¿Cómo ve las curvas de reacción en los experimentos con reactivos bioquímicos? Sencillo pero detallado. Gracias.

(1) Según la estructura del dispositivo de reacción, los analizadores bioquímicos automáticos se dividen principalmente en dos categorías: sistema de flujo y sistema discreto.

1. El patrón de flujo se refiere a la reacción química de las muestras que se van a analizar con el mismo elemento de prueba mezclado con reactivos completados en el mismo proceso de flujo de tubería. Esta fue la primera generación de analizadores bioquímicos automatizados.

2. Discreto significa que la reacción química de cada muestra a analizar y el reactivo mezclado se completa en su propio vaso de reacción. Hay varias sucursales.

(1)Analizador bioquímico automático discreto típico. Este instrumento es el más utilizado.

(2) Analizador bioquímico centrífugo completamente automático, cada muestra a analizar se mezcla con reactivos en su propio tanque de reacción bajo la acción de la fuerza centrífuga para completar la reacción y medición química. Dado que la mezcla, la reacción y la detección se completan casi simultáneamente, su eficiencia de análisis es alta.

3. El analizador bioquímico totalmente automático tipo bolsa utiliza una bolsa de reactivos para reemplazar la copa de reacción y la cubeta. Cada muestra a analizar reacciona y se mide en su propia bolsa de reactivos.

4. El analizador bioquímico personalizado de reactivos de fase sólida (también conocido como analizador automático de fórmula química seca) fija los reactivos en un soporte como una película o papel de filtro y deja caer cada muestra que se va a analizar en el Prueba correspondiente Las reacciones y los ensayos se realizaron en tiras de papel. La ventaja es que es rápido de operar y fácil de transportar.

(2) Estructura básica de un analizador bioquímico automático discreto típico

1. Sistema de muestra

Las muestras incluyen calibradores, materiales de control de calidad y muestras de pacientes. El sistema suele constar de dispositivos de carga, transporte y distribución de muestras.

Los equipos comunes de carga y transporte de muestras son:

(1) Bandeja de muestras, es decir, hay uno o más círculos dentro y fuera del plato giratorio donde se coloca la muestra, colocada sola o con el plato giratorio de reactivos o el plato giratorio de reacción anidado y girado con el brazo de distribución de muestras durante el funcionamiento. Algunos utilizan bandejas de muestra reemplazables, que se dividen en áreas de trabajo y áreas de repuesto, en las que se colocan múltiples sectores de muestra en forma de arco como mesas de transferencia, y los instrumentos se colocan y reemplazan automáticamente durante la medición. Todos estos son importantes para el recipiente de muestra o la muestra. vaso colocado en la bandeja de muestra Existen ciertos requisitos para la altura, el diámetro y la profundidad de los tubos de ensayo. Algunos requieren vasos de muestra especiales y otros pueden usar directamente tubos de ensayo para recolección de sangre. El número de bandejas de muestras y el número de calibradores, controles, muestras de rutina y muestras de emergencia suelen ser fijos. Estos deben elegirse en función de las necesidades del trabajo.

(2) Los racks para muestreo en cinta o vía son discontinuos, normalmente 65.438+00 racks. La cinta transportadora es impulsada por un motor paso a paso, la rejilla avanza en secuencia y luego la rejilla se mueve lateralmente a una posición fija una por una, y el brazo de distribución de muestras toma muestras de la muestra.

(3) El tubo de ensayo de inyección de cadena se instala fijamente en la cadena de transmisión circulante y se mueve horizontalmente a la posición de muestreo, y luego algunos instrumentos pueden limpiar el tubo de ensayo.

