Metodología del espectro de enzimas miocárdicas

(1) Colorimetría de Wright: P1151 Principio:

COOH COOH COOH COOH

(CH2)2 CH2 AST (CH2)2 CH2

C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0

COOH COOH COOH COOH

Cetoglutarato ácido aspártico ácido glutámico hierba Ácido acetoacético

COOH CH3

CH2 Citrato anilina C=0 CO2

C=0 Descarboxilación COOH

COOH

Piruvato

CH3

C=0 →Piruvato-2.4- = H2O

COOH Nitrofenilhidrazona

La 2.4-dinitrofenilhidracina es ácida, de color amarillo pajizo, con álcali añadido, de color rojo parduzco

Comparación de color con fenilhidrazona generada a partir de piruvato de concentración estándar (505 nm)

2. Valor de referencia normal: 8-28u

3. > (1) Las muestras hemolizadas no se pueden utilizar para la determinación de AST, porque la AST en los glóbulos rojos es 10 veces mayor que la del suero.

(2) M-AST y C-AST tienen diferentes propiedades físicas y químicas y propiedades Ag, y están controladas por genes diferentes, pero catalizan la misma reacción y son las mismas enzimas

(3) El método colorimétrico es simple y relativamente preciso, por lo que es popular

(4) Es difícil determinar que la producción de productos es proporcional al tiempo durante el período de reacción enzimática.

El oxaloacetato es un inhibidor competitivo de la AST. A medida que avanza la reacción, los productos y las enzimas reaccionan continuamente.

(5) Problemas de reacción del color y concentración del sustrato.

El cetoglutarato también puede reaccionar con la 2,4-dinitrofenilhidrazina para producir otra fenilhidrazona marrón, lo que aumenta los falsos positivos en la determinación de AST.

Para reducir su interferencia, la longitud de onda se selecciona entre 490-530 nm. En este momento, el piruvato es el doble que el -cetoglutarato.

2,4-dinitrofenilhidrazina en solución alcalina. También debe colorearse para aumentar la absorbancia.

(6) A. Transaminación acoplada:

ALT

Piruvato glutamato alanina

Así que las enfermedades hepáticas que involucran AST y ALT consumen piruvato simultáneamente y reducir los resultados de la medición de AST.

B. Bypass de producto

Ácido láctico

LDH ↑NADH H

Piruvato

↑

α-cetoglutarato aspartato aa AST oxaloacetato glutamato aa.

↓MDH NADH H

Ácido málico

Así que por LDH y MDH interfieren y reducen AST resultados de la medición

(2) Acoplamiento de enzimas con algunos métodos de monitoreo continuo externo:

1 Principio: L-aspartamo aa.

Oxaloacetato NADH H MDH L-ácido málico NAD

340nm

Valor de caída de absorbancia, calcular actividad AST

Valor de referencia: Macho lt; /L 37℃

Mujer lt; 35u/L 37℃

3. Precauciones:

(1) Separe el suero inmediatamente después de la extracción de sangre para evitar la hemólisis. /p>

El suero y los coágulos de sangre no deben mantenerse juntos durante mucho tiempo

(2) Suero a temperatura ambiente durante 4-8 h, 2- 6 ℃ 7 días -20 ℃ Vitalidad sin cambios durante 8 meses

(3) Plasma anticoagulante:

EDTA, 2Na, heparina no tiene efecto inhibidor sobre la AST

Los anticoagulantes de oxalato no se pueden utilizar porque pueden inhibir la actividad de la AST

(4) La concentración de AST es demasiado alta, diluir y rehacer.

(5) No hay problemas de transaminación por acoplamiento ni de derivación del producto.

(6) No hay interferencia del cetoglutarato y la concentración del sustrato se puede aumentar adecuadamente para completar la reacción

(7) El ácido glutámico deshidrogenasa (GLDH) existe en el sustrato

α-cetoglutarato NADH H NH3 GLDH glutamato aa. los resultados son falsamente superiores.

(8) Piruvato LDH en coche claro

Piruvato NADH H LDH Ácido láctico HAD

El consumo de NDAH H hace que el resultado sea mayor

(9) Debido a la acción de la enzima indicadora, el oxalacetato puede descarboxilarse automáticamente a piruvato, provocando que el resultado sea bajo. Se debe agregar LDH para convertirlo en ácido láctico para reflejar con mayor precisión la actividad de AST.

Entonces, tanto la MDH como la LDH*** se utilizan como enzimas indicadoras.

3. Importancia clínica:

1. es la enzima más importante en la enfermedad cardíaca aguda. La duración del infarto es de 6 a 12 horas ↑, alcanza el máximo a las 48 horas y vuelve a la normalidad en 3 a 5 días.

2. post-cirugía, intoxicación por medicamentos, AST evidente ↑

Ca hepático, enfermedad hepática crónica, miocarditis, AST moderada

Miositis, pleuresía, nefritis, AST leve

3. Hepatitis aguda, AST y ALT al mismo tiempo, hasta 10-30 veces el valor normal, ictericia Se puede detectar en una etapa temprana, lo que es útil para el diagnóstico clínico temprano.

3. AST es lo mismo que la enzima I:

lt; gt amarillo; la importancia del diagnóstico de infarto de miocardio al medir las enzimas séricas:

La presencia de parénquima en el miocardio C y el hígado C Daño sexual M-AST C-AST ↑

M-AST ↑ tiene cierta importancia diagnóstica para el pronóstico de la enfermedad hepática

Infarto de miocardio M-AST ↑ Por tanto, cuanto mayor es el M-AST, más complicado es el infarto de miocardio. La morbilidad y mortalidad de la insuficiencia cardíaca son mayores, especialmente en términos de mortalidad, que es de mayor importancia.

