Proceso de desinfección dental
1. Utilizar calor húmedo para esterilizar el medio de cultivo.
El proceso de esterilización del medio de cultivo se completa dentro de las 24 horas posteriores a su preparación. El principio de la esterilización a alta presión es: en una vaporera cerrada, el vapor no puede escapar y la presión continúa aumentando, lo que hace que el punto de ebullición del agua siga aumentando y la temperatura dentro de la vaporera también aumenta. Bajo una presión de 0,1 mpa, la temperatura en el recipiente alcanza los 121°C. A esta temperatura del vapor se matan rápidamente diversas bacterias y sus esporas, altamente resistentes al calor.
Tenga cuidado de eliminar completamente el aire de la olla y permita que todo el vapor de agua de la olla quede completamente esterilizado. Hay varias formas diferentes de desinflar la esterilización a alta presión, pero el propósito es descargar el aire para aumentar uniformemente la temperatura en la olla y garantizar completamente la esterilización. El método común es: cerrar la válvula de purga. Después de encender, cuando la presión aumente a 0,05 mpa, abra la válvula de purga para liberar el aire. Después de que el puntero del manómetro vuelva a cero, cierre la válvula de purga.
Cierre la válvula y vuelva a energizarla. Cuando el manómetro suba a 0,1 mpa, comience a cronometrar y mantenga la presión en 0,1-0,15 mpa durante 20 minutos.
El tiempo de retención varía en función del tamaño del envase. Ver Tabla 1. Los números que figuran en esta tabla son muy seguros para una esterilización completa. Si el tamaño del contenedor es grande pero el número de contenedores es pequeño, el tiempo también se puede reducir.
Tabla 1. Tiempo mínimo necesario para esterilizar en autoclave el medio de cultivo
Volumen del recipiente/ml
Tiempo mínimo necesario para esterilizar a 121 °C/min
20 -50
15
75-150
20
250-500
25
1000
30
Después de alcanzar el tiempo de espera, se puede cortar la energía. Cuando la presión alcanza los 0,5 mpa, el vapor se puede liberar lentamente. Tenga cuidado de no despresurizar demasiado rápido, ya que esto provocará una ebullición violenta por descompresión, lo que provocará que el líquido del recipiente se desborde. Cuando la presión cae a cero, se puede abrir la tapa, sacar el medio y colocarlo en la plataforma para que se condense. Si el aire no se desinfla durante mucho tiempo, la composición del medio cambiará, haciendo imposible inclinar el medio. Si se deja demasiado tiempo, la tapa no se puede abrir debido a la presión negativa en la olla. Siempre que se abra la válvula de escape, se introduzca presión atmosférica y se equilibren las presiones interna y externa, la tapa se puede abrir fácilmente.
Para artículos que no se deteriorarán después de la esterilización a alta presión, como agua esterilizada, medios de cultivo, herramientas de inoculación, etc., se puede extender el tiempo de esterilización o aumentar la presión. Se debe respetar estrictamente el tiempo de retención del medio de cultivo, no solo para mantener completamente la presión, sino también para evitar que los componentes del medio de cultivo se deterioren o reduzcan su eficacia. El tiempo no debe ampliarse arbitrariamente.
El autoclave también se puede utilizar para algunos productos textiles, como batas de laboratorio y mascarillas. Límpielo, séquelo, póngalo en una bolsa de plástico resistente a alta presión y saque la máquina a alta presión durante 20 a 30 minutos.
El valor del pH del medio de cultivo antes y después del autoclave disminuyó entre 0,2 y 0,3 unidades. La dirección y amplitud de los cambios en el valor del pH del medio de cultivo después de una alta presión dependen de muchos factores. Cuando el medio de cultivo tiene un solo componente y contiene concentraciones altas o elevadas de sustancias, el valor del pH cambia mucho después del autoclave, superando incluso las 2 unidades de pH. Los cambios en el pH ambiental superiores a 0,5 unidades pueden tener efectos fisiológicos significativos.
Los autoclaves suelen hidrolizar la sacarosa del medio de cultivo en azúcares simples, cambiando así la presión osmótica del medio de cultivo. En el intervalo de 8-20 sacarosa, el medio de cultivo después del tratamiento en autoclave aumentó aproximadamente 0,43 veces.
El hierro del medio de cultivo puede catalizar la hidrólisis de la sacarosa, pudiendo hidrolizar entre un 15 y un 25% de la sacarosa en glucosa y fructosa. Cuando el valor del medio de cultivo es inferior a 5,5, la cantidad de hidrólisis es mayor.
Cuando se agrega un 0,1% de carbón activado al medio de cultivo, la hidrólisis de la sacarosa a alta presión mejora enormemente. Cuando se agrega un 1% de carbón activado, la tasa de hidrólisis de la sacarosa puede alcanzar 5.
