¿Cuáles son los síntomas del herpes genital?

La infección por el virus del herpes simple es una enfermedad sistémica. El virus ingresa al cuerpo a través del tracto respiratorio, la cavidad bucal, la mucosa genital o la piel dañada y puede estar presente en la mucosa normal, la sangre, la saliva, los ganglios sensoriales locales y la mayoría de los órganos. El VHS se puede aislar de casi todos los órganos internos y de la epidermis mucosa.

Las infecciones primarias son en su mayoría latentes y la mayoría no presenta síntomas clínicos ni manifestaciones subclínicas. Sólo unas pocas (alrededor del 1-10%) presentan síntomas clínicos. Se observa principalmente en bebés y niños pequeños con función inmune baja o en niños con desnutrición grave u otras infecciones. Es raro en adultos. El virus puede continuar latente en el cuerpo después de que se resuelve la infección primaria. Más de la mitad de las personas normales son portadoras de este virus, y pueden convertirse en fuente de infección a través de las secreciones orales y nasales. Dado que el VHS no produce inmunidad permanente en el cuerpo humano, siempre que la resistencia a las enfermedades del cuerpo disminuye, si sufre alguna enfermedad infecciosa febril, trastorno gastrointestinal, menstruación, embarazo, infección focalizada, fatiga excesiva, cambios en el entorno emocional, etc., latente El VHS en el cuerpo será estimulado y causará enfermedad.

El VHS-1 causa principalmente herpes oral, faringitis, queratoconjuntivitis y encefalitis esporádica, mientras que la infección por VHS-2 causa principalmente herpes genital, pero también ocurre lo contrario clínico.

El periodo de incubación de la infección por VHS es de 1 a 45 días, con una media de 6 días. La infección por HSV-1 se produce principalmente en las uniones piel-mucosas, como las comisuras de la boca, los labios, las fosas nasales, etc. También se puede encontrar en la cara o los labios. Al principio, hay picazón ardor y tensión leve en el área local, acompañada ocasionalmente de neuralgia. El eritema apareció de inmediato y aparecieron grupos de pequeñas pápulas sobre la base del eritema, que pronto se convirtieron en ampollas del tamaño de mijo o frijol mungo con contenido claro. Después de que las ampollas estallaron, apareció una superficie ulcerada, que se secó y formó costras después de unas pocas. días. Después de la curación, pueden quedar ardor y picazón conscientes, síntomas sistémicos ocasionales como fatiga, malestar y fiebre leve, y pigmentación temporal. El curso completo de la enfermedad dura aproximadamente de 1 a 2 semanas.

La infección por VHS-2 se produce principalmente en la zona genital, primero hay una sensación de ardor en la zona afectada y luego aparecen grupos de pequeñas ampollas a base de eritema. Es más común en el prepucio masculino. , glande, surco coronal y pene y ocasionalmente uretra. En las mujeres, es común en los labios, el clítoris, la vagina y el cuello uterino. Las ampollas pueden convertirse gradualmente en pústulas, que se rompen en aproximadamente 6 días para formar erosiones o úlceras superficiales que pueden causar dolor. El paciente puede tener uretritis y dificultad para orinar. La mayoría de las personas experimentan ganglios linfáticos inguinales inflamados y dolorosos, y algunos pacientes pueden experimentar síntomas de fiebre, mialgia y meningitis. Si ocurre en el cuello uterino femenino, se pueden formar úlceras y necrosis, puede aumentar la leucorrea y puede aparecer dolor en la parte baja del abdomen. Se debe prestar atención a la aparición de cáncer de cuello uterino. El herpes genital durante el embarazo puede provocar fácilmente un aborto espontáneo, un parto prematuro o una muerte fetal. También puede infectar fácilmente al recién nacido y causar herpes simple neonatal. Por lo general, se recupera en aproximadamente 3 semanas, pero a menudo reaparece entre 1 y 4 meses después de la erupción inicial. Los síntomas son más leves que la erupción original y el alcance es pequeño, limitado al área genital, a veces solo 1 o 2 herpes, y el curso de la enfermedad es corto, de 8 a 12 días desde el inicio hasta la recuperación. La enfermedad también puede estar asociada con infecciones en áreas distintas a los genitales, como los labios, los brazos y el sistema nervioso central.

