Conferencia de divulgación científica | ¿Cuánto sabes sobre cfDNA?
Los ácidos nucleicos fragmentados en forma de "escaleras de ADN" producidas durante la lisis celular activa (también llamada apoptosis) tienen básicamente un tamaño de entre 150 y 200 pb. El cuerpo humano es un sistema circulatorio grande y complejo, que funciona una y otra vez. Además de la gran circulación en todo el cuerpo humano, también existen "pequeñas circulaciones" en varias partes del cuerpo humano. En pocas palabras, es el ciclo de estados de reemplazo de varios órganos del cuerpo humano. En circunstancias normales, el cuerpo humano renovará el 98% de las células del cuerpo en medio año, lo que significa que las células de nuestro cuerpo mueren constantemente y cada día se generan nuevas células.
Lisis celular pasiva - Existen muchas formas de lisis, que pueden provenir de una necrosis tisular provocada por estimulación física o química externa, o del efecto letal del propio sistema inmunológico sobre las células. La diferencia es que los ácidos nucleicos producidos por este proceso son muy grandes, acercándose al tamaño del ADN genómico.
Método 1: Fenol-Cloroformo
Principio: Utilice el método de que el ADN del ácido nucleico es insoluble en disolventes orgánicos para separar el ADN de otras impurezas.
Ventajas: bajo coste; bajos requisitos de equipamiento.
Desventajas: operación engorrosa; baja tasa de recuperación; muchos residuos de inhibidores contienen ingredientes tóxicos.
Método 2: Columna de gel de sílice
Principio: El ácido nucleico se combina con la membrana de gel de sílice en condiciones de alto contenido de sal, se eluye de la membrana de gel de sílice en valores bajos de sal y pH altos. y se centrifugan los tubos.
Ventajas: alta pureza; menor coste.
Desventajas: se requieren múltiples centrifugaciones de alta velocidad y hay muchos pasos operativos; succión de presión negativa, operación abierta, baja eficiencia y fácil formación de contaminación cruzada.
El la columna de adsorción se bloqueará; tasa de recuperación Baja, pérdida alta, no adecuada para la extracción de fragmentos pequeños; las condiciones de almacenamiento de diferentes reactivos son inconsistentes y fáciles de perder;
Método 3: Método de perlas magnéticas
Principio: Las perlas magnéticas de nanosílice superparamagnéticas refinadas adsorben específicamente ácidos nucleicos libres en la sangre en condiciones de solución salina, y luego las partículas adsorbidas en ácidos nucleicos se Las perlas magnéticas se transfirieron a un lugar bajo en sal y se eluyeron.
Ventajas: alta pureza; alta tasa de recuperación, también puede purificar fragmentos pequeños y puede funcionar automáticamente.
Desventajas: El coste de los reactivos importados es elevado.
1. Detectar el tamaño del fragmento de cfDNA.
a) Detección mediante electroforesis en gel, pero no puede detectar con precisión el tamaño del fragmento.
B) Se utiliza qPCR para la detección, pero solo puede detectar sitios preseleccionados y no es adecuado; para el análisis del genoma completo;
c) Utilice microscopía electrónica para la detección, pero requiere mucho tiempo, trabajo y baja eficiencia;
d) Utilice a gran escala. plataformas de secuenciación para la detección;
2. Relacionado con la detección molecular de CFDNA
La detección se realiza calculando el puntaje de protección en ventana (wps), es decir, el tamaño del fragmento = el número de fragmentos de ADN que abarcan 120 pb en un punto especial en el genoma: el número de fragmentos con puntos finales. Está relacionado con la distancia de los nucleosomas. Podemos inferir el origen del cfDNA a partir de la distancia entre los nucleosomas.
3. Propósito de la detección
a) Al detectar el tamaño del cfDNA, podemos saber qué tipo de mecanismo de muerte celular se produce mediante: ~~10000 pb de cfDNA se produce mediante necrosis celular. de; 140-200 pb de cfDNA producido por apoptosis.
313-798 pb es el cfDNA de mujeres embarazadas;
b) Detección de señales moleculares relacionadas con el cfDNA, como la metilación, la distancia del nucleosoma puede rastrear su origen tisular;
c) Detección del Los cambios de tipo y cantidad de secuencias específicas de cfDNA pueden determinar el cáncer y las enfermedades relacionadas.
El CfDNA en sangre tiene un importante valor potencial en el diagnóstico precoz, el pronóstico y el seguimiento de enfermedades. Sus aplicaciones médicas específicas generalmente incluyen los siguientes aspectos:
a) Diagnóstico prenatal
b) Puede usarse para el análisis de enfermedades y la observación de la eficacia de enfermedades no tumorales, como las enfermedades inmunes; ;
c) Se utiliza para análisis relacionados con tumores.
De las tres aplicaciones anteriores, destaca su valor en el análisis de tumores. Aunque el análisis del ADNcf en sangre aún no se ha incluido como un indicador de detección clínica necesario, miles de artículos de investigación y una gran cantidad de datos de ensayos clínicos de fase I y fase II respaldan firmemente el enorme valor de aplicación de esta nueva tecnología en la prevención y el tratamiento de tumores. :
a) Diagnóstico temprano de tumores
b) Determinación de planes de tratamiento de tumores
c) Observación de la eficacia del tumor; >d ) Evaluación del pronóstico tumoral;
e) Análisis de riesgo de metástasis tumoral;
f) Monitoreo de la recurrencia tumoral.
Wei Yi|Redacción publicitaria