La diferencia entre teñir y no teñir en la prueba de componentes formados en orina
La orina tiene muchos componentes visibles al microscopio, que se pueden dividir en dos categorías: componentes orgánicos y componentes inorgánicos. Algunos componentes tienen un significado patológico claro, como células, tubos, parásitos, etc., y tienen un valor diagnóstico claro, otros son componentes excretados fisiológicamente, como diversos cristales fisiológicos, células epiteliales, etc., que en algunos casos tienen un valor diagnóstico auxiliar; .
Métodos de tinción y selección de los componentes formados en la orina
Algunos autores nacionales y extranjeros no recomiendan las pruebas de tinción de sedimentos. O se propone utilizar la tinción como una inspección especial separada de la inspección de sedimentos "de rutina"; el método de tinción puede ser tan solo dos o hasta 10; Para facilitar la descripción, los métodos de teñido se dividen en cinco tipos: teñido simple, teñido compuesto, teñido reactivo, teñido diferencial y teñido especial.
2.1 El método de tinción única es un método para teñir los componentes visibles de la orina con una única solución de tinción. Por ejemplo, agregar 1 gota de ácido acético 2 a un sedimento de orina húmedo (pieza húmeda para abreviar) puede destruir los glóbulos rojos, identificar las esporas de levadura y ver claramente los núcleos de los glóbulos blancos. Cuando se añade una gota de solución de yodo de Lugol al preparado húmedo, las células epiteliales son de color amarillo claro, los glóbulos blancos se tiñen intensamente y los cilindros también adquieren color. Los tintes azules incluyen 0,5 ~ 1 azul de metileno, 2 azul brillante de Coomassie, azul magenta, etc. Sentimos que el tinte azul es único y las células de este último no se tiñen fácilmente, pero los hilos de moco son azules. Los documentos europeos sobre análisis de orina recomiendan el uso de azul de toluidina 0,5, que se considera que tiene la ventaja de teñir claramente las estructuras nucleares. Cui Jianhe utilizó 2 verdes de malaquita para observar 36 casos de nefritis aguda en niños y descubrió que los cilindros de glóbulos rojos eran claros. Otra mancha única es la bilis porque en la orina con enfermedad hepática grave e ictericia, las diversas estructuras de tinción en la orina son claras y fáciles de identificar, por lo que no es aconsejable teñir los "portaobjetos húmedos" con bilis natural.
Las ventajas de los distintos métodos de tinción únicos enumerados anteriormente son que los reactivos son simples, fáciles de obtener, de bajo costo y fáciles de preparar. Sin embargo, las desventajas son que. la tinción es única y el núcleo y el citoplasma no son fáciles de identificar y separar el color. Debido a la mala permeabilidad, los tintes de alta concentración formarán precipitados después de ser colocados, por lo que es mejor usar paquetes pequeños y filtrar los residuos antes de dispensarlos para teñir. Evite interferir con el campo de visión del teñido.
2.2 La tintura compuesta adopta dos o más métodos de tintura o un método de tintura que utiliza tintes auxiliares. El sedimento de orina más utilizado es la tinción de Wright-Giemsa después de que se seca el portaobjetos. Dado que está sincronizada con la tinción del frotis de sangre, es fácil de implementar y promover en varios laboratorios. El Primer Hospital de la Universidad de Pekín 65438-0987 utilizó este método para contar el porcentaje de neutrófilos en el sedimento de orina y utilizó 70 como límite para distinguir la infección de la no infección. Sin embargo, las tabletas tardan mucho en secarse y las células son propensas a deformarse y deformarse. En comparación con los portaobjetos húmedos, las células y los modelos se disuelven y deforman fácilmente. Si no se agrega suero a las tabletas secas que tienen ingredientes menos tangibles, es fácil ver los ingredientes tangibles debido al lavado. La tinción de Wright también se ve afectada por factores como el valor del pH y la temperatura, lo que dificulta ver claramente la estructura de las células epiteliales tubulares renales. Según muchas publicaciones, la tinción de Papanicolaou se considera el mejor método de tinción compuesta. No solo tiene una buena separación de colores y una estructura de componentes clara y visible, sino que también es fácil de distinguir células autólogas, como las células tumorales, en la orina. Schumann es el método preferido para la tinción patológica de células renales, pero es difícil de popularizar debido a los altos requisitos de calidad del tinte, el uso de múltiples tintes y los complejos procedimientos de deshidratación.
2.3 La tinción in vivo es simple y fácil, incluido el azul de cresilo brillante (azul de alquitrán brillante) en 1, pero también existen los problemas del método de tinción única mencionado anteriormente. Sternheimen-Malbin (S-M), es decir, el tinte amarillo arena violeta de genciana, es barato y fácil de obtener, y se ha convertido en el método de teñido más introducido en el país y en el extranjero. Ya en la década de 1960 se introdujeron en detalle la preparación de tintes y los métodos de teñido. La tinción SM puede teñir los glóbulos rojos en azul claro y los leucocitos polimorfonucleares en rojo anaranjado. Algunos leucocitos se denominan células flash cuando se mueven en un movimiento molecular marrón. Se ha informado que un recuento de leucocitos >10 ayuda a identificar la pielonefritis. Los cilindros transparentes son de color rosa o lavanda y los cilindros celulares se tiñen de color púrpura oscuro. Sin embargo, los reactivos preparados mediante este método son propensos a la precipitación y no son lo suficientemente fuertes como para identificar componentes visibles en la orina.
