Tecnología de aislamiento de arterias y vasos sanguíneos del ratón
Anestesiar al ratón y desinfectarlo.
Abra el tórax y el abdomen del ratón, exponga el corazón y corte los órganos toracoabdominales en secuencia hasta que quede expuesta la aorta.
Separe completamente la aorta, colóquela en un plato esterilizado y transfiérala rápidamente a una mesa limpia que contenga PBS estéril (pH 7,2).
Enjuague los vasos sanguíneos repetidamente con solución D-Hanks para eliminar la sangre residual.
Diseccione el tejido adiposo y los pequeños vasos sanguíneos fuera de la aorta y despegue con cuidado la adventicia hasta que los vasos sanguíneos queden lisos y transparentes.
Coloque la aorta en una solución DMEM (que contiene 4,5 g/l de glucosa, 10 mmol/l de piruvato, 2 mmol/l de glutamina, 100 U/l de penicilina y estreptomicina, 20 % de suero bovino fetal), utilice tijeras oftálmicas para cortar. la aorta longitudinalmente, raspe suavemente la íntima 23 veces para retirar la íntima.
Transfiera los vasos sanguíneos extraídos a otra placa estéril que contenga 3 ml de medio DMEM/F12 que contenga 20 % de FBS y corte el bloque de tejido con tijeras oculares de 1 mm × 1 mm 0 mm.
Plante los trozos de tejido de manera uniforme en el fondo del frasco de cultivo, gire suavemente el frasco de cultivo para que el fondo del frasco quede hacia arriba y agregue 2 ml de medio DMEM/F12 fresco que contenga un 20 %. FBS.
Colocar el frasco de cultivo en una incubadora de cultivo celular a 37°C y 5% de CO2 durante 45 horas para permitir que las piezas se sequen ligeramente. Cuando el bloque de tejido esté firmemente adherido al fondo del matraz de células, gire suavemente la botella de cultivo para que el bloque de tejido quede completamente sumergido en el medio de cultivo.
Ponlo en una incubadora que contenga 5% de CO2 a 37 °C. Después de cultivar durante 3 días, observa el crecimiento celular y reemplaza la solución.
Cuando las células crezcan hasta el 80% del área del fondo del matraz de cultivo, realizar la operación de paso. Las operaciones específicas son las siguientes: digerir las células con tripsina al 0,25% y pasarlas con solución de digestión con tripsina. Después de subcultivar durante 2 horas, inocular el sobrenadante en otra botella de cultivo. Después de 24 horas, recoger la suspensión celular no adherente según el estado de adhesión celular, centrifugar durante 5 minutos, resuspender e inocular en una nueva botella de cultivo. purificado repetidamente utilizando el método de fijación diferencial.
En definitiva, se debe prestar atención a la manipulación aséptica durante la cirugía para evitar la contaminación celular.