La mayoría de los dispositivos dosificadores y de muestreo constan de una jeringa, un motor paso a paso o bomba de transferencia, un brazo de muestreo y una sonda de muestra. ①Unidad de viológeno. Según el diámetro de la jeringa y la distancia recorrida por el pistón, se aspira una cantidad medida de muestra o reactivo. Su precisión determina la precisión de la adición de muestra, que generalmente puede tener una precisión de 1 microlitro. Cuando una jeringa tiene una fuga, lo primero que hay que considerar es si la sonda está obstruida y lo segundo es el desgaste del pistón de la jeringa. Algunos sistemas de dosificación utilizan bombas de jeringa volumétricas y motores paso a paso de pulsos controlados numéricamente para mejorar la precisión. (2) La sonda de muestra se conecta al brazo de muestra y la muestra se extrae directamente. Las sondas están equipadas con un sensor de nivel de líquido para evitar daños a la sonda y reducir la contaminación por transporte. Algunos están equipados con sistemas de alarma de detección de bloqueos. Cuando se bloquean coágulos de sangre y otras sustancias en la muestra de la sonda, el instrumento emitirá una alarma automáticamente para lavar la sonda, omitir la muestra actual y agregar la muestra a la siguiente. Algunos también cuentan con dispositivos anticolisión inteligentes. Cuando encuentra un obstáculo, la sonda deja de moverse inmediatamente y emite una alarma. Aun así, sigue siendo un eslabón débil en las operaciones irregulares. Para proteger la sonda, las especificaciones, ubicación, nivel de líquido y otras condiciones de configuración del recipiente de muestra no deben cambiarse a voluntad, a menos que deban configurarse con anticipación de acuerdo con la altura del recipiente de muestra y el nivel mínimo de líquido. . En algunos instrumentos, el muestreador y el dosificador se combinan para completar la adición de muestra y reactivo o diluyente al mismo tiempo. ③Brazo de muestreo. Conecte la sonda y muévala entre el vaso de muestra (botella de reactivo) y el vaso de reacción para completar el muestreo y la adición de muestra (adición de reactivo). Su modo de movimiento tiene cierta relación con la eficiencia laboral y la vida útil del instrumento. (4) Las válvulas se utilizan para determinar la dirección del flujo de líquido. ⑤Sistema de dilución. Predilución, posdilución o doble dilución de muestras, dilución en serie de solución madre estándar, etc. Diferentes instrumentos tienen diferentes métodos de dilución, así que preste atención a la identificación.

El sistema de reactivos también tiene una función de dilución:

2. El sistema de reactivos generalmente consta de dispositivos de almacenamiento, distribución y adición de líquidos.

(1) El compartimento de reactivos suele combinarse con el plato giratorio de reactivos. La mayoría de los instrumentos configuran el compartimento de reactivos como una sala de almacenamiento en frío para mejorar la estabilidad de los reactivos en línea.

(2) Unidad de asignación. Similar al sistema de ejemplo. La sonda de reactivo a menudo puede precalentar el reactivo. La cantidad inicial de la sonda de reactivo 2 (R2) en el sistema de reactivo dual debe ser menor para igualar los reactivos con diferentes proporciones de R1/R2.

(3) Frasco de reactivo. Viene en diferentes formas y tamaños. Por ejemplo, los instrumentos COBAS Mira PLUS están disponibles en 4, 10, 15, 35 ML y otras especificaciones, y el fondo de la botella es cóncavo. Los instrumentos Olympus AU600 están disponibles en 30, 60 ML y los instrumentos Hitachi 7060 están disponibles en 20, 50. , 100ML y otras especificaciones. El volumen muerto restante y la frecuencia de reemplazo de la botella de reactivo se deben considerar y seleccionar de manera razonable en función de la carga de trabajo y las especificaciones del reactivo. El casete especialmente diseñado es de tamaño pequeño, antievaporación y fácil de almacenar.

(4) Los reactivos de soporte suelen tener códigos de barras y el instrumento está equipado con un sistema de inspección de códigos de barras, que puede verificar el tipo, número de lote, inventario, fecha de vencimiento, curva de calibración, etc. del reactivo. como BECKMANCX7.

(5) El sistema automático de apertura y cierre de las tapas de las botellas de reactivos favorece más el almacenamiento de reactivos. Algunos instrumentos se pueden agregar y reemplazar durante el funcionamiento, mientras que otros deben pausarse.

3. Sistema de lectura de códigos de barras

Generalmente consta de sistema de escaneo, modelado de señales y decodificador. El sistema de escaneo utiliza una fuente de luz para escanear símbolos de códigos de barras con barras negras y espacios en blanco. Dado que la luz reflejada por las barras y los espacios es diferente, la duración de la luz reflejada de los símbolos de barras con diferentes anchos es diferente, lo que da como resultado una luz reflejada de diferentes intensidades, que es recibida por el elemento de conversión fotoeléctrica y convertida en señales eléctricas de la intensidad correspondiente. Finalmente, es procesada mediante conformación de señal e interpretada por el decodificador. El sistema identifica automáticamente gradillas de muestras y números de muestras, reactivos, calibradores y sus números de lote, fechas de vencimiento y algunos también pueden identificar curvas de calibración y otra información.

Los tipos de códigos de barras más utilizados en los laboratorios incluyen CÓDIGO 39, CÓDIGO 128, 2 DE 5 ESTÁNDAR, INTERLEAVED2OF 5, etc. Para editar códigos de barras de muestra, se requiere un dispositivo de entrada de códigos de barras y un sistema de lectura de códigos de barras debe coincidir con el código de barras. Hay un sistema automatizado de preparación de pasta con código de barras y dosificación de tubos.

