Cómo elegir el kit de inmunoensayo ligado a enzimas en ratón
Las enzimas se pueden combinar con anticuerpos primarios o secundarios, y las enzimas marcadas con estreptavidina también se pueden combinar con anticuerpos primarios marcados con avidina.
Además, los resultados de las pruebas del kit ELISA de ratón también incluyen detección radiactiva, detección de fluorescencia, quimioluminiscencia o detección cromogénica.
Ahora hay muchas formas de realizar la prueba ELISA y puedes elegir según tus propias preferencias.
Generalmente, ELISA detecta los productos solubles de reacciones enzimáticas. La enzima correspondiente (como la peroxidasa de rábano picante HRP) se une al anticuerpo y se le añade el sustrato correspondiente (como 3,3-diaminobencidina DAB). el sistema de reacción.
Esta reacción enzimática produce un color característico que puede detectarse con un espectrofotómetro. La fosfatasa alcalina AP también es una enzima de uso común.
2. Analizar los últimos tipos de anticuerpos
En los kits ELISA se pueden utilizar tanto anticuerpos monoclonales como anticuerpos policlonales. De hecho, a veces funcionan mejor juntos. Por ejemplo, para un enfoque sándwich de doble anticuerpo, a veces es más útil capturar con múltiples anticuerpos y detectar con un anticuerpo monoclonal.
Múltiples anticuerpos pueden garantizar que se capturen todos los antígenos y, luego, los anticuerpos monoclonales pueden detectar específicamente antígenos con epítopos específicos.
3. Reacción cruzada
Si hay conflicto o reacción cruzada entre anticuerpos, afectará la especificidad de todo el experimento. La compatibilidad provocada por la fuente del anticuerpo es un factor de reactividad cruzada.
Cuando se utiliza el método sándwich de doble anticuerpo para la detección ELISA, el segundo anticuerpo utilizado para la detección debe ser específico del primer anticuerpo de detección y no puede reaccionar con el anticuerpo capturado.
Si el anticuerpo secundario de detección se combina con el anticuerpo de captura, la especificidad del experimento se reducirá considerablemente. Por lo general, elegimos capturar anticuerpos de diferentes huéspedes y detectar anticuerpos primarios para evitar los problemas anteriores.
4. Tipos experimentales de kits de ELISA de ratón
ELISPOT es un poco como Western blot. Las células se cultivan en una microplaca con una membrana y luego se detecta el antígeno secretado por las células. en la membrana, formando manchas. Además, también debemos elegir una placa de 96 pocillos o una placa de 384 pocillos para experimentos ELISA según nuestras propias necesidades.
Aunque existen muchos tipos, todos tienen una característica común que es la captura de antígenos.
Las formas generales de captura incluyen la adsorción de antígenos a microplacas o la captura con anticuerpos en microplacas. ELISA intracelular y ELISPOT inmunospot ligado a enzimas son dos tipos especiales. ELISA intracelular requiere que las células cultivadas en placas de micropocillos se fijen, se permeabilicen y luego se detecten in situ con anticuerpos.