Extraiga las proteínas de los lisados ​​de células IP y Western de Beyotime y agregue 100 µl a una placa de 6 pocillos. ¿Cuál es la concentración final de proteína?

Aunque nunca he usado Blue Sky, personalmente recomiendo tomar una pequeña muestra para medir la concentración de proteínas, como usar Nanodrop o algo así, usando solo unos pocos microlitros. De lo contrario, todos los juicios carecen de fundamento y, a veces, parecen bastante engañosos.

O sacar un poco y hacer electroforesis para ver qué pasa con el pegamento.

Si te preocupa la baja eficiencia de lisis, puedes añadir más tampón de lisis, pero en este caso la concentración de proteínas será menor.

Si crees que la concentración es baja porque no hay banda en el IP, se recomienda hacer WB, o hacer algunas muestras de agujeros más y hacer un IP antes de mirarlo. Debido a que Ip no sólo está relacionado con la escisión, sino también con la capacidad de unión y la especificidad del anticuerpo, es difícil de juzgar.