4. Sistema de reacción

(1) La placa de reacción está equipada con una serie de cubetas de reacción, la mayoría de las cuales tienen forma de platos giratorios. Durante el proceso de medición de la reacción, gira entre el brazo de adición de muestra, el brazo de adición de líquido, la varilla agitadora, el camino de luz y el dispositivo de limpieza de acuerdo con un programa fijo. Algunos instrumentos se introducen en la cubeta para realizar colorimetría después de completar la reacción en la cubeta. Ahora es más común realizar reacciones y detección en cubetas, lo que resulta más eficiente y especialmente adecuado para la monitorización continua. Los vasos colorimétricos están hechos principalmente de vidrio duro de temporada, vidrio duro, plástico acrílico que no absorbe los rayos ultravioleta, etc. , la vida útil es diferente. Las cubetas de la serie DIMENSION se fabrican automáticamente en la máquina, se sellan automáticamente, no se limpian y no contaminan. Los tipos de celdas de flujo se utilizan principalmente en analizadores pequeños. El volumen es generalmente de decenas de microlitros, pero la tubería de extracción de líquido ocupa una gran cantidad de líquido de reacción y el uso continuo de múltiples muestras aumenta la posibilidad de contaminación cruzada.

Bomba peristáltica. El analizador bioquímico semiautomático requiere una bomba peristáltica para bombear la solución de reacción a la celda colorimétrica de flujo para su medición. Las bombas peristálticas deben calibrarse periódicamente, es decir, succionando una cierta cantidad de agua para comprobar si la cantidad de líquido aspirado por la bomba es precisa. A menudo se proporciona la calibración de la bomba.

(2) La unidad de mezcla adopta una varilla agitadora giratoria de cabezales múltiples (sistema de mezcla de doble lavado y doble cabezal). Las barras agitadoras suelen estar recubiertas con una capa antiadherente de teflón para evitar que los líquidos se peguen.

(3) Dispositivo de control de temperatura El analizador bioquímico mantiene la temperatura de incubación regulada y constante a través de un dispositivo de control de temperatura constante, que también está controlado por una computadora. La fluctuación ideal de la temperatura de incubación debe ser inferior a 0,65438 ± 0 ℃. Hay tres formas de mantener la temperatura constante. ①Temperatura constante del baño de aire: hay aire entre la cubeta y el calentador. Las características del baño de aire son que es conveniente, rápido y no requiere materiales especiales, pero su estabilidad y uniformidad son ligeramente peores que las del baño de agua. Los sistemas COBAS y 0LYMPUS AU2700 de Roche utilizan el modo de temperatura constante en baño de aire. ②Circulación del baño de agua: es decir, llenar agua alrededor de la cubeta y el calentador controla la temperatura del agua. La característica del baño de agua a temperatura constante es la temperatura constante, pero se necesitan conservantes especiales para garantizar la limpieza de la calidad del agua y el agua en circulación debe reemplazarse periódicamente. El analizador bioquímico del sistema Hitachi adopta un dispositivo de temperatura constante con circulación por baño de agua.

⑧ Tipo de calentamiento indirecto con circulación de líquido a temperatura constante: el principio estructural es que un líquido especial a temperatura constante (inodoro, no contaminante, inerte, no evaporativo) fluye alrededor de la cubeta. Hay una ranura de aire muy pequeña entre la cubeta y el líquido a temperatura constante. El líquido a temperatura constante alcanza una temperatura constante calentando el aire en la ranura. Por lo tanto, su estabilidad de temperatura es mejor que la del tipo seco. Tipo baño de circulación, no requiere mantenimiento especial.

5. Sistema de limpieza

La sonda y la varilla agitadora se limpian automáticamente mediante flujo rápido. El dispositivo de limpieza suele constar de una aguja de aspiración, una aguja de drenaje y un cepillo de limpieza. El flujo de trabajo de limpieza consiste en absorber la reacción, inhalar el agua pura inyectada, absorber y secar. Hay dos tipos de líquidos de limpieza: alcalinos y ácidos. En términos generales, después de succionar la solución de reacción, limpie el instrumento primero con una solución alcalina, luego con una solución ácida y finalmente con agua desionizada tres veces. La función del cepillo de limpieza es succionar el agua que cuelga de la pared del vaso. Hay un dispositivo de presión negativa dentro del cuerpo del cepillo. Preste atención a si el cepillo de limpieza se desgasta durante el uso.

Vale la pena señalar que los experimentos en los que el lavado convencional no puede eliminar los restos requieren un tratamiento especial para reducir la contaminación cruzada o la contaminación sobrante. Por ejemplo, los colatos en los reactivos para la determinación del colesterol interfieren con la determinación de los ácidos biliares totales en suero. En el proceso de eliminación de la contaminación cruzada, se puede ingresar un programa que indique que los ácidos biliares totales no se midan en las cubetas utilizadas para analizar el colesterol. Si esto no se puede evitar, el instrumento limpiará específicamente la cubeta para evitar la contaminación cruzada.