4. Determinación de la lactato deshidrogenasa sérica: Principio La influencia del pH sobre ella

Enzima glicolítica LDH, reacción redox

Hay cinco tipos de la misma I Enzimas LDH1-LDH5

1. Distribución y características de la LDH:

Ampliamente distribuida, principalmente en riñón, seguida de corazón, músculo esquelético, otras hígado, bazo, páncreas, pulmón, y las lesiones tisulares anteriores, LDH en suero. Cataliza principalmente las siguientes reacciones:

Ácido L-láctico NAD Piruvato NADH H

Reacción directa de PH base (L-P)

Reacción inversa de PH neutro (P- L )

II. Metodología

(1) Método colorimétrico: P122

1. Principio: L-Lactato NAD 　LDH Piruvato NADH H

PH8.8

Piruvato 2,4-dinitrofenilhidrazina→ Piruvato-2,4-dinitrofenilhidrazona

Amarillo pajizo agrio

Añadir NaOH, rojo pardusco

Cuanto más oscuro es el color, mayor es la actividad enzimática

2. Valor de referencia: 225-540u/dL

3. tiempo de reacción

(1) La hemólisis de la muestra está estrictamente prohibida porque la actividad de la LDH en los glóbulos rojos es 100 veces mayor que en el suero.

(2) La LDH es inhibida por sales de metales pesados, EDTA y oxalato. Lo mejor es utilizar muestras de suero

(3) Muestras de suero durante 2 a 6 días, temperatura ambiente durante 48 horas

(4) La precisión y repetibilidad son las peores entre las pruebas enzimáticas , porque cinco enzimas idénticas de la misma especie tienen diferentes capacidades de unión a sustratos y las condiciones óptimas de reacción son diferentes. En patología, la composición de la LDH varía mucho, por lo que es difícil encontrar las condiciones óptimas de reacción para la LDH. ej: LDH1 ↑ para infarto de miocardio, LDH5 ↑ para enfermedad hepática

(5) Resultado: 2500u/dL, diluir la muestra y rehacer.

(2) Método de monitorización continua (método enzimático): P120

1 Principio: L-Lactato NAD PH8.8-9.8 Piruvato NADH H

El La reacción inversa es 2-3 veces más rápida que la reacción directa, por lo que la reacción está sesgada hacia la izquierda

LDH

Ácido propiónico NADH H Ácido láctico NAD

PH7 .4

Monitorando a 340 nm, la disminución de la absorbancia es proporcional a la LDH.

2. Valor de referencia: 240-460u/L 37 ℃

3. Notas:

(1) Ventajas de la reacción inversa:

a. La cantidad de reactivo utilizada es pequeña, el NAD requerido es solo 3 veces el NADH H usado en L-P y la muestra es pequeña.

b. Los cambios de absorbancia por unidad de tiempo son grandes. El rango lineal de la reacción inversa es grande y la velocidad de la reacción enzimática es 3 veces más rápida que la reacción directa, lo cual es conveniente para la medición. El tiempo es corto

c. La relación lineal entre la actividad de la enzima y el tiempo es larga

(2) Ventajas de la reacción positiva:

a. estable que NAD y más barato. Producto puro bajo y fácil de obtener.

El sustrato ácido L-láctico es estable con el sustrato de reacción inversa piruvato

b La inhibición de LDH por ácido L-láctico es menor que la inhibición de LDH por piruvato

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(3) El método de monitoreo continuo puede utilizar reacciones directas e inversas y es superior al método colorimétrico.

(4) La presencia de iones metálicos puede reducir la estabilidad de NAD

Se puede agregar EDTA al reactivo para formar un complejo de EDTA con iones metálicos y aumentar la estabilidad de NAD.

(5) La NAD es inestable y produce sustancias que inhiben la LDH. Es más estable en solución alcalina que en solución ácida, y más estable en tampón Tris que en tampón fosfato.

(6) En algunos lotes de sustancias NADH H y LDH, se verifica la calidad del NADH H antes de su uso. El NADH H se disuelve en tampón Tris y se mide a

260 nm y 340 nm respectivamente. La absorbancia debe ser 2,3, lo que indica que contiene impurezas con picos de absorción a 260 nm, como NAD y adenosina.

(7) Como sustratos se pueden utilizar ácido α-cetobutírico, ácido hidroxipirúvico y ácido glioxílico en lugar de piruvato.

(8) La muestra no puede hemolizarse

3. Importancia clínica:

1.LDH ↑: infarto agudo de miocardio, lesión del músculo esquelético, ciertas hepatitis, leucemia, cirrosis hepática, ictericia obstructiva y tumores malignos.

2. Infarto de miocardio: 12-24 h, LDH ↑, alcanza el pico a las 48-72 h y vuelve a la normalidad después de 1-2 semanas.

3. de tumor maligno, dolor en el pecho causado por LDH de tumor maligno en ascitis ↑

4. En pacientes con glomerulonefritis crónica, LES, nefropatía diabética, etc., la LDH urinaria puede alcanzar de 3 a 6 veces la de las personas normales. La orina contiene una variedad de sustancias activas inhibidoras de la LDH, como la urea,

péptidos de molécula pequeña.

El pH bajo también puede inhibir la actividad de la LDH.

5. La LDH es normal en pacientes con uremia, pero la LDH es ↑ después de la diálisis porque la urea es alta en el cuerpo.