En segundo lugar, los signos

En base al eritema se pueden observar grupos de ampollas o pústulas o erosiones y úlceras. Aproximadamente el 90% de las pacientes se acompañan de cervicitis por HSV, enrojecimiento cervical, erosión, úlceras y leucorrea purulenta. Algunos pacientes pueden tener ganglios linfáticos inguinales inflamados y sensibles o temperatura elevada. También pueden aparecer lesiones cutáneas en labios, dedos, nalgas, muslos, brazos e incluso ojos y garganta. Complicado por meningitis o mielitis transversa, generalmente de 3 a 12 días después de que ocurre la erupción, aumenta la presión intracraneal, como rigidez del cuello.

En tercer lugar, infección latente y recurrencia

Los anticuerpos neutralizantes aparecen en la sangre aproximadamente 1 semana después de la infección por HSV, alcanzan un máximo en 3-4 semanas y pueden durar muchos años. Estos anticuerpos pueden eliminar el virus y permitir que el cuerpo se recupere, pero la mayoría de las personas no pueden eliminar completamente el virus y prevenir su recurrencia. El virus existe en el cuerpo huésped durante mucho tiempo en estado latente. El curso clínico del primer episodio agudo de herpes genital en diferentes subtipos de HSV es similar, pero las tasas de recurrencia de las lesiones genitales son diferentes. Aproximadamente el 90% de las infecciones por HSV-2 con un primer episodio recurrirán en 12 meses (un promedio de 4 recurrencias), mientras que sólo el 50% de los pacientes con un primer episodio por HSV-1 tienen recurrencias similares (un promedio de menos de 1). La tasa de recurrencia de la infección genital por HSV-2 varía ampliamente entre individuos y dentro de la vida del mismo paciente. La mayoría de las recaídas ocurren de 5 a 9 veces al año, generalmente dentro de los 65,438+0-4 meses posteriores a la desaparición del herpes primario. Algunos pacientes recaen debido a desencadenantes como fiebre, menstruación, exposición al sol, resfriados y algunas infecciones virales.

Su característica es que cada recurrencia ocurre a menudo en el mismo sitio y puede haber síntomas prodrómicos como picazón local y erupción cutánea antes de la recurrencia.

El herpes genital recurrente tiene un gran impacto psicológico en los pacientes. Actualmente no existe un tratamiento eficaz para prevenir la recurrencia y puede existir el riesgo de inducir una neoplasia maligna genital, lo que tiene un impacto psicológico en los pacientes. La mayoría de los pacientes padecen trastornos psicológicos como depresión y miedo, que inciden directamente en la recurrencia del VHS. Nuestra experiencia en el tratamiento es que siempre que el paciente cumpla con el tratamiento regular, se puede curar.

Cuatro. Virus del herpes simple e infección por VIH:

El VHS suele infectarse con VIH-1 al mismo tiempo, lo que puede favorecer el desarrollo de la enfermedad y provocar infecciones locales y diseminadas graves. Actualmente se cree que el VHS es un factor regulador que activa la replicación del VIH. Heng realizó biopsias de piel en 6 pacientes con SIDA con lesiones cutáneas genitales por VHS y descubrió que tanto los queratinocitos como los macrófagos contenían VIH-1 y VHS-1, lo que permitía que el VIH-1 permaneciera intacto sin unirse a las moléculas CD4. Es contagioso. Además, el HSV-1 puede estimular el VIH-1 latente y aumentar la coinfección y replicación del VIH-1/HSV-1 en los tejidos.

Las células epidérmicas mostraron una degeneración abombada y se observaron cuerpos de inclusión eosinófilos. La epidermis comienza con vesículas multiloculares formadas por degeneración reticular y luego se agregan en vesículas uniloculares. Había edema leve e infiltración de células inflamatorias en la dermis papilar. En casos graves, puede producirse vasculitis grave.

El diagnóstico de la infección por VHS se basa en la historia clínica, las manifestaciones clínicas y los resultados de las pruebas de laboratorio. Los antecedentes de relaciones sexuales sucias, eritema cutáneo y ampollas primarias en el área genital son fáciles de recaer y no son difíciles de diagnosticar. Se puede utilizar para frotis de ampollas, cultivos, vacunas y exámenes de inmunofluorescencia cuando sea necesario. La determinación de anticuerpos inmunes séricos ayuda a diagnosticar y determinar el tipo de virus.

Primero, los métodos citológicos

A través de Wright-Giza (prueba de Tzanck) o tinción de Papanicolaou se pueden detectar inclusiones de células gigantes con características de infección por HSV, pero no se pueden distinguir para infección por HSV. o infección por el virus varicela-zóster, la sensibilidad es sólo del 60% del aislamiento viral.