Controle automáticamente la temperatura del agua de lavado para que esté cerca de la temperatura del tanque de reacción a temperatura constante para garantizar la temperatura constante del sistema de reacción y aumentar la detergencia. La limpieza específica después de las mediciones de emergencia parece ser más eficiente y rentable que un programa fijo de limpieza integral. El consumo de agua varía mucho de un instrumento a otro.

Sistemas como el analizador bioquímico totalmente automático Abbott AEROSET tienen funciones de limpieza inteligentes y selección óptima de secuencia de muestras (OSS). Es decir, el instrumento cambia automáticamente la secuencia de detección según la combinación de elementos de contaminación cruzada entre reactivos o muestras para evitar que los elementos de análisis se afecten mutuamente; cuando es inevitable, se utiliza un agente de limpieza especial para la limpieza automática;

6. Sistema colorimétrico

(1) La fuente de luz es principalmente una lámpara halógena y la longitud de onda de trabajo es de 325 ~ 800 nm. Las lámparas halógenas tienen una vida corta, generalmente entre 1.000 y 500 horas. Cuando la intensidad luminosa de la lámpara no es suficiente, el instrumento emitirá una alarma automáticamente y deberá reemplazarse a tiempo. Algunos analizadores bioquímicos utilizan lámparas de xenón de larga duración, que pueden funcionar durante varios años en modo de espera las 24 horas y la longitud de onda de trabajo es de 285-750 nm.

(2) Taza colorimétrica La taza colorimétrica del analizador bioquímico automático también es una taza de reacción. El diámetro óptico de las cubetas oscila entre 0,5 cm y 0,7 cm y suelen estar fabricadas de plástico de temporada o de alta calidad. Para reactivos con diámetros ópticos más pequeños, cuando el diámetro óptico de la cubeta es inferior a 1 cm, algunos instrumentos pueden calibrarse automáticamente a 1 cm. El dispositivo de lavado automático de la copa colorimétrica del analizador bioquímico enjuaga y seca automáticamente la copa colorimétrica repetidamente después de que se completa el análisis colorimétrico del instrumento. La copa colorimétrica continúa reciclándose después de que se califica la detección automática. Las cubetas no calificadas deben reemplazarse a tiempo. Si se utilizan cubetas estacionales, las cubetas deben inspeccionarse y limpiarse periódicamente.

(3) Monocromador y detector Varios analizadores bioquímicos completamente automáticos utilizan espectroscopia de absorción ultravioleta visible, es decir, en la región óptica de 200-700 NM, monitorean la absorbancia de los cromóforos en cambios de longitud de onda específicos y ayudan a Sistema de software informático para calcular y completar la medición. La base cuantitativa de la espectroscopia de absorción ultravioleta visible es la ley de Lambert-Beer.

La medición fotométrica tradicional generalmente utiliza pre-espectrometría, que utiliza filtros, prismas o rejillas para dividir la luz entre la lámpara de fuente de luz y el recipiente de muestra, y obtiene un color monocromático complementario a la muestra a través de una rendija ajustable. Luego, la luz se irradia sobre la copa de muestra y se utiliza una fotocélula o fotocélula como detector para medir la absorción (absorbancia) de luz monocromática de la muestra.

Sin embargo, la mayoría de los analizadores bioquímicos modernos emplean técnicas de medición post-espectrales. Medición posterior al espectro: primero, se irradia un haz de luz blanca (luz mixta) sobre el recipiente de muestra y luego se utiliza una rejilla para separar la luz. Al mismo tiempo, se coloca una fila de diodos emisores de luz detrás del mismo. rejilla como detector. La ventaja de la post-espectroscopia es que no requiere mover ningún componente en el sistema colorimétrico del instrumento y puede medir longitudes de onda duales o múltiples al mismo tiempo. Puede reducir el ruido del análisis colorimétrico y mejorar la precisión. análisis y reducir la tasa de fracaso.

El monocromador de instrumentos bioquímicos, es decir, el divisor de haz, tiene dos tipos: filtro de interferencia y divisor de haz de rejilla. Hay dos tipos de filtros de interferencia: tipo inserto y tipo tocadiscos. El complemento consiste en insertar el filtro requerido en la ranura del filtro. El tipo de disco instala todos los filtros equipados con el instrumento en un disco y lo gira hasta el filtro requerido durante el uso.

Los filtros de interferencia son baratos, pero son propensos a la humedad y al moho, lo que afecta la precisión de los resultados de las pruebas. Este tipo de filtro se utiliza habitualmente en analizadores bioquímicos semiautomáticos.

La división de rejillas se puede dividir en rejillas de reflexión holográfica y rejillas cóncavas grabadas. El primero se fabrica cubriendo una capa de película metálica sobre el vidrio, que es fácil de corroer y tiene un cierto grado de diferencia; el segundo es una longitud de onda seleccionada fija y grabada en el vidrio cóncavo, que es resistente al desgaste y a la corrosión; -resistente y sin fases. La mayoría de los analizadores bioquímicos totalmente automáticos utilizan espectroscopia de rejilla.

