CMCC(B)63501]
(2) Staphylococcus aureus [CMCC(B)26003]
(3) Escherichia coli [CMCC (B) 44102]
(4) Candida albicans [CMCC (F) 98001]
Bacterias utilizadas para el examen de bacterias de control:
(1) Escherichia coli [CMCC(B)44102]
(2) Staphylococcus aureus [CMCC(B)26003]
3 Medio de cultivo: medio de cultivo caldo nutritivo, medio de Martin modificado, nutriente. medio agar, medio agar sodio rosa, medio lactosa de sales biliares y medio glucósido de 4-metilumbeliferona (MUG).
4. Según el método convencional y el método de dilución del medio de cultivo en la edición de 2005 del método de inspección de límites microbianos de la "Farmacopea China", las tasas de recuperación de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis son inferiores a 70, y este producto tiene efectos antibacterianos.
5. Recuento de bacterias, mohos y levaduras
Realizar pruebas de verificación metodológica y recuento de colonias de bacterias, mohos y levaduras de acuerdo con el Método de Inspección de Límites Microbianos de 2005 de la Farmacopea China.
5.1 Preparación de la solución bacteriana:
(1) Inocular cultivos frescos de Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Bacillus subtilis en 10 ml de caldo nutritivo e incubar a 35 ~ Incubar a 37 °C durante 18 a 24 horas. Tome 1 ml de la solución de cultivo, agregue 9 ml de solución estéril de cloruro de sodio 0,9 y dilúyalo 10 veces.
(2) Inocular el cultivo fresco de Candida albicans en 10 ml de medio de Martin modificado y cultivarlo a 23 ~ 28°C durante 24 ~ 48. Tome 1 ml de la solución de cultivo, agregue 9 ml de solución estéril de cloruro de sodio al 0,9 y diluya a 10-5 ~ 65438 utilizando el método de dilución incremental.
5.2 Preparación de la solución del producto de prueba: Tome 10 g del producto de prueba y una solución tampón de peptona y cloruro de sodio estéril de pH 7,0 a 100 ml, agite bien para preparar una solución madre del producto de prueba 1:10. Tome 10 ml de solución madre de muestra 1:10.