2. Método de cultivo

Actualmente, aislar el virus a partir del cultivo de tejido en el fondo de la ampolla es un método sensible y específico que tarda entre 5 y 10 días. Debido a sus elevados requisitos técnicos y su elevado precio, no puede utilizarse ampliamente.

En tercer lugar, la detección de anticuerpos

Actualmente, la detección de anticuerpos HSV-2 es la más utilizada. Por ejemplo, gD2 también se puede utilizar como antígeno para detectar anticuerpos contra HSV-2 mediante Western blot. Este método es sensible y puede distinguir HSV-1 y HSV-2.

Cuarto, diagnóstico genético

(1) Detección del virus del herpes simple mediante tipificación por PCR

La PCR es un método de detección rápida con alta sensibilidad y especificidad. se puede detectar si la muestra contiene 1fgHSV-DNA. El diagnóstico de la infección por HSV se está desarrollando rápidamente y las pruebas de tipificación del HSV son una tendencia en desarrollo.

1. Recolección y procesamiento de muestras

(1) Recolección de muestras

① Líquido cefalorraquídeo: tome una muestra de 0,5 ml de líquido cefalorraquídeo directamente del paciente en un recipiente esterilizado. tubo de ensayo. Si el color de la sangre es visible a simple vista, se debe centrifugar el sobrenadante.

Líquido amniótico y suero infantil: Igual que el anterior, se debe evitar la hemólisis.

③Tejido cerebral: muele muestras de autopsia y biopsia de tejido cerebral con 1 ml de tampón de muestra PBS para examinarlas.

④ Secreciones de lesiones oculares y cutáneas: utilice un hisopo de algodón predeterminado (semiseco) para tomar directamente las secreciones del área afectada y colocarlas en 1 ml de tampón de muestra de PBS para realizar la prueba.

⑤ Muestras genitales (cuello uterino, vagina, vulva, pene): primero use un hisopo de algodón esterilizado para limpiar la mucosidad y la suciedad en la superficie del área afectada, luego use un hisopo de algodón previamente empapado para limpiar las secreciones del área afectada y coloque 1 ml de muestra de PBS en tampón.

(2) Procesamiento de muestras

① Pretratamiento: todas las muestras líquidas se pueden convertir directamente en plantillas; se pueden tomar 100 μl de solución de muestra, centrifugar a 5000 r/min × 5 min y eliminar el sobrenadante. y tomar. El precipitado se usó para la preparación de la plantilla.

(2) Preparación de la plantilla: A: Método de digestión y lisis de proteinasa K: agregue 100 μl de solución de digestión y lisis de proteinasa K a la precipitación, hierva a 55 °C durante 10 minutos, centrifugue a 5000 r/min. ×5min y recoger el sobrenadante. b: Método de ebullición: añadir 100 μl de agua destilada al sedimento, oscilar y hervir durante 20 min, centrifugar a 5000 r/min × 5 min y recoger el sobrenadante.

C: Método de lisis de TritonX-100 al 1%: tomar 100 µl de la solución de muestra recolectada, agregar 1 µl de TritonX-100, hervir en agua durante 20 minutos y recoger el sobrenadante. D: Método de lisis de NP-40 al 5%: tomar 100 µl de la solución de muestra recolectada, agregar 5 µl de NP-40, hervir en agua durante 20 minutos y recoger el sobrenadante a 5000 r/min × 5 min. e: Si la muestra está gravemente hemolizada, después del tratamiento de lisis anterior, agregue un volumen igual de fenol-cloroformo para la extracción, use etanol frío para precipitar el ADN y agregue 10 μl de DW para disolverlo para realizar la prueba.

2. Amplificación por PCR

(1) Diseño del cebador. Utilice regiones altamente conservadas de la ADN polimerasa del HSV como secuencias objetivo de detección para garantizar la especificidad. Se diseñaron tres cebadores, un cebador homogéneo * * * aguas arriba DNAP 5 (5' atggtgaaaacatcgaccatgtacgg 3'), dos cebadores específicos aguas abajo DNAP 3-1 (5' cctctgttcgtcgctgtcctcc 3') y DNAP 3-2 (5' cctcttgtcgagccgaaac 3'). El fragmento de ADN de HSV-1469 pb (1981 ~ 2359) y el fragmento de HSV-2391 pb (151 ~ 1953) se pueden amplificar respectivamente: a partir del producto de amplificación de la PCR tipo II, (2) sistema experimental de PCR. Tomar 10 μl de plantilla: dnap 50,5 (0,2 μm ol/l): dnap 3-10,5 μl (0,2 μm ol/l): dnap 3-20,5 μl (0,2 μm ol/l): 4×dntp 8μl (4×200μl ). 10 × tampón 10 μl: DMSO 4 μl; agregar dw 65,5 μl; aceite de parafina 30 μl Hervir en agua (96 ℃ ~ 100 ℃) durante 7 minutos.