7. Sistema de control de programas

El ordenador es el cerebro del analizador bioquímico automático. La inyección e identificación de muestras y reactivos, la identificación de códigos de barras, el control de temperatura constante, el control de lavado, la impresión de resultados, el monitoreo del control de calidad y varias alarmas de fallas de instrumentos están controlados por computadoras. Cada generación de instrumentos es cada vez mejor y el grado de automatización es cada vez mayor. Algunos instrumentos pueden incluso completar algunos procedimientos de mantenimiento de rutina. Las funciones de procesamiento de datos de los analizadores bioquímicos totalmente automáticos son cada vez más completas, como la absorbancia durante el proceso de reacción, estadísticas de los resultados del control de calidad interior de varios métodos de medición y métodos de calibración, etc. , se puede procesar con un analizador bioquímico. La computadora también puede ajustar los datos del paciente, los indicadores de rendimiento del instrumento, el estado operativo del instrumento, etc. El control de calidad y los resultados de los pacientes en analizadores de bioquímica automatizados también se pueden gestionar a través de la interfaz entre la computadora del instrumento y el sistema de información del laboratorio (LIS).

El controlador del programa es la parte hardware del sistema. Incluyendo principalmente:

(1) Microprocesador y host. Utilizado para todas las unidades y el control general del instrumento, debe tener funciones poderosas como operación controlada por programa, diagnóstico de fallas, procesamiento y almacenamiento de diversos datos. Generalmente, se configura de acuerdo con las necesidades de la función del instrumento y los productos principales en el mercado de hardware informático.

(2) Unidad de monitor CRT. Generalmente se opera a través de teclado, mouse, pantalla táctil, etc.

(3) Sistema y software de soporte. La mayoría de ellos adoptan la interfaz WINDOWS-NT o WINDOWS, diseño completamente gráfico, múltiples selecciones de menú, guía de información, alarma de falla, indicaciones de ayuda, "diálogo" hombre-máquina, que es conveniente e intuitivo. Muchos instrumentos tienen visualización de curva de respuesta en tiempo real. .

(4) Transmitir datos con otras computadoras, impresoras y otros equipos a través de interfaces de datos como RS 232 C. A través del sistema de comunicación bidireccional de inteligencia artificial (consulta de host), el instrumento puede solicitar directamente el básico información del paciente/muestra desde la computadora host. Datos y elementos de prueba. Algunos tienen funciones de comunicación y monitoreo remotos, lo que permite realizar pruebas, mantenimiento e inspección remotas para lograr un trabajo en red.

El analizador bioquímico totalmente automático adopta un análisis automático controlado por programa. Una vez que se determina el programa de análisis, solo necesita ingresar los elementos o códigos de medición durante el trabajo, y el instrumento puede completar automáticamente la medición, el cálculo y la generación de informes de acuerdo con el programa programado. Los programas de control específicos varían de un instrumento a otro y generalmente se dividen en programas fijos y programas autoprogramados. Los programas fijos están preestablecidos por el fabricante del instrumento y a menudo coinciden con reactivos específicos; algunos no se pueden cambiar y otros pueden ser modificados por el usuario. Cuando se usa junto con reactivos de soporte, no solo es cómodo de trabajar, confiable en calidad, sino también costoso. La autoprogramación es flexible y práctica, lo que facilita el desarrollo de nuevos proyectos y enfatiza la flexibilidad del programa. Por ejemplo, durante el proceso de medición por lotes, se deben insertar muestras de emergencia para medirlas en cualquier momento sin alterar el procedimiento original. La medición de una sola muestra de emergencia es simple y conveniente, consume menos y se puede prediluir o repetir de manera flexible;

2. Flujo de trabajo general del instrumento

La correcta aplicación de un analizador bioquímico requiere no sólo dominar los principios de la tecnología de medición, sino también tener una comprensión suficiente del flujo de trabajo y del cálculo de las mediciones. métodos del instrumento específico.

(1) Flujo de trabajo general

El flujo de trabajo se puede comprobar a través del ciclo de medición del instrumento. Preste atención al punto de lectura del blanco de cubeta (CB), al punto de adición de muestra (S), al punto de adición de reactivo (R1, R2,...), al punto de lectura del blanco de reactivo (RB), al punto de lectura de medición (P) y al tiempo. de cada intervalo de puntos y tiempo total del ciclo, etc. Generalmente, cada instrumento está equipado con un plato giratorio de reacción de posición fija y un ciclo de medición de reacción de tiempo fijo, con niveles de reactivo y diluyente de muestra, y puntos de lectura de medición. Por ejemplo, cuando el Hitachi 7170 está a 10 minutos de P1 a P34, la muestra se agrega antes de PO, RL antes de PL, R2 entre P5 y P6, R3 entre P16 y P17, y R4 entre P33 y P34.