Para evitar los cambios anteriores causados por la esterilización a alta presión, se pueden utilizar los siguientes métodos:
(1) Siempre preste atención para recopilar información sobre el impacto de la esterilización a alta presión. esterilización a presión sobre los componentes del medio de cultivo, de modo que se puedan tomar medidas oportunas y efectivas.
(2) Al diseñar la fórmula del medio de cultivo, intente utilizar reactivos estables con efectos similares y controle con precisión la dosis. Por ejemplo, use manitol en lugar de fructosa y sorbitol, use IBA en lugar de IAA, controle la cantidad de carbón activado (por debajo de 0,1) y preste atención al impacto del valor del pH en los componentes del medio de cultivo bajo esterilización a alta presión.
(3) Al preparar el medio de cultivo, se debe prestar atención al agrupamiento apropiado y al orden de adición de los componentes. Por ejemplo, al final se añaden fósforo, calcio y hierro.
(4) Preste atención al cambio y recuperación del valor de pH del medio de cultivo después del autoclave. Por ejemplo, después del tratamiento en autoclave, el valor del pH suele aumentar de 5,8 a 6,48 y bajará a aproximadamente 5,8 después de 96 horas. De esta forma, podemos dominar esta regla en los experimentos.
2. Los instrumentos utilizados para operaciones asépticas se esterilizan mediante quemado.
En operaciones asépticas se utilizan fórceps, tijeras, bisturís, etc. Remojar en alcohol al 95%, sacarlo, quemarlo a la llama de una lámpara de alcohol y esterilizarlo antes de usarlo. Después de enfriar, utilizar inmediatamente. Durante la cirugía se puede utilizar un frasco de boca ancha de 250 ml o 500 ml y se puede añadir alcohol al 95% para facilitar la inserción de las herramientas.
3. Esterilizar la cristalería y los utensilios resistentes al calor con calor seco.
La esterilización por calor seco mata los microorganismos calentando el horno a una temperatura de 160-180°C. Dado que la resistencia al calor de las células vegetativas bacterianas mejora mucho en condiciones de calor seco y es similar a la de las esporas, la esterilización generalmente se realiza a 170°C durante 90 minutos. Los artículos que se van a esterilizar con calor seco deben lavarse y secarse con anticipación, y las herramientas deben envolverse adecuadamente para evitar una nueva contaminación cuando se toman después de la esterilización. Los apósitos pueden estar hechos de plástico resistente a altas temperaturas. Durante la esterilización, la temperatura se debe aumentar gradualmente y se debe registrar el tiempo después de alcanzar la temperatura predeterminada. El número de elementos colocados en el horno no debe ser demasiado grande para evitar impedir la convección y penetración del calor. Después de cortar el suministro eléctrico durante el tiempo especificado, espere hasta que el horno se enfríe por completo antes de abrirlo para evitar romper los utensilios debido a un enfriamiento repentino. La esterilización por calor seco consume demasiada energía y desperdicia tiempo.
4. Filtración y esterilización de sustancias termolábiles.
Algunos reguladores del crecimiento, como las giberelinas, la zeatina, el ácido abscísico y algunos microorganismos, no son resistentes al calor y no se pueden esterilizar mediante autoclave.
Algunos componentes químicos se degradarán bajo altas temperaturas y presiones, perdiendo su eficacia o reduciendo su eficacia. La actividad de la giberelina GA3 después de la esterilización a alta temperatura es solo 65438 ± 00 de la solución fresca sin esterilización a alta temperatura. La sacarosa se degrada parcialmente en d-glucosa y d-fructosa después de que la fructosa se puede hidrolizar parcialmente para producir sustancias que inhiben el crecimiento de los tejidos vegetales cultivados. Las altas temperaturas también hacen que los carbohidratos reaccionen con los aminoácidos. Las vitaminas tienen distintos grados de estabilidad térmica, pero si el pH del medio de cultivo es superior a 5,5, la vitamina B1 se degradará rápidamente. El pantotenato de calcio y los extractos de tejido vegetal deben filtrarse y esterilizarse, no esterilizarse a alta temperatura, de lo contrario perderán su efecto.
El diámetro de malla de la membrana filtrante antibacteriana es inferior a 0,45 micras. A medida que la solución pasa a través del filtrado, las células bacterianas y las esporas de hongos se bloquean porque es más grande que el diámetro de la membrana del filtro. Los dispositivos de filtración por succión se utilizan a menudo cuando se deben filtrar y esterilizar grandes volúmenes de líquido. Se puede utilizar una jeringa cuando la cantidad de líquido es pequeña. Esterilice a alta presión antes de su uso, instale la membrana del filtro cerca de la aguja de la jeringa, coloque el líquido a filtrar en la jeringa, empuje el vástago del pistón de la jeringa y exprima la solución de la membrana del filtro. La solución se extruye del tubo de la aguja. una solución estéril.