Por lo tanto, la literatura europea recomienda el uso de la combinación Alicia Blue 8g-Pyroninb, es decir, el método de tinción de Sternbeimer (S). También hay una tabla comparativa de los resultados de la tinción SM y la tinción S en China. Otros métodos de tinción compuesta, como la tinción de Kage, utilizan una combinación de acetona y 8-hidroxiquinolinabencidina para identificar los glóbulos blancos, pero este último es un carcinógeno y ya no se recomienda. La tinción de Lippmann también utiliza tintes como ácido pícrico saturado, glicerina, azul de metileno y eosina, pero la combinación de tintes puede producir fácilmente partículas finas de color marrón púrpura que interfieren con la tinción.
2.4 Realice tinciones diferenciales según diferentes métodos de tinción para identificar diferentes componentes en la orina, como tinción con rojo aceite-O o Sudán-ⅲ para grasa, tinción de Hansel para lipasa eosinofílica y monocitos. ASD, tinción de Gram para bacterias, tinción de azul de Prusia para hemosiderina, etc. Estos colorantes se han incorporado a normativas extranjeras para lograr estandarización, secuenciación y regularización, y desempeñan un papel en la identificación de la tinción de los componentes formados en la orina. Por lo que se recomienda utilizarlo como referencia en los exámenes experimentales de nuestro país.
2.5 El método de tinción especial es un método de tinción que se ha promovido en las pruebas de componentes formados en orina totalmente automáticas en los últimos años. Se aplica a contadores de células sanguíneas de componentes formados en orina totalmente automáticos (UF-100, UF-50). ) Una prueba rápida de composición de partículas de orina. En la serie UF, las partículas de orina se tiñen con el tinte Unisearch, que contiene dos tipos de tintes fluorescentes: verde de carbonilo y fenantridina. Después de la irradiación con láser, se detecta luz dispersada hacia adelante y diferentes intensidades de fluorescencia de partículas coloreadas, lo que proporciona información sobre el tamaño de las partículas y la sensibilidad a la tinción en la orina. Este método tiene las ventajas de no necesitar centrifugación, alta uniformidad y comparabilidad, fácil control de calidad y se pueden completar simultáneamente múltiples detecciones de glóbulos rojos, glóbulos blancos, bacterias (levaduras), etc. Es una reforma importante en. análisis de orina. Utilice tintes fluorescentes para observar las células tumorales bajo un microscopio de fluorescencia y utilice microscopía electrónica de barrido y transmisión para observar cilindros bacterianos. Además, se utiliza tinción inmunohistoquímica para determinar el origen de los cilindros, lo que proporciona una prueba diagnóstica para la necrosis tubular aguda, la nefritis intersticial aguda y la nefritis semilunar que no requiere biopsia. Este experimento requiere varios anticuerpos monoclonales contra células renales y cilindros, por lo que es difícil informarlo.
Grupp C et al informaron que la tinción con lectina para identificar núcleos de células epiteliales no escamosas después de la fijación con acetona proporciona un método confiable para identificar células nucleadas en la orina. Grunewald-R-W et al. observaron 41 pacientes con rechazo de trasplante renal y utilizaron citometría de flujo para observar CD3, CD4, CD8, CD14 y macrófagos mononucleares en la orina, lo que proporcionó un valor de referencia para el rechazo renal agudo.
Aunque se han logrado algunos avances en la formación de los componentes de la orina, todavía introducimos varios métodos de tinción para identificar partículas de orina, especialmente analizadores totalmente automáticos: citometría de flujo, cuantificación semiautomática, placas de análisis, etc. , utilizando tecnología de teñido para mejorar la discriminación y demostrando la importancia del teñido. Mediante la introducción de los métodos y principios de selección anteriores, varios métodos de teñido tienen sus propias características. En los laboratorios primarios, la tinción compuesta o la tinción reactiva es mejor que la tinción única, la inmunofluorescencia se utiliza en la enfermedad renal para mejorar la discriminación y la tinción diferencial ayuda a identificar diferentes partículas en la orina. Merece la pena debatir en profundidad en el futuro cómo mejorar aún más la gestión de la calidad del licor de tinte y estandarizar los métodos de teñido. Otra cuestión importante es cómo aplicar el método de tinción de componentes formados en orina a la prevención y el tratamiento de pacientes con enfermedades renales, del tracto urinario y otras enfermedades, para fortalecer la conexión entre la clínica y el laboratorio y brindar servicios clínicos. El personal siempre debe considerar.