Pasos experimentales para preparar un medio de cultivo de peptona con extracto de carne

0,5g pasta de vacuno

1g peptona

0,5g cloruro sódico

2g agar

100 ml de agua destilada

Valor de PH 7,0~7,2

1,05kg/cm2 Esterilizado durante 22 minutos.

Pasos breves

Añadir 100ml de agua al vaso, añadir la pasta de ternera, la peptona y el cloruro sódico, marcar el vaso con un crayón y calentarlo al fuego. Una vez disuelto el contenido del vaso, añadir el agar, revolviendo constantemente para evitar que se pegue al fondo. Después de que el agar se haya disuelto por completo, compense la pérdida de agua, ajuste el valor del pH a 7,2 ~ 7,6 con ácido clorhídrico al 10 % o hidróxido de sodio al 10 %, distribúyalo en cada tubo de ensayo, agregue tapones de algodón y esterilice con alta presión. vapor: 1,05 kg por centímetro cuadrado 121 grados centígrados.

Pasos específicos

1. Pesar la pasta de carne, la peptona y el NaCl según la proporción de la fórmula del medio de cultivo y colocarlos en un vaso de precipitados. La salsa de carne generalmente se prepara tomando una varilla de vidrio, pesándola en un vaso pequeño o en un cristal de reloj, derritiéndola con agua caliente y vertiéndola en el vaso. También puedes colocarlo sobre papel de pesar y ponerlo directamente en el agua después de pesarlo. En este momento, caliéntalo un poco y la salsa de carne se separará del papel de pesar, y luego retira el papel inmediatamente. La peptona absorbe fácilmente la humedad y debe pesarse rápidamente. Además, al pesar los medicamentos, tenga cuidado de no mezclarlos. Utilice una cuchara de cuerno para un tipo de medicamento, o después de pesar un tipo de medicamento, lávela y séquela antes de pesar otro medicamento. No le pongas la tapa equivocada a la botella.

2. Disolver en un vaso de precipitados, añadir menos agua de la necesaria, remover uniformemente con una varilla de vidrio y luego calentar sobre una malla de amianto para que se disuelva. Una vez que el medicamento esté completamente disuelto, agregue agua hasta alcanzar el volumen total requerido. Si prepara un medio sólido, agregue una cantidad pesada de agar al fármaco disuelto y caliéntelo para derretirlo. Durante el proceso de fusión del agar, se requiere agitación constante para evitar que el vaso de precipitados se rompa en el fondo de la pasta de agar. Finalmente, recupere el agua perdida.

3. Ajustar el pH Antes de ajustar el pH, utilice papel de prueba de pH de precisión para medir el valor de pH original del medio de cultivo. Si el pH es ácido, use un gotero para agregar 1 mol/L de NaOH gota a gota al medio de cultivo mientras agita, y use papel de prueba de pH para probar el valor del pH en cualquier momento hasta que el pH alcance 7,6. De lo contrario, utilice 1 mol/L de HCl para realizar el ajuste. Tenga cuidado de no ajustar demasiado el pH, de lo contrario afectará la concentración de iones en el medio de cultivo.

Para algunos microorganismos que requieren un valor de pH más preciso, se puede utilizar un acidómetro para ajustar el valor de pH (consulte las instrucciones de uso correspondientes).

4. Filtrar con papel de filtro o gasa multicapa en caliente para facilitar la observación de los resultados. Si no hay requisitos especiales, este paso generalmente se puede omitir (no se requiere filtrado en este experimento).

5. Dispensación Según los requisitos experimentales, el medio de cultivo preparado se puede distribuir en tubos de ensayo o matraces Erlenmeyer. El equipo del subpaquete se muestra en la Figura V-1.

Tenga cuidado de no tocar la boquilla o el medio de cultivo en la boca del frasco durante el proceso de dispensación para evitar contaminar el tapón de algodón y provocar contaminación.

(1) La altura adecuada del envase de líquido es aproximadamente 1/4 de la altura del tubo de ensayo.

(2) Divida el sólido en tubos de ensayo separados y el volumen de carga no deberá exceder 1/5 de la altura del tubo. Esterilice los tubos de ensayo y forme pendientes, como se muestra en la Figura V-2. . El volumen del matraz no debe exceder la mitad del volumen del matraz.

(3) Generalmente, la altura de los tubos de ensayo de envases semisólidos debe ser de 1/3 y colocarse verticalmente después de la esterilización.

6. Después de dispensar el medio de cultivo tapado, coloque un tapón de algodón en la boca del tubo de ensayo o matraz triangular para evitar que microorganismos externos entren en el medio de cultivo y causen contaminación, y para garantizar un buen rendimiento de ventilación ( para hacer tapones de algodón (el método se adjunta al final de este experimento).

7. Después de vendar y bloquear, ate firmemente todos los tubos de ensayo con una cuerda de cáñamo, luego envuelva una capa de papel kraft sobre el tapón de algodón para evitar que el agua de condensación moje el tapón de algodón durante la esterilización y luego ate. apriételo con una cuerda de cáñamo. Marque los medios con un marcador con el nombre, grupo y fecha. Después de tapar el matraz Erlenmeyer, se envuelve en papel kraft y se ata con una cuerda de cáñamo en forma de nudo corredizo, que se puede desatar fácilmente durante el uso. Del mismo modo, el nombre, grupo y fecha del medio se indican mediante marcadores.

8. Esterilización: Esterilice el medio de cultivo a 65438±0,05kg/cm² (65438±0,5lbs/pulgada cuadrada) y 65438±0,265438±0,3℃ durante 20 minutos. Si no se puede desinfectar a tiempo debido a circunstancias especiales, se debe guardar temporalmente en el frigorífico.

9. Coloque el medio de cultivo del tubo de ensayo esterilizado en la pendiente para que se enfríe a aproximadamente 50 °C y coloque el extremo del tapón de algodón del tubo de ensayo en la varilla de vidrio.

La longitud del bisel no debe exceder la mitad de la longitud total del tubo de ensayo.

10. Inspección de esterilidad: Colocar el medio de cultivo esterilizado en un invernadero a 37°C durante 24-48 horas para comprobar si la esterilización está completa.