(2) Método de cálculo y procesamiento de datos

Los datos de absorbancia leídos por el instrumento en cada punto de lectura de absorbancia pueden no incluirse en el cálculo de la concentración humana.

El instrumento a menudo calcula los datos de absorbancia brutos basándose en la definición del instrumento y los requisitos establecidos por el operador, los convierte en los llamados datos de reacción y luego calcula la concentración basándose en coeficientes o fórmulas. Los ejemplos son los siguientes:

1. La absorbancia del punto de medición (a) de Hitach 7170 se calcula como (ax+ax-1)/2. Absorbancia real = datos de absorbancia × 10.000.

2.0 Datos del blanco de reactivo LYHPUS AU600: blanco de reactivo (Rb) en el punto P0 = absorbancia (WB) del blanco de reactivo P0 en agua de vidrio colorimétrico (RB) en cualquier punto de medición. La absorbancia en este momento es el blanco de agua de vidrio colorimétrico (WB).

Datos de reacción de 3.3. Método de punto final de dos puntos Monarch 1 000. (Absorbancia del punto final - Absorbancia del punto final del blanco) - (Absorbancia del punto inicial - Absorbancia del punto inicial del blanco).

4. Los datos de reacción del método de punto final (incluido el blanco de reactivo, método de punto final) de AU600 = absorbancia de punto final - absorbancia de punto P0 (blanco de reactivo, RB). Datos de reacción para el método de punto final (sin blanco de reactivo, punto final). Método) = absorbancia de punto final - blanco de vidrio colorimétrico (WB).

5. Datos de reacción del método de dos puntos AU600 (en blanco) = [Lectura del punto de medición después de agregar el segundo reactivo - lectura del punto P0] - [Lectura del punto de medición antes de agregar el segundo reactivo - lectura del punto PO ] .

3. Principales procedimientos operativos

(1) Procedimientos operativos antes de utilizar el instrumento

Se centran principalmente en la configuración básica del instrumento:

La configuración del proyecto de prueba de duración incluye el nombre de la prueba, el código, el perfil de la prueba, las rondas de prueba y la secuencia de la prueba cuando sea necesario.

2. La configuración de parámetros de cada prueba incluye la configuración de parámetros como la relación entre pruebas y la verificación de resultados.

3. Configuración de reactivos: establezca la posición del reactivo y las especificaciones de la botella de reactivo para cada prueba de acuerdo con los parámetros de detección relevantes, y configure el número de lote de reactivo y la fecha de vencimiento si es necesario.

4. Configuración del calibrador Establece la ubicación, concentración y cantidad de calibradores.

5. La configuración del control de calidad se basa en los requisitos de control de calidad. Establecer la cantidad de sustancias de control de calidad, reglas de control de calidad, elementos de control de calidad y parámetros de control de calidad correspondientes.

6. La configuración del tubo de muestra incluye el tipo de tubo de muestra, la altura del líquido residual (volumen muerto), el método de identificación, etc.

7. Otras configuraciones incluyen el modo de transferencia de datos, el formato del informe de resultados, el modo de auditoría y los criterios de auditoría.

(2) Procedimientos operativos de rutina

Arranque (precalentamiento y mantenimiento): establezca las condiciones de inicio (índice de fecha y hora, ronda, número inicial de muestras, etc.), según sea necesario Solicitar elementos de calibración, control de calidad y medición del paciente (incluido el número de gradilla, número de copa o número de serie). puede continuar aplicándose durante el ensayo) - cargar calibradores, materiales de control de calidad y muestras de pacientes - cargar reactivos - verificar el estado inicial del instrumento (si no se utiliza ningún sistema de códigos de barras, especialmente si las muestras se identifican secuencialmente, verifique el número inicial de el ensayo es consistente con el número de gradilla de muestras y el número de aplicación) - Determinación de calibración y control de calidad - Verificar los resultados de calibración y control de calidad - Determinación de muestras de pacientes - Monitorear el proceso de determinación (inspección de reactivos, observación y análisis de resultados, edición y corrección) - Transferencia de datos (espera de impresión de informe). Mantenimiento post-medición.

(3) Inspeccionar y analizar los resultados de la medición

1 Comprenda y familiarícese con el significado y la función de varios símbolos de advertencia en el instrumento y utilice varios símbolos de advertencia en las instalaciones. de configurar correctamente los parámetros Puede mejorar la eficiencia del descubrimiento y la resolución de problemas.