Añadir 1μl de TaqDNA polimerasa (2,5U)

72℃ durante 4 minutos

↓

95℃ durante 40 segundos< /p >

↓

65℃ 60 segundos→72℃ 70 segundos

33 ciclos

70℃ 4 minutos

3. Detección y análisis de productos de amplificación

(1) Método de tinción por electroforesis en gel de agarosa: tomar 20 μl de producto de amplificación, agregar 4 μl de tampón de muestra, mezclar bien y colocar en una placa de gel de agarosa al 2%. Electroforesis a 70 V durante 15 a 20 minutos y tinción con bromuro de etidio (EB) durante 5 minutos. Bajo la luz ultravioleta, una o dos bandas rojas brillantes detrás del azul de bromofenol son positivas y la banda HSV-2 es positiva.

(2) Método de zimografía Xhoi: tomar 50 μl del producto de PCR HSV-1, agregar XhoI50U, colocar en gel de agarosa al 3 % a 37 ℃ durante 1 h, electroforesis a 70 V durante 15 ~ 20 min, generar una banda de fragmento de 46 pb (después cebador); en comparación con el producto de PCR normal, la posición electroforética del fragmento grande digerido por XhoI avanza.

(3) Transferencia Southern: se separan 20 μl del producto de PCR mediante electroforesis, se tratan con una solución desnaturalizante durante 60 minutos, luego se tratan con una solución neutralizante durante 90 minutos, se transfieren a una membrana de nitrocelulosa: se hornean a 80 °C durante 2 h , prehibridado a 42°C (en la solución de hibridación) durante 30 minutos, agregar la sonda HSVP3 marcada con 32p e hibridar durante la noche a 42°C y lavar con SDS/PBSpH7.2 al 1% al día siguiente, 42°C; durante 15 min, 0,5% SDS/PBSpH7.2, 42°C durante 15 min. La autorradiografía con casete de película dura de 12 a 15 horas. El resultado es positivo si se revela y negativo si no se revela.

(2) PCR anidada

La reacción en cadena de la polimerasa con cebador anidado (NP-PCR) se basa en dos pares de cebadores, un par se utiliza para amplificar fragmentos de ADN más grandes 'externos' cebadores y un par de cebadores "internos" utilizados para amplificar fragmentos más pequeños del producto amplificado. Estas dos amplificaciones consecutivas pueden mejorar la sensibilidad de la detección por PCR y garantizar la especificidad del producto. Sin embargo, este método no puede clasificar, el 100% puede detectar HSV-1 y el 50% puede detectar HSV-2. Por lo tanto, es necesario mejorar la detección del HSV en aplicaciones clínicas y en investigación básica.

1. Procesamiento de muestras:

(1) La recolección de muestras es la misma que la anterior.

(2) Preparación de ADN: ① Líquido cefalorraquídeo: tomar 65438 ± 000 μl de LCR, hervir en agua durante 65438 ± 05 min, agregar 250 μl de etanol absoluto, colocar a -30 ° C durante 65438 ± 00 min y centrifugar a 10000 g; durante 30 min, retirar Secar el sobrenadante a 30°C y agregar 10 μl DW ② Células de tejido cerebral: tomar el precipitado y agregar 100 μl de lisado de digestión de proteinasa K, tratar a 56°C durante 1 hora y luego hervir en agua durante 10 min; agregar un volumen igual de fenol-cloroformo (V/V), agitar suavemente durante 65438 ± 00 min, centrifugar a 65438 ± 0000 r/min × 65438 ± 00 min; tomar la fase acuosa y agregar 250 μl de DW para disolver.

2. Amplificación por PCR

(1) Diseño del cebador: Seleccione el gen de la glicoproteína D del HSV1 como gen diana de detección.

