Investigación sobre la enfermedad ocular glaucoma
En la actualidad, existen muchos resultados de investigación sobre la protección de las CGR, entre los que se incluyen principalmente: mejora de la microcirculación del disco óptico, inhibidores de la vía del glutamato, factores neurotróficos, inducción de la expresión de proteínas de choque térmico y tratamiento antioxidante. Sin embargo, la patogénesis del glaucoma no ha sido completamente aclarada. En los últimos años, ha llamado la atención la investigación sobre el papel de la transducción de señales y los canales receptores en la lesión y protección de las células ganglionares de la retina. Una de las direcciones y objetivos de la investigación más recientes es que los canales receptores que pueden detectar la presión pueden estar involucrados en la transmisión de estímulos patológicos y causar daño neurológico (Quigley et al., 2006). Trpc6 (potencial de receptor transitorio, c6) es una proteína de canal permeable a iones de calcio sensible a la presión recientemente descubierta implicada en la supervivencia neuronal y la apoptosis.
He participado en la investigación sobre el tema "Efecto protector del canal TRPC6 en los ganglios retinianos en el modelo de isquemia-reperfusión retiniana" y obtuve valiosos resultados de investigación preliminar: posicionamiento completo y preciso de los genes del canal TRPC6 y la expresión. y distribución de proteínas en la retina de ratas SD, especialmente en RGC, TRPC6 se expresa selectivamente en la capa de RGC para explorar los cambios de expresión de TRPC6 en la lesión por isquemia-reperfusión de la retina de rata; La expresión del gen y la proteína TRPC6 aumentó transitoriamente 24 horas después de la lesión por IR. Los experimentos farmacológicos in vivo muestran que su agonista OAG puede proteger las CGR del daño inducido por el modelo IR de retina, mientras que su antagonista SKF96365 puede promover la aparición de apoptosis de las CGR. Este estudio tuvo como objetivo explorar más a fondo el mecanismo de acción de TRPC6. Los estudios han encontrado que el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) está estrechamente relacionado con los canales TRPC en la transducción de señales y la regulación de la supervivencia celular.
En abril de 20xx, investigadores del Instituto de Neurociencia de Shanghai, Academia de Ciencias de China, publicaron un artículo en Nature Neuroscience, confirmando por primera vez que la expresión de TRPC6/TRPC3 puede proteger a las neuronas cerebelosas de la muerte celular causada por privación de suero, y encontró que se encuentra aguas arriba de la vía de señalización citoprotectora mediada por TRPC3/6 (Tai et al., traducido por Jia et al., edición 20xx, edición 20xx). Este estudio tiene como objetivo explorar el mecanismo por el cual BDNF-. La proteína del canal TRPC6 mediada protege las RGC inducidas por el modelo del talón de la retina del daño, tiene cierta importancia práctica para dilucidar la patogénesis del glaucoma y proporcionar nuevas ideas y objetivos de intervención farmacológica para la intervención clínica. El tema se divide principalmente en las siguientes dos partes:
La primera parte trata sobre los cambios en la expresión de BDNF cuando los canales TRPC se regulan en el modelo IR de la retina
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Para detectar diferentes tiempos de reperfusión en el modelo IR de rata SD, se detectaron los cambios en la expresión del gen bdnf y los cambios en los niveles de proteína BDNF cuando se inhibieron los canales TRPC para explorar el impacto de su tipo de expresión. Apoptosis de RGC.
Segundo, métodos de investigación
1. Detección de la expresión del gen bdnf en el modelo de IR de la retina. Establecer el modelo de IR de la retina sujetando los vasos sanguíneos del nervio óptico, bloqueando la retina. suministro de sangre durante 60 minutos, y luego sacrifique las ratas a las 3 horas, 24 horas, 48 horas y 7 días después de la reperfusión, y retire los globos oculares con un microscopio y extraiga el ARN total. cambios del gen bdnf mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa y PCR cuantitativa en tiempo real. 2. Detectar la expresión de la proteína BDNF cuando se inhibe el canal TRPC.
30 minutos antes de la isquemia retiniana, se inyectó en el ojo derecho el antagonista de TRPC SKF96365 a través de la cavidad intravítrea como grupo experimental, y en el ojo izquierdo se inyectó PBS como grupo de control negativo. Las ratas fueron sacrificadas a las 3 horas, 6 horas, 24 horas, 48 horas y 72 horas después de la reperfusión, se extirparon los globos oculares, se despegó la retina bajo un microscopio y se extrajo la proteína retiniana total. La proteína retiniana total se detectó mediante transferencia Western.
3. Detectar la expresión del gen bdnf cuando el canal TRPC está inhibido. Las ratas SD se dividieron en 4 grupos y se trataron de la siguiente manera:
El primer grupo se sometió a una cirugía simulada en los globos oculares, solo se realizó la separación del nervio óptico y no se realizó ninguna cirugía de isquemia retiniana
En tercer lugar, los resultados de la investigación
Los resultados de RT-PCR y PCR en tiempo real mostraron que el ARNm de bdnf comenzó a aumentar 3 horas después de la reperfusión y alcanzó un pico a las 24 horas, que fue del 65%. del grupo control 438±0,4 veces (P
La segunda parte es el papel de la vía de señalización ProBDNF-p75NTR en la lesión de las células ganglionares de la retina inducida por el modelo de isquemia-reperfusión retiniana.
Propósito: explorar el papel de la vía de señalización p75NTR en las células ganglionares de la retina dañadas por isquemia-reperfusión retiniana
2. Métodos de investigación: Las células ganglionares de la retina en ratas SD vivas se marcaron completamente con oro fluorescente a través del colículo superior. días), se estableció un modelo de lesión retiniana por IR. Al ojo derecho se le inyectó el antagonista de la vía de señalización p75NTR TAT-pep5 30 minutos antes de la isquemia retiniana, y al ojo izquierdo se le inyectó DMSO como control negativo a las 24 horas, 48 . horas y 72 horas después de la reperfusión. Las ratas se sacrificaron después de 7 días. Las retinas se recolectaron mediante perfusión cardíaca de rutina y las CGR se contaron mediante microscopía de fluorescencia después de los mosaicos. que después de 48 horas de reperfusión, el número de CGR en el grupo al que se le inyectó el antagonista de la vía de señalización p75NTR TAT-pep5 fue significativamente mayor que el del grupo al que se le inyectó DMSO (P <0,05, N=6)
.4. En el modelo IR, la vía de señalización proBDNF-p75NTR puede estar involucrada en el proceso de inhibición de la muerte de las CGR inducida por los canales TRPC. Conclusión El BDNF puede ser la vía ascendente de la proteína del canal TRPC6 para proteger el ganglio de la retina. células del daño inducido por el modelo IR de la retina Cuando los canales TRPC se inhiben, puede retroalimentar la traducción postranscripcional de BDNF. El proceso de modificación conduce a la acumulación de proBDNF y aumenta la tasa de unión al receptor p75NTR, induciendo así y promoviendo la muerte de. RGCs. Este descubrimiento ayuda a mejorar nuestra comprensión y la investigación sobre la patogénesis del glaucoma y proporciona intervención y tratamiento farmacológico.
Palabras clave: factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF). canal iónico; lesión por isquemia-reperfusión retiniana; neuroprotección;