Pasos de la operación de esterilización por filtración: Primero envuelva el filtro y la botella de líquido con papel. La membrana del filtro se puede colocar en una placa de Petri y envolver con papel. Esterilice con vapor a alta presión a 121 °C durante 30 minutos antes de su uso; instale el dispositivo de filtrado en la mesa de trabajo ultralimpia, utilice pinzas sin dientes esterilizadas para colocar la membrana del filtro en la partición, con el lado rugoso de la membrana del filtro hacia arriba. luego coloque el filtro a esterilizar. Inyecte el líquido bacteriano en el filtro y encienda la bomba de vacío para filtración y esterilización. Una vez que el cultivo demuestra que el filtrado es estéril, se puede almacenar para su uso posterior.
5. Se desinfecta el espacio mediante luz ultravioleta y fumigación.
(1) La sala de inoculación con esterilización ultravioleta, el banco de trabajo ultralimpio o la caja de inoculación deben esterilizarse con luz ultravioleta.
La esterilización ultravioleta utiliza factores de radiación para la esterilización. Después de que las bacterias absorben los rayos ultravioleta, la estructura de las proteínas y los ácidos nucleicos cambia, provocando mutaciones en los cromosomas bacterianos y provocando la muerte. La longitud de onda de la luz ultravioleta es de 200 a 300 nanómetros, de los cuales 260 nanómetros tienen la mayor capacidad de esterilización. Sin embargo, debido a la débil capacidad de penetración de los rayos ultravioleta, solo es adecuado para esterilizar aire y superficies de objetos. La distancia desde el objeto irradiado no debe exceder los 1,2 metros.
(2) La fumigación y la esterilización utilizan métodos como el calentamiento, la combustión y la oxidación para convertir sustancias químicas en gases y difundirlos en el aire para matar los microorganismos en el aire y en la superficie de los objetos. Este método es muy sencillo, basta con cerrar bien el espacio de desinfección.
Existen muchos tipos de desinfectantes químicos que desnaturalizan las proteínas de los microorganismos, compiten con sus sistemas enzimáticos o reducen su tensión superficial, aumentan la permeabilidad de la membrana citoplasmática y provocan la ruptura o disolución de las células. En términos generales, cuanto mayor sea la temperatura, mayor será el tiempo de acción y mejor será el efecto de esterilización. Además, debido a que el desinfectante debe disolverse en agua para que sea efectivo, debe convertirse en un estado soluble en agua, como cloruro de mercurio, permanganato de potasio, etc. También está la concentración del desinfectante. Generalmente, cuanto mayor es la concentración, más fuerte es la capacidad bactericida, excepto en el caso del ácido carbólico y el alcohol.
El formaldehído se utiliza habitualmente como fumigante. Durante la fumigación, la habitación se sella. Según la dosis de 5-8ml/m3, colocar el formaldehído en un recipiente de boca ancha, agregar 5g/m3 de permanganato de potasio para oxidación y volatilización. Al fumigar, se puede rociar la habitación mojada con anticipación para mejorar el efecto. El ácido acético glacial también se puede calentar y fumigar, pero no es tan eficaz como el formaldehído.
6. Utilizar spray químico para esterilizar las superficies de determinados objetos.
Algunos fármacos se pueden aplicar sobre la superficie del objeto y pulverizar para su esterilización. Como mesas, paredes, manos, superficies de material vegetal, etc. , se puede esterilizar mediante la aplicación repetida de alcohol al 75 %, 1-2 solución de Lysol y 0,25-1 xilazina.
7. Esterilizar la superficie de los materiales vegetales con desinfectante.
Los materiales vegetales seleccionados de exterior o interior contienen diversos microorganismos en distintos grados. Una vez que estas fuentes de contaminación se introducen en el medio de cultivo, contaminarán el medio de cultivo. Por lo tanto, el material vegetal debe someterse a una rigurosa esterilización superficial y luego ser inoculado en el medio de cultivo mediante procedimientos asépticos. Este proceso se llama inoculación. El material vegetal inoculado se denomina explante.
El agente antibacteriano de cultivo de tejidos vegetales (PPM), representado por Qiwei Yi, es un agente antibacteriano de amplio espectro que puede matar células bacterianas y fúngicas en altas concentraciones, prevenir la germinación de esporas de hongos y eliminar las bacterias internas. Fuente de explantes contaminados.
En primer lugar, retire las partes no utilizadas del material vegetal recogido y limpie cuidadosamente las partes necesarias, por ejemplo con un cepillo adecuado. Corte el material al tamaño adecuado, es decir, que el recipiente de esterilización quepa en él. Coloca un grifo y deja correr el agua durante unos minutos a unas horas. El tiempo de lavado depende de la limpieza del material. Los materiales flotantes o finos se pueden lavar en una bolsa de gasa. El lavado con agua corriente es particularmente útil cuando la contaminación es grave.
