¿Qué método se utiliza para detectar proteínas?

Los métodos actuales para medir las proteínas en los alimentos incluyen analizadores automáticos de proteínas, analizadores automáticos de infrarrojo cercano, espectrofotometría ultravioleta y determinación de nitrógeno Kjeldahl. Este artículo utiliza el reactivo de Nessler como reactivo cromogénico para determinar el contenido de proteínas en los alimentos. Tiene una amplia gama de aplicaciones y puede usarse para la detección de diversos alimentos y alimentos saludables. Este método se puede utilizar para medir estándares y muestras de control de calidad para obtener resultados satisfactorios y es más práctico para la medición rápida de muestras por lotes. Los resultados ahora se informan a continuación.

Materiales y métodos

Instrumentos y reactivos Espectrofotómetro UV WFZ800-D3 (Segunda Fábrica de Instrumentos Ópticos de Beijing). Análisis de ácido sulfúrico puro, sulfato de cobre, sulfato de potasio. (1) Reactivo de Nessler: pesar 100 g de yoduro de mercurio y 70 g de yoduro de potasio, disolverlos en una pequeña cantidad de agua destilada sin amoníaco, verter lentamente esta solución en 500 ml de solución enfriada de hidróxido de sodio al 32 % y agitar continuamente para diluir. 1 litro con agua destilada, guardar en una botella marrón, cerrar herméticamente con un tapón de goma y guardar en la oscuridad. (2) Solución madre estándar de sulfato de amonio (1,0 g/L): Pesar con precisión 0,4720 g de sulfato de amonio secado con ácido sulfúrico, agregar agua para disolverlo, transferirlo a un matraz volumétrico de 100 ml y diluir hasta la marca. Mezclar esta solución. y cada mililitro equivale a 1.0mgNH3 -N (estable por más de 1 año si se conserva en refrigerador a 10°C). (3) Solución estándar de sulfato de amonio (0,01 g/L): use una pipeta para extraer con precisión 1,0 ml de la solución madre estándar (1,0 g/L) en un matraz volumétrico de 100 ml, agregue agua para diluir hasta la marca y mezcle uniformemente. Equivalente a 10,0μg NH3-N.

Método

Para dibujar la curva estándar, tome 7 tubos colorimétricos de 25 ml y extraiga con precisión 0,01 g/L de solución estándar de sulfato de amonio 0,00, 0,5, 1,0, 3,0, 5,0, 7,0, respectivamente. 10,0ml (equivalente al estándar 0,0, 5,0, 10,0, 30,0, 50,0, 70,0, 100,0μg), agregar agua hasta la marca de 10ml, agregar 2ml de reactivo de Nessler a cada uno de los tubos de la serie estándar, mezclar y dejar actuar 10 minutos. luego transfiéralo a una cubeta de 1 cm. Dentro, use el tubo cero como referencia, mida la absorbancia a una longitud de onda de 420 mm, use el contenido del tubo estándar como abscisa (μg) y el valor de absorbancia correspondiente (A) como ordenada para dibujar. una curva estándar.

Medición de muestra Seleccione leche y leche en polvo como muestras de prueba. Pese con precisión 0,1 ~ 2,0 g de la muestra y colóquela en un matraz Erlenmeyer de 250 ml. Agregue 0,2 g de CuSO4, 1,0 g de K2SO4 y 10 ml de ácido sulfúrico. Caliéntelo a fuego lento hasta que todo el contenido esté carbonizado y deje de formar espuma. potencia de fuego hasta que el líquido se vuelva azul hasta que la cantidad restante de H2SO4 sea de aproximadamente 3 ml, déjelo enfriar a temperatura ambiente, agregue lentamente 10 ml de agua a lo largo de la pared de la botella, transfiéralo a un matraz volumétrico de 100 ml, lave el matraz Erlenmeyer 3 veces. con una pequeña cantidad de agua destilada, poner todo el líquido de lavado en el matraz aforado, enfriarlo. Agregar agua destilada hasta la marca y mezclar bien. Al medir, tome 0,5 ml, agregue agua hasta la marca de 10 ml y opere igual que la curva estándar. Haga una prueba en blanco al mismo tiempo.