Secuencias de cebador y sonda para NP-PCR

Cebador externo

bjhsv 1.1 atcacggtagcccggccgtgtgaca 19-43

bjhgv 1.2 cataccggaacgcaccacacaa 218 -239

"Primer interno"

bjhsv 1.3 cataccaccacaccgacga 51-79

bjhsv 1.4 gtagttggtcgttcgcgctgaa 166-188

Investigación

BJHSV-1 protaccaggagagctgtataaaaaggtctgt 96-125

(2) Sistema experimental y procedimiento de PCR: el volumen de reacción es 50 μl; plantilla 10 μl bjhsv 1,10,5 μl (0,2 mmol/l); μL (0,2 mmol/L); 5 μl de tampón 10 ×; 4 μL de 4 × dntp (4 × 200 mmol/L); dw27 μl; ciclo de 72 ℃ 60 s; 20 veces, tomar 1 μl del producto amplificado, agregarlo al sistema de reacción que contiene BJHSV1.3 y BJHSV1.4 para amplificación anidada, desnaturalizar a 95 ℃ durante 2 minutos, los parámetros del ciclo son 95 ℃ 30 s; ; después de 30 ciclos, extender a 72 ℃ durante 5 min;

(3) Análisis de los productos de amplificación:

①Método de tinción por electroforesis en gel de agarosa:

Se mancharon 10 µl de productos de amplificación en gel de agarosa al 2 % sobre el gel , realice una electroforesis a 70 V durante 15 a 20 minutos y tiña con bromuro de etidio durante 5 minutos. Los resultados se observaron bajo luz ultravioleta. Una o dos bandas de color rojo brillante detrás del azul de bromofenol son positivas, el HSV-2 está al frente, el HSV-1 está detrás y ninguna banda es negativa.

②Hibridación Southern:

Después de la separación por electroforesis, se trataron 20 μl de producto de PCR con una solución desnaturalizante durante 60 minutos, luego se trataron con una solución neutralizante durante 90 minutos, se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa y horneado a 80°C durante 2 h, hibridación previa a 42°C durante 30 minutos, agregar sonda HSV marcada con 32P, hibridación a 42°C durante la noche, luego usar SDS/PBS al 1%, pH 7 al día siguiente. Lavar a 42°C para 65438. ±05 minutos, 0,5% SDS/PBSpH7 2. Lavar a 42°C durante 65,438±05 minutos colocar la película en un;

(3)Reacción en cadena de la polimerasa-digestión endonucleasa PCR-EC.

Tiene las características de economía extensiva; no solo puede detectar HSV-1, HSV-2, EBV y CMV al mismo tiempo, sino que el método en sí es rápido, conveniente, no radiativo y Fácilmente aceptado por los laboratorios. Puede detectar HSV1 en 3 UFC con alta sensibilidad y puede detectar resultados positivos de ADN de HSV en 1dCSF de infección del sistema nervioso central, y puede usarse para evaluar el efecto del tratamiento farmacológico. Debido a la variabilidad del virus, las mutaciones del punto de digestión enzimática pueden perderse, lo que da como resultado resultados negativos de la digestión enzimática. Esto puede abordarse mediante sondas de tipo específico o análisis de secuencia.

1. Procesamiento de muestras

(1) Recolección de muestras, el método es el mismo que el anterior.

(2) Preparación de la plantilla de ADN: tomar 200 μl de cada muestra, agregar 200 μg/ml de proteinasa K y actuar a 56°C durante 65438 ± 0 h;

Agregar un volumen igual de fenol-cloroformo, agitar 65438±00 minutos, centrifugar 65438±0000 rpm × 5 minutos; añadir 500 µl (2,5 veces el volumen) de etanol absoluto a la fase acuosa, precipitar el ADN a -20 °C durante la noche, centrifugar 15000 r/min × 5 minutos, aspirar el líquido, secar a 30°C, añadir 25 µl de agua destilada para disolverlo y esperar la inspección.

2. Diseño de imprimación:

P1, 5' cgactttgccagcctgttacc 3'

P2, 5'agtccgtgtccccgtagatg 3'

(1 ) Sistema experimental de PCR;

El volumen de reacción es 100 μl; plantilla 10 μl; P10,5 μl (10 pmol/L), p20,5 μL (10 pmol/L); ); 10 µl de tampón 10X, 5 µl de DMSD y 65 µl de DW. Los parámetros del ciclo son 94 °C, 60 s; 72 °C, 60 s; tiempo.

(2) Detección y digestión enzimática de productos de amplificación.