Al lavar, puede agregar detergente en polvo para limpiar y luego enjuagar el agua en polvo con agua del grifo. El polvo de lavandería puede eliminar la suciedad ligeramente adherida a la superficie de las plantas y eliminar los lípidos para facilitar el contacto directo con el desinfectante. Por supuesto, la sustancia limpiadora ideal es el tensioactivo Tween.
El segundo paso es remojar y desinfectar la superficie del material. A realizar en una mesa de trabajo o caja de inoculación limpia, preparar vasos de precipitados esterilizados, varillas de vidrio, alcohol 70, desinfectante, agua esterilizada, relojes, etc. Remojar en alcohol al 70% durante 10 a 30 segundos. Debido a que el alcohol puede humedecer la superficie de los materiales vegetales, y el alcohol al 70% tiene un fuerte poder de penetración y puede matar fácilmente las células vegetales, el tiempo de infiltración no debe ser demasiado largo. También hay algunos materiales especiales, como if, yemas, etapas de arranque con brácteas y brácteas, yemas latentes con múltiples capas de escamas, etc. , y utiliza principalmente materiales internos, que pueden tratarse con alcohol al 70% durante un tiempo un poco más largo. En condiciones estériles, el material tratado se retira después de que el alcohol se evapora y se utiliza el material interior.
El tercer paso es tratarlo con desinfectante. Hay muchos tipos de desinfectantes de superficies y se pueden seleccionar 1 o 2 según la situación (Tabla 2).
Tabla 2.
Comparación de concentración y efecto de desinfectantes de uso común
Nombre del esterilizador
Concentración
Tiempo de esterilización/minuto
Efecto de esterilización
Alcohol
70-75
0,1-3
Bueno
Cloruro de mercurio
0,1 -0,2
2-10
Muy bien
Polvo decolorante
solución saturada
5 -30
Muy bien
Hipoclorito de calcio
9-10
5-30
Muy bien Bueno
Clorosis
2
5-30
Muy buena
Peróxido de hidrógeno
p>10-12
5-15
Buenos
Antibióticos
4-50 mg/L
p>30-60
Mejor
Los desinfectantes anteriores deben prepararse temporalmente antes de su uso y el cloruro de mercurio se puede almacenar por un corto período de tiempo. Tanto el hipoclorito de sodio como el hipoclorito de calcio utilizan cloro gaseoso producido por la descomposición para la esterilización, por lo que es mejor cubrirlo con un frasco durante la esterilización; el mercurio se esteriliza con iones de mercurio de metales pesados y se esteriliza liberando oxígeno atómico durante la descomposición; residuo El impacto es muy pequeño. Después de la esterilización, enjuague con agua esterilizada 3-4 veces. Dado que es difícil eliminar el cloruro de mercurio residual de los materiales esterilizados con una solución de cloruro de mercurio, se debe enjuagar con agua esterilizada de 8 a 10 veces durante no menos de 3 minutos cada vez para intentar eliminar el cloruro de mercurio residual.
Al desinfectar, transfiera los materiales vegetales sin escurrir a un vaso de precipitados u otro recipiente, registre el tiempo, vierta el desinfectante y revuelva suavemente con una varilla de vidrio de vez en cuando para favorecer la mezcla de cada parte del material con el desinfectante haga pleno contacto para expulsar las burbujas de aire y lograr una desinfección completa. Cuando casi hayan transcurrido 1 o 2 minutos, comience a verter el desinfectante en el vaso de precipitados preparado. Tenga cuidado de no derramar el material. Después de verter, vierta inmediatamente agua esterilizada y revuelva suavemente para enjuagar. El tiempo de esterilización va desde que se vierte el desinfectante hasta que se vierte agua esterilizada. El tiempo de registro también facilita la comparación de los efectos de la desinfección para su corrección. La solución desinfectante debe sumergir completamente el material. En lugar de utilizar una gran cantidad de material para esterilizar en un recipiente pequeño, utilice más líquido esterilizante.
Tween-80 o Triton X son más eficaces en la solución de esterilización. La función principal de estos tensioactivos es facilitar que el fármaco se propague e infiltre en la superficie del material de esterilización. Sin embargo, el daño al material también aumenta después de agregar Tween. Preste atención a la cantidad de Tween y al tiempo de esterilización. Generalmente se añade un 0,5% de solución esterilizante, es decir, se añaden 15 gotas por cada 100ml.
El último paso es enjuagar con agua esterilizada, lo que dura unos 3 minutos. Enjuague aproximadamente de 3 a 10 veces, según el tipo de desinfectante utilizado. El efecto de enjuague del agua esterilizada es evitar los efectos secundarios de los desinfectantes que matan las células vegetales.