2. Familiarícese y utilice de manera flexible las pantallas operativas (interfaces) relevantes del instrumento, tales como: usar un monitor de reacción para observar la curva del curso del tiempo de reacción, revisar y analizar la curva de calibración con trazas de calibración; utilizar métodos estadísticos para comprender los valores promedio de medición del paciente en diferentes períodos y realizar análisis de datos para verificar y corregir los datos de medición;

3. La verificación de calibración debe aprovechar al máximo la función de configuración del instrumento, monitorear la fluctuación de la curva de calibración, el valor de absorbancia de cada punto de calibración (el valor del blanco y el valor de la tasa de blanco del reactivo). no se puede ignorar), calcular el valor K y comparar con el pasado. Si es necesario, se debe examinar más a fondo la curva del curso del tiempo de reacción. Los datos de control de calidad deben combinarse para comprender las condiciones experimentales.

4. En el examen de los resultados del paciente, además de la observación visual o el uso de indicadores séricos para comprender las características de la muestra, prestando atención y comprendiendo los datos clínicos y el diagnóstico, es importante aprender a Analizar las curvas y datos del proceso de tiempo de reacción. Habilidades básicas.

IV.Métodos básicos de determinación

(1) Método de punto final (método END POINT)

Según las características del espectro de absorción y absorbancia del producto de reacción cuando la reacción alcanza el equilibrio, un método para el análisis cuantitativo de sustancias. Para reacciones químicas generales, el punto final de la reacción es cuando se completa (o las reacciones positiva y negativa están en equilibrio dinámico) y los productos de la reacción son estables. Para la reacción antígeno-anticuerpo, el criterio de valoración es la reacción completa del antígeno y el anticuerpo para formar el complejo inmunológico más grande y estable. En la curva histórica del tiempo de reacción, es una sección paralela al eje X. En términos de métodos de medición y cálculo, generalmente se dividen en método de un punto y método de dos puntos.

1. El método de un punto utiliza el valor de absorbancia del blanco de aire (GB), el blanco de agua (WB) o el blanco de reactivo (RB) antes de que el reactivo se mezcle con la muestra como base para la medición. cálculo, y comienza con la lectura de absorbancia al final de la reacción. Resta la lectura del blanco para obtener la absorbancia de la reacción. El resultado de la medición se obtiene comparándolo con la absorbancia de la solución de calibración en las mismas condiciones. A menudo se utiliza junto con el método de calibración de un punto, es decir, utilizando una concentración de calibración, la curva de calibración cruza el punto cero y es lineal. También se aplicó calibración multipunto.

2. El método de punto final de dos puntos, es decir, el método de punto final-punto de inicio, toma un cierto punto de tiempo después de que el reactivo y la muestra se mezclan como punto de partida y resta el punto de partida. lectura de la lectura de absorbancia al final de la reacción. Bajo ciertas condiciones, se puede reducir la especificidad de la muestra para la reacción o la reacción misma (principalmente en referencia a la interferencia cromática). Comúnmente se utilizan reactivos dobles y, a menudo, se utiliza un cierto punto antes de agregar R2 como punto de partida de la determinación. En algunos casos, R2 también se puede utilizar como punto de partida. Si se utiliza un solo reactivo, es difícil usarlo cuando la reacción principal comienza demasiado rápido o cuando el punto de lectura inicial del instrumento es limitado.

La diferencia entre el método fijo y el método de punto final de dos puntos es que el punto final de la lectura de la medición no está en la sección de equilibrio de la reacción, sino que se selecciona según la metodología. Como la creatinina sérica (método del ácido pícrico).

3. El método de punto final de tres puntos, también conocido como método de punto final doble, se utiliza para medir dos reacciones a la vez en un canal. Por ejemplo, se pueden medir simultáneamente los ácidos grasos libres y los triglicéridos. Algunos instrumentos (como la serie Hitachi) se configuran con este método.

(2) Método de Monitoreo Continuo (MÉTODO DE MONITOREO CONTINUO)

También se le llama análisis de tarifas. Es decir, el proceso de reacción se monitorea continuamente y se realiza un análisis cuantitativo basado en la tasa de formación de producto medida o el consumo de sustrato. En la curva del curso del tiempo de reacción, la reacción es una sección de velocidad constante (la pendiente permanece sin cambios), que a menudo se usa para determinar el período de reacción lineal de la actividad enzimática.

1. El método de monitoreo continuo es el método de velocidad de reacción de orden cero, también conocido como método de pendiente. Durante el largo período de reacción (al menos 90-120 segundos), lea el valor de absorbancia en ciertos intervalos (generalmente 2-30 segundos), lea al menos 4 puntos y obtenga 3△A. Generalmente, las lecturas continuas se procesan al menos; Método de los cuadrados, el método multipunto de tasa de tiempo (TR) se utiliza para intervalos de lectura cortos. Tome todas las lecturas en la parte de reacción lineal para obtener la velocidad de reacción ΔA/MIN por unidad de tiempo. Este método debe basarse en una reacción de orden cero, porque sólo en una reacción de orden cero, el cambio en la absorbancia por unidad de tiempo (velocidad de reacción ΔA/MIN) es proporcional a la actividad de la enzima. Este método reduce relativamente los errores de análisis y mejora en gran medida la velocidad y precisión del análisis. El analizador bioquímico semiautomático utiliza una sola muestra para el seguimiento continuo, lo que requiere bastante tiempo. Para aplicar el método de monitoreo continuo, primero debemos preparar muestras con concentraciones altas, medias y bajas dentro del rango lineal, hacer curvas de curso de tiempo de reacción respectivamente, comprender todo el proceso de reacción en diferentes concentraciones y determinar el tiempo de retraso y el período de monitoreo lineal.

2. El método de tasa de dos puntos es el llamado método de tasa de cuasi primer orden. Seleccione dos puntos de tiempo T 1 y T 2 en la reacción, lea la absorbancia A 1 y A2 y calcule (A2-A1), (T2-T1) = △A, △ T. La principal diferencia entre este método y los dos -El método del punto final es Hay dos diferencias: la reacción en el último punto leído no alcanzó el punto final y los resultados se calculan en función de la velocidad. En comparación con el método de monitoreo continuo, su desventaja es que T1 y T2 se determinan artificialmente, hay muchos factores inciertos y no se puede garantizar la linealidad de la reacción durante T1-T2, lo que afecta la precisión de los resultados antes de la medición de rutina. Se debe realizar una prueba previa para determinar el período de tiempo lineal. Si la reacción no es lineal dentro del período de tiempo seleccionado (por ejemplo, el período de reacción de orden cero es corto y el instrumento no se puede configurar ni medir), solo se puede utilizar el método de punto final. Tiene la ventaja de ser un método simple cuando la actividad enzimática es baja y el valor de absorbancia es pequeño, no puede verse limitado por los puntos de tiempo de monitoreo continuo del instrumento, aumentar el período de tiempo de medición y reducir los errores de lectura.

3. El método de velocidad B se utiliza para determinar la correlación entre dos reacciones en un canal a la vez.

Se puede utilizar tanto para mediciones experimentales dobles como para compensación automática de interferencias y/o blancos de muestra. El principio de esta última aplicación es utilizar el procesamiento automático del microordenador del instrumento. Bajo la premisa de que la primera reacción (reacción de interferencia) es siempre lineal, la influencia continua de la primera velocidad de reacción se deduce de la segunda reacción (reacción principal). . Por ejemplo, se utiliza para eliminar la disminución de la absorbancia cuando la bilirrubina se convierte en biliverdina y la interferencia negativa en la determinación de creatinina mediante el método del ácido pícrico. Algunos instrumentos (como la serie Hitachi) se configuran con este método.

(3) Corrección del blanco

En espectrofotometría, la solución en blanco se utiliza a menudo para ajustar el punto cero de absorbancia del instrumento o para compensar algunos factores que interfieren en la medición. En la medición de analizadores bioquímicos, además de utilizar el método de dos puntos de longitud de onda dual o múltiple para eliminar la interferencia de fondo, a menudo se utiliza una medición en blanco especial para restar su influencia de la absorbancia de la muestra. La selección adecuada de la corrección en blanco juega un papel importante en la mejora de la precisión.

1. Los blancos de reactivos generalmente se dividen en dos categorías: blancos con reactivos y blancos sin reactivos, según el tipo de método y el modo de calibración. Los blancos de reactivos se deben determinar por separado o junto con la calibración, y se deben preseleccionar vasos de muestra o gradillas de blancos de reactivos que contengan agua desionizada. La absorbancia de cada punto de medición del calibrador o de la muestra del paciente debe restarse de la absorbancia del blanco de reactivo o del valor de tasa del blanco del punto de medición correspondiente. En el método sin blanco de reactivo, el blanco de agua del vaso de reacción se utiliza directamente como valor de referencia para la determinación.

En muchos instrumentos, las mediciones del blanco de reactivos son similares a las mediciones de calibración y no se miden en tiempo real cuando se miden las muestras de los pacientes. Por lo tanto, se debe prestar atención a su frecuencia de medición para evitar errores de cálculo causados ​​por cambios en los blancos de reactivo causados ​​por cambios en el número o la calidad del lote de reactivo.

2. El blanco de la muestra sirve principalmente para eliminar la interferencia de turbidez o color de la propia muestra. El método del canal en blanco se usa comúnmente y el resultado de la calibración es igual al resultado del canal de reacción de color: el resultado del canal en blanco. La mayoría de los instrumentos necesitan ocupar canales de medición, lo que reduce la velocidad de análisis a la mitad, pero la precisión para eliminar la interferencia es mayor que la del punto final de dos puntos.

Materiales de referencia:

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