① Identificación por electroforesis: tome 10 μl de producto lpcr, agregue 4 μl de tampón de muestra, agregue una placa de gel de agarosa al 2%, electroforesis de 70 V (5-20 min), tinción EB durante 5 min, observe bajo luz UV, determine preliminarmente el tamaño. del producto amplificado.

②Análisis de digestión enzimática: coloque 20 μl de producto lpcr en dos tubos Eppendorf, agregue 50 μl de etanol absoluto, precipite el ADN a -20 °C y luego disuélvalo en 20 μl de tampón de reacción Smal y BamHI respectivamente, agregue SmaI o BamHI50U en el tubo Eppendorf correspondiente e incubar a 37°C durante 65438±0h.

③ En el segundo paso de la tipificación por electroforesis, tome 10 μl de digestión enzimática lpcr y agregue 4 μl de tampón de muestra, agréguelo a un gel de agarosa al 2%, electroforesis a 70 V, tinción con EB durante 5 minutos después de 15 a 20 minutos y al mismo tiempo Comparación de productos de PCR no digeridos agregados. Observados bajo luz ultravioleta, los resultados son los siguientes:

Resultados de detección de cuatro virus mediante el método PCR-EC

Fragmento objetivo tipo virus SmaIBamHI

HSV 1518pb 476 BP +42pb

HSV2518bp―225+293pb

ebv 524 BP 100 BP+424 BP 277 BP+247 BP

CMV589bp se puede distinguir en el primer paso De electroforesis, no es necesario realizar digestión enzimática.

(4) Utilice RT-PCR para detectar el virus del herpes simple.

La reacción en cadena de la polimerasa de ARN (ARN-PCR) no solo puede diagnosticar la infección por VHS, sino que también ayuda a estudiar más a fondo el mecanismo de infección latente del VHS.

La RT-PCR utiliza ARN como plantilla, genera ADNc mediante una reacción de transcripción inversa y luego utiliza ADNc como plantilla para la amplificación por PCR para lograr el propósito de detección. Por lo tanto, la ARN-PCR también puede denominarse RT-PCR.

1. Procesamiento de la muestra:

Extraiga el ARN total de las células del bloque de tejido, tome 100 mg de muestra de tejido, agregue 1 ml de solución desnaturalizante de tiocianato de guanidinio y muela uniformemente en un homogeneizador a Transfiera a temperatura ambiente a un tubo Eppendorf de 2,5 ml. Añadir 0,1 ml de NaAc 3 mol/L (pH 4,0), 1 ml de fenol saturado con agua y 0,2 ml de cloroformo-alcohol isoamílico en secuencia, mezclar uniformemente, agitar vigorosamente durante 10 s y colocar en un baño de hielo durante 15 min. Centrifugar a 10.000 g durante 20 minutos a 4°C, tomar la fase acuosa superior (ADN superior, ADN inferior y proteína desnaturalizada), agregar un volumen igual de isopropanol y colocar a -20°C durante 1 hora para precipitar el ARN. Centrifugar a 15000 r/min x 10 min, desechar el sobrenadante, disolver el ARN nuevamente con 0,3 ml de solución desnaturalizante de tiocianato de guanidinio, agregar 0,3 ml de alcohol isopropílico para precipitar y precipitar a -20 °C durante 1 hora.

Centrifugar a 15000 rpm × 10 minutos. Agregue 10 l de tampón LTE (pH 7,4) para disolver y almacenar a baja temperatura para su uso posterior. Disolver en baño de hielo antes de usar.

2. Amplificación por PCR:

(1) Diseño del cebador: Seleccionar el gen HSV-1 ICPO (etapa muy temprana) como gen objetivo de detección. Se diseñaron dos cebadores.

p 15 ' ggatctcacgtggttaccccgcggtct 3 '

p25′aagcttccggggggggcg 3′ puede amplificar una secuencia de 266 pb en ICPO.

1 sonda: 5"ccggctggagccgcaccctgct3".

(2) Sistema experimental de PCR: el volumen total de reacción es de 50 μl, la plantilla es de 10 μl (0,25-1,0 μg), p 11 μl (20 pmol/l); p 21 μl (20 pmol/l); 4 x dntp 4 µl (200 µm ol/l); 5 µl de tampón 10x; 2 µl de AMV (transcriptasa inversa) (50 U 26 µl); °C durante 50 segundos, desnaturalización a 60°C durante 60 segundos, 72 desnaturalización a ℃ durante 60 segundos y extensión a 72℃ durante 5 minutos después de 40 ciclos.

3. Identificación de los productos de amplificación:

(1) Método de tinción por electroforesis en gel de agarosa: tomar 10 μl de producto de amplificación por PCR y agregar 4 μl de tampón de muestra, mezclar bien y agregar. Placa de gel de agarosa al 2%, electroforesis a 70 V durante 15-20 minutos, tinción EB durante 5 minutos. Se observaron bandas amplificadas bajo luz ultravioleta.

(2) Hibridación por transferencia Southern: utilice una sonda específica marcada con 32P para detectar el producto de la PCR; el método es el mismo que el anterior.

En resumen, en el diagnóstico clínico de enfermedades infecciosas por VHS, la PCR puede amplificar y detectar fragmentos de ADN diana específicos de provirus o VHS con una latencia baja, y su sensibilidad es mucho mayor que la de las sondas de ADN. en suero se pueden detectar antes de que aparezcan. Por tanto, la PCR tiene amplias perspectivas ya sea como método de investigación básica o como método de diagnóstico clínico.

5. Diagnóstico patológico

Edema intracelular, ampollas en la capa basal, infiltración de células gigantes multinucleadas alrededor de la lesión, especialmente la mitad de la lesión está llena de leucocitos y linfocitos multinucleados.

1. Hormona de crecimiento primaria

(1) Período de incubación: de 2 a 7 días, generalmente de 3 a 5 días.

(2) Sitio inductor: en los hombres, ocurre principalmente en el glande, surco coronal, uretra, pene y escroto. Las mujeres son propensas a tener vulva, vagina y cuello uterino. Ambos sexos se pueden observar en la zona perianal, muslos y nalgas.

(3) La forma y evolución de las lesiones cutáneas: La zona afectada primero presenta sensación de ardor, y luego aparecen varios cúmulos de erupciones maculopapulares rojas, que pronto se convierten en pequeñas ampollas. El líquido de la ampolla es claro al principio, pero gradualmente se vuelve purulento. Las ampollas pueden reventar fácilmente y formar erosiones o úlceras superficiales, que pueden provocar un dolor importante. Después de eso, la costra sana y el curso de la enfermedad es de aproximadamente 2 a 4 semanas.

(4) Síntomas sistémicos: puede haber síntomas sistémicos antes o durante el inicio, como fiebre, dolor de cabeza, malestar general, rigidez en el cuello, sensación anormal en los 2-4 segmentos sacros o dificultad para orinar y aumento leucorrea. Casi todos los pacientes pueden tener linfadenopatía inguinal y dolor a la palpación.

2. Hormona del crecimiento recurrente

Ocurre aproximadamente de 1 a 4 meses después de la recuperación de la hormona del crecimiento primaria. Casi el 60% de los pacientes recaen dentro de 1 año después de la primera infección por HSV-2, con 4 a 6 recaídas dentro de 1 año, y luego el número de recaídas disminuye. Eves et al encontraron una tasa de recurrencia del 14% para la infección por HSV-1 y del 60% para la infección por HSV-2.

Los pacientes con GH recurrente pueden tener los factores irritantes o síntomas prodrómicos mencionados anteriormente. Los síntomas sistémicos son leves, el sitio de recurrencia está en el mismo sitio, el curso de la enfermedad es corto y las lesiones cutáneas. Desaparece después de unos 10 días. Debido a que las lesiones recurren y son difíciles de controlar, los pacientes son propensos a sufrir carga mental, disfunción sexual e incluso depresión. Pero su daño es muy similar al original.

3. Hormona de crecimiento especial

(1) GH: Esta enfermedad ocupa el segundo lugar después de la proctitis causada por gonococos. Se detectó HSV-2 en 62 hombres homosexuales con síntomas anorrectales pero pruebas gonocócicas negativas. Las manifestaciones clínicas son principalmente dolor anorrectal intenso y otros síntomas incluyen estreñimiento, secreción anal, diarrea aguda y fiebre. Algunos pacientes tienen ampollas o úlceras alrededor del ano.

(2) GH en mujeres embarazadas y recién nacidos: Las mujeres embarazadas que padezcan GH tendrán graves consecuencias. Para las pacientes embarazadas con GH que son portadoras del HSV-2, lo más importante es infectar al recién nacido. Cuando el HSV-2 está presente en el canal del parto, entre el 40% y el 60% de los recién nacidos pueden infectarse y una infección grave puede provocar la muerte.

Al principio del embarazo, las mujeres embarazadas con hormona del crecimiento pueden afectar al feto, provocando un aborto espontáneo o una muerte fetal. La infección congénita en los recién nacidos puede provocar herpes zoster al nacer, convulsiones, tendencia hemorrágica y hepatoesplenomegalia. Por ejemplo, cuando la infección retrógrada se produce por infección del canal del parto o rotura prematura de membranas, la paciente puede no presentar síntomas clínicos durante días o semanas después del nacimiento, pero puede mostrar pobreza y excitación en la etapa inicial, y luego desarrollar viremia o encefalitis herpética. En casos graves, puede producirse infección diseminada por VHS, acompañada de fiebre alta, disnea, hemorragia y lesiones del sistema nervioso central, y el pronóstico es malo.

Por lo tanto, si el tiempo lo permite, las mujeres embarazadas a término con GH deben someterse a muestras vaginales y cervicales cada semana para detectar infección viral. Si la citología o el cultivo viral son positivos y la membrana amniótica aún está intacta, o menos de 6 horas después de la rotura, se recomienda la cesárea para evitar la infección neonatal por VHS causada por el parto vaginal.

Infección por HSV-2 y cáncer de cuello uterino: Existe evidencia de que la infección genital por HSV-2 puede estar asociada con el desarrollo de cáncer de cuello uterino. El examen seroepidemiológico mostró que los anticuerpos anti-HSV-2 en el suero de las pacientes con cáncer de cuello uterino eran significativamente mayores que los de las mujeres del grupo de control. Namias et al. encontraron que la incidencia de displasia cervical en pacientes con GH era 2 veces mayor que la del grupo de control, y la incidencia de carcinoma in situ era 8 veces mayor que la del grupo de control. Estudios recientes han demostrado que la tasa positiva del antígeno HSV-2 en las células exfoliadas del cuello uterino de mujeres con cáncer de cuello uterino invasivo y lesiones precancerosas es significativamente mayor que la del grupo de control. Este antígeno HSV-2 se encuentra en el citoplasma de las células tumorales, lo que indica que es un antígeno viral expresado por células tumorales. Mediante tinción de inmunofluorescencia indirecta, se descubrió que el antígeno HSV-2 se puede encontrar en tejidos de biopsia de pacientes con displasia cervical de alto grado, carcinoma in situ y carcinoma de células escamosas. El ARNm específico de HSV-2 se puede encontrar en el 67% de los cánceres de cuello uterino y tejidos precancerosos mediante hibridación in situ de ADN-ARN. Frenkel et al. detectaron ADN de HSV-2 en tejido de cáncer de cuello uterino. Además, los autores aislaron HSV-2 de tejido de cáncer de cuello uterino irradiado después de la resección quirúrgica.

La infección por VHS-2 y la infección por VIH, al igual que otras enfermedades ulcerosas genitales, la hormona del crecimiento aumenta el riesgo de infección por VIH. La infección por HSV es un cofactor de la infección por VIH. Entre las personas que viven con el VIH, especialmente aquellas con VIH, la tasa de infección por HSV-2 es mayor y las complicaciones de la GH son muchas y graves. Las cepas del virus del herpes simple resistentes al aciclovir son más comunes en personas con SIDA.

Basándose en el historial médico, los síntomas y las manifestaciones cutáneas o mucosas, generalmente no es difícil realizar un diagnóstico. Cuando sea necesario, se pueden realizar pruebas de laboratorio para identificar el patógeno.

La patogénesis y diferenciación de síndromes de la medicina tradicional china son causadas principalmente por la acumulación de calor interno, venenos externos, combinación de calor y veneno, y humedad y calor en el meridiano del hígado y la vesícula biliar o porque la piel; Si está débil y los venenos malignos permanecen en la piel, se producirá un calor.

Diferenciación del síndrome de la medicina tradicional china

1. Tipo húmedo-calor

Síntomas principales: ampollas, erosión, picor y dolor en la zona afectada, estreñimiento, corta duración. y orina roja. Lengua roja, saburra amarilla y grasosa, pulso resbaladizo.

Diferenciación de síndromes: humedad y calor, mal venenoso exógeno.

2. Tipo de deficiencia hepática y renal

Síntomas principales: síntomas recurrentes, que incluyen inquietud, insomnio, dolor de espalda, mareos, pérdida de apetito, sequedad de boca y garganta, etc. Lengua pálida, pulso pesado y fino.

Diferenciación de síndromes: elimina el calor y seca la humedad, nutre el hígado y los riñones.