Fórmula de cálculo

X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000

Donde: o g/100ml)

C-El contenido de nitrógeno en la solución de medición de la muestra después de deducir el blanco (μg)

V1-El volumen constante de la solución de digestión de la muestra (ml)

V2-Volumen de líquido digestivo para medición (ml)

m-Masa de muestra (g) o volumen (ml)

F-Factor de conversión de nitrógeno para proteína.

El contenido de nitrógeno de las proteínas es generalmente del 15% al ​​17,6%. Calcula el 16% y multiplícalo por 6,25 para obtener las proteínas, 6,38, la harina, 5,7, la carne y los productos cárnicos, 6,25. la soja son 5,71.

Resultados

2.1 Selección de la longitud de onda de medición: Después del desarrollo del color, se mide el tubo estándar con un contenido de nitrógeno de 30 μg a intervalos de 5 nm en el rango de longitud de onda de 400 a 440 mm. La longitud de onda de absorción máxima es de 420 mm.

Selección de la cantidad de reactivo cromogénico Añadir diferentes cantidades de reactivo de Nessler a tubos estándar con un contenido de nitrógeno de 30 μg y medir los resultados de absorbancia a una longitud de onda de 420 mm.

Básicamente no hay cambios en la absorbancia cuando la cantidad de cromógeno reactivo de Nessler agregado es de 1,5 a 3,0 ml. Para este método, se seleccionan 2,0 ml de reactivo de Nessler.

Tiempo de desarrollo del color y estabilidad: Después del desarrollo del color, se midió el tubo estándar con un contenido de nitrógeno de 30 μg a los 10, 30 min, 1, 2, 4 y 8 horas respectivamente. La absorbancia es estable y sin cambios entre 10 minutos y 8 horas después del desarrollo del color. Este método opta por medir después de 10 minutos de desarrollo del color.

Ecuación de regresión de la curva estándar: y=0,016X-1,5×10-3, r=0,9998, rango lineal óptimo 0,0~100μg.

Precisión: tome 6 muestras de leche y leche en polvo y repita la medición 6 veces según este método. Los resultados de la medición de precisión de la leche y la leche en polvo: los números promedio son 3,06 y 23,50 respectivamente; son ±0,029, respectivamente ±0,073; las desviaciones estándar relativas son 0,31% y 0,94% respectivamente.

La prueba de recuperación se realizó en las dos muestras utilizando el método de adición estándar (Tabla 1). Los resultados muestran que la tasa de recuperación es del 95,50 % al 99,44 %.

Comparación de los resultados de la determinación de los dos métodos: se utilizaron el método de determinación de nitrógeno GB/T5009.5-2003 Kjeldahl y este método. Los resultados mostraron que no hubo diferencias estadísticamente significativas en los resultados de medición de los dos métodos de análisis (t=0,026, P>0,05).

Determinación de materiales estándar Este método se utilizó para determinar 4 materiales estándar de proteínas diferentes y los resultados de la medición fueron consistentes con el contenido de los materiales estándar.

El método de determinación rápida de proteínas en alimentos utilizando el reactivo de Nessler como reactivo cromogénico es sencillo y rápido, y es adecuado para la determinación de muestras discontinuas. El compuesto amarillo producido por la reacción de NH3-N con el reactivo de Nessler en condiciones alcalinas es estable. Este método se comparó con el método de determinación de nitrógeno Kjeldahl estándar nacional, t = 0,026, P <0,05, n = 32, y no hubo diferencias significativas en los resultados de la determinación de los dos métodos. El rango de determinación es amplio, el rango lineal es de 0,0 a 100,0 μg; la precisión es alta; la desviación estándar relativa es de 0,31% a 0,94%, la tasa de recuperación es buena y la tasa de retorno estándar es de 95,50% a 99,44%. Los resultados de la medición de materiales estándar utilizando este método son consistentes y los resultados de la medición de muestras utilizadas para el control de calidad son satisfactorios. Este método tiene instrumentos y reactivos simples, es fácil de popularizar a nivel de base y favorece la